HbA1c - Turbidimetric - Linear

HbA1c - TurbidimetricREF 3155005 REF 31560051 x 40 mL 1 x 125 mLCONTENIDOCONTENIDOR1.Reactivo 1 x 30 mL R1. Reactivo 1 x 125 mLR2a. Reactivo 1 x 9,5 mLR2b. Reactivo 1 x 0,5 mLSólo para uso diagnóstico in vitroFUNDAMENTOEl método utiliza la reacción antígeno-anticuerpo para ladeterminación directa de la hemoglobina A1c (HbA1c) ensangre total. La hemoglobina total y la HbA1c compiten por laadsorción a partículas de latex (R1). La adición de unanticuerpo monoclonal anti-HbA1c humana (R2), origina elcomplejo latex-HbA1c–anti-HbA1c humana que es aglutinadoen presencia de anticuerpo policlonal de cabra anti-IgG deratón. La cantidad de aglutinación formada es proporcional ala concentración de HbA1c en la muestra y puede ser medidapor turbidimetria.R1R2aR2bR1COMPOSICION DE LOS REACTIVOSLátex. Particulas poliestireno en un tampónapropiado, pH 8,0 +/- 0,2Anticuerpo A. Anticuerpo monoclonal anticen tampón apropiado, sodio azida 0,9 g/L,HbA1Anticuerpo B. Anticuerpo policlonal IgG decabra anti-IgG de ratón en tampón apropiado,sodio azida 0,9 g/L.Reactivo de Lisis. Ref: 3156005 Tampón,sodio azida 0,9 g/LComponentes opcionales:HbA1c Calibrador. (4 x 0,5 mL) Ref: 39550054 niveles de calibrador de HbA1c liofilizados.Hemoglobina humana. Estabilizantes.HbA1c Control. (2 x 0,5 mL) Ref: 3955010 2niveles de control de HbA1c liofilizados.Hemoglobina humana. Estabilizantes.Precauciones: Los reactivos del kit contienen azida sódica0,95 g/L. Evitar el contacto con piel y mucosas.R1R2PREPARACION DE LOS REACTIVOSListo para su uso. Mezclar suavemente antes deusar.Verter totalmente el contenido del vial R2b en el vial R2a.Mezclar. Estable 30 días a 2-8ºC.ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD1. Todos estos reactivos son estables hasta la fecha decaducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando semantienen cerrados a 2-8ºC y se evita la contaminacióndurante su uso. No usar los reactivos una vezcaducados. No intercambiar reactivos de lotes distintos.Los viales una vez abiertos, son estables 1 mes a 2-8ºC.HbA1c - TurbidimétricoTurbidimetría Látex2. Indicadores de deterioro: Presencia de partículas y turbidez.MUESTRASSangre venosa recogida en EDTA (Nota 1).1. Dispensar 1 mL de Reactivo de Lisis en tubos correctamenteidentificados (Nota 2). Controles, muestras.2. Dispensar 200 µL de sangre (muestra o control) en elcorrespondiente tubo. Mezclar suavemente.3. Incubar 5 minutos a temperatura ambiente hasta obtener unalisis completa de los hematíes. Estable 10 días a 2-8ºC.EQUIPO ADICIONAL- Baño de agua a 37ºC.- Espectrofotómetro o fotómetro con cubeta termostatizable a37ºC para lecturas a 600 ± 20 nm.CALIBRACIONBlanco: Hacer el Blanco de Reactivo con ClNa 9 g/L.Calibradores: Usar los 4 niveles de HbA1c Calibrador. UsarClNa 9 g/L como calibrador 0.TECNICAProcedimiento preliminarPrecalentar los reactivos y el fotómetro (portacubetas) a 37 ºC.Procedimiento analítico (Nota 3).1. Ajustar el cero del instrumento a 600 nm con agua destilada.2. Pipetear en una cubeta:Latex (R1)3. Incubar 3-5 minutos a 37ºC.4. Pipetear:0,7 mLMuestra / Calibrador / ClNa 9 g/L (Blanco) 20 µL5. Incubar 5 minutos a 37ºC.6. Pipetear:Anticuerpo (R2)0,250 mL7. Mezclar e incubar at 37ºC durante 5 minutos. Leer la absorbanciaa 600 nm.CálculosCalcular la diferencia de absorbancias:( A Calibrador - A Blanco )QUALITY SYSTEM CERTIFIEDISO 9001 ISO 13485LINEAR CHEMICALS S.L. Joaquim Costa 18 2ª planta. 08390 Montgat, Barcelona, SPAINTelf. (+34) 934 694 990 Fax. (+34) 934 693 435. website www.linear.es

de cada punto de la curva de calibración y representar en - Precisión.papel milimetrado las diferencias de absorbanciaMediaDE (%) CV (%)calculadas frente a las concentraciones de HbA1c de los(µg/L)calibradores. La concentración de HbA1c de la muestra se Intra-ensayo 4,76 0,06 1,28calcula por interpolación de su diferencia de absorbanciasN = 2 7,29 0,08 1,10(A muestra – A Blanco) en la curva de calibración. 1,90 0,16 1,46CONTROL DE CALIDADSe recomienda utilizar Controles de HbA1c (ref: 3955010)para controlar los ensayos tanto en procedimiento manualcomo en automático.Cada laboratorio debería establecer su propio Control deCalidad y establecer correcciones en el caso de que loscontroles no cumplan con las tolerancias exigidas.VALORES DE REFERENCIALa siguiente tabla indica los valores discriminantesestablecidos por el Diabetes Control and Complications TrialResearch Group (DCCT) y que han sido aceptados comoreferencia de la población no-diabética y para la evaluacióndel grado de glucosa en sangre en el control de pacientesdiabéticos2,5 .DCCT / NGSP IFCC Grado de ControlInter-ensayo 4,72 0,06 1,27N = 2 7,36 0,08 1,091,00 0,17 1,55- Exactitud. 40 muestras humanas se ensayaron con estemétodo comparativamente al método automático de HPLC(Toshoh). Los resultadso de la comparación muestran:Coeficiente de correlación = r = 0,988Ecuación de la recta: y = 1,050 x – 0,484 (Sxy = 0,332)- Interferencias. La bilirrubina (50 mg/dL), el ac. ascórbico(50 mg/dL), los triglicéridos (200 mg/dL), la hemoglobinacarbamilada (7,5 mmol/L), la hemoglobina acetilada (5,0mmol/L), la uremia y productos lábiles intermedios (basesde Schiff), no interfieren. Variantes de hemoglobina HbA2,y HbC y Hbs no interfieren en la valoración. Otrashemoglobinas raras como la HbE, no se han estudiado.Otras sustancias pueden interferirNOTAS4,0 – 6,0 2,0 – 4,2 No Diabetico 1. HbA1c en sangre total recogida en EDTA es estable 16,0 – 6,5 4,2 – 4,8 Objetivosemana a 2-8ºC.2. Son aceptables los tubos de vidrio o plástico.6,5 – 8,0 4,8 – 6,4 BuenControl 3. Este ensayo permite ser adaptado a distintos instrumentos> 8,0 > 6,4 Actuación sugeridaCada laboratorio deberia establecer sus propios valores dereferencia (Nota 4 y 5).SIGNIFICADO CLINICOHbA1c es el resultado de la condensación irreversible de laglucosa en el residuo N-terminal de la cadena B de lahemoglobina A. La concentración de HbA1c es directamenteproporcional a la concentración de glucosa de la sangre, yrepresenta los valores integrados de glucosa durante unperiodo de tiempo de 6 a 8 semanas. El valor de HbA1c esindependiente de las fluctuaciones diarias de laconcentración de glucosa y no se ve afectado ni por elejercicio físico ni por la ingestión de comida reciente.La determinación de HbA1c es un buen complemento delseguimiento del control de glicemia en pacientes diabéticos,aunque no se considera adecuado para el control de ladiabetes mellitus. Cuanto más elevado es el valor de HbA1c,menor es el control de glicemia. El proceso refleja elpromedio de exposición de la hemoglobina a la glucosadurante un periodo largo de tiempo.El nivel de HbA1c en pacientes diabéticos acostumbra ser 2 o3 veces superior que en individuos sanos1-4 .automáticos. Cualquier adaptación a un instrumentodeberá ser validada con el fin de demostrar que secumplen las características analíticas del método. Serecomienda validar periódicamente el instrumento.Consultar con su distribuidor para cualquier dificultad en laadaptación del método.4. Los resultados de HbA1c en pacientes diabéticos, debeninterpretarse individualmente. Esto significa que el pacientedebe monitorizarse consigo mismo. Existe un periodo de 3a 4 semanas antes de que la HbA1c refleje cambios delnivel de la glucosa en sangre.5. El diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con losresultados de un único ensayo, sino que debe considerarseal mismo tiempo los datos clínicos del paciente.6. La linealidad del ensayo depende de la relación muestra/reactivoy analizador utilizado. Disminuyendo el volumen de muestra, seaumenta el límite superior de linealidad, aunque se reduce lasensibilidad.11 .REFERENCIAS1. Trivelli LA at al. New Engl J Med 1971; 284: 353.2. Gonen B and Rubisntein AH. Diabetology 1978; 15: 1.3. Gabby KH, at al. J Clin Endocrinol Metab 1977; 44: 859.4. Bates HM. Lab Mang 1978; vol 16.5. Tietz NW. Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia WB.Saunders Company 1999: 794-795.6. Little RR, et al. Clin Chem 1986;32: 358-360.CARACTERISTICAS ANALITICAS 7. Fluckiger, R et al. New Eng J Med 1981; 304: 823-827.8. Nathan DM, et al. Clin Chem 1989; 35: 93-97.9. Engbaek F, et al. Clin Chem 1989; 35: 93-97.- Rango de medida. 2,0% - 16%, en las condiciones descritasdel ensayo (Nota 6). Muestras con valores superiores debendiluirse 1/2 en ClNa 9 g/L y ensayarse de nuevo.- Sensibilidad analítica. 0,073 Ab / 1,0% HbA110.American Diabetes Association: Clinical PracticeRecommendations (Position Statement). Diabetes Care 2001;Suppl 1: S33-S55.11.Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests. 3th ed.AACC Press (1997).T3155-01/0903R1.casQUALITY SYSTEM CERTIFIEDISO 9001 ISO 13485LINEAR CHEMICALS S.L. Joaquim Costa 18 2ª planta. 08390 Montgat, Barcelona, SPAINTelf. (+34) 934 694 990 Fax. (+34) 934 693 435. website www.linear.es