Lezione Immunoematologia e trasfusione [modalità ... - Aulett@'99
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Il locus AB0 presenta 4 alleli: A1, A2, B, 0 Ciò<br />
comporta l’esistenza di 6 fenotipi e 10 genotipi.
• LE SPECIFICITÀ ABH SONO LEGATE ALLA COMPONENTE SACCARIDICA E<br />
AL TIPO DI LEGAMI CHE QUATTRO ZUCCHERI ASSUMONO SULLA PARTE<br />
TERMINALE DI UNA CATENA SACCARIDICA DEFINITA SOSTANZA DI BASE<br />
SULLA QUALE SI HA LA BIOSINTESI DEGLI ANTIGENI ABH, MA ANCHE DI<br />
ALTRI COME I LEWIS, P, I e i.<br />
GENE<br />
H<br />
A<br />
B<br />
GLYCOSYL<br />
TRASFERASE<br />
L-Fucosyltransferase<br />
N-Acetyl-galactosaminyltransferase<br />
D- Galactosyltransferase<br />
IMMUNODOMINANT<br />
SUGAR<br />
L-Fucose<br />
N- Acetylgalactoseamine<br />
D-Galactose
L’assenza degli antigeni A e B nel fenotipo O<br />
derivano dalla delezione di una singola base<br />
nucleotidica nella porzione del DNA codificante le<br />
transferasi e responsabile dello spostamento della<br />
cornice di lettura con conseguente sintesi di una<br />
proteina sprovvista di attività transferasica.<br />
ALLELI<br />
Base n°<br />
258<br />
523<br />
700<br />
793<br />
Legenda<br />
A<br />
G=guanina C=citosina A=adenina<br />
G<br />
C<br />
G<br />
C<br />
Differenze nucleotidiche riscontrate fra gli alleli ABO<br />
B<br />
G<br />
G<br />
A<br />
A<br />
O<br />
Delezione<br />
C<br />
G<br />
C
Gli antigeni eritrocitari o gruppi sanguigni<br />
• polisaccaridici<br />
•AB0<br />
•Lewis<br />
•P<br />
•H<br />
•I<br />
• proteici<br />
•Rh
Proteine<br />
Famiglia delle proteine Rh<br />
RhD<br />
RhCcEe<br />
RhAG<br />
Proteine accessorie<br />
LW<br />
IAP<br />
GPB<br />
Band 3<br />
Antigeni<br />
D<br />
Rh protein family<br />
Ce,CE,ce,cE<br />
LW<br />
Non conosciuta<br />
‘N, ‘S, s, U<br />
Diego<br />
Localizzazione genica<br />
1p36.13-p34.3 180<br />
1p36.13-p34.3 180<br />
6p21.1-p1117,75,174 6p21.1-p11<br />
19p13.3 181<br />
3q13 85<br />
4q28-q31<br />
17q12-q21 182<br />
Avent N., Blood 2000
Rh protein family<br />
Il 40% di omologia indica una relazione<br />
ancestrale<br />
12 domini transmembrana con le<br />
estremità N-terminale e C-terminale<br />
rivolti verso la porzione<br />
intracitoplasmatica<br />
I primi 41 aminoacidi all’estremità N-<br />
terminale sono identici<br />
RhD differisce da RhCE solo per 30-35<br />
aa lungo l’intera sequenza della<br />
proteina.<br />
Nonostante questa omologia le<br />
proteine RhCcEe non esprimono<br />
l’antigene D e viceversa<br />
Avent N., Blood 2000
Soggetti Rh Rh-negativi negativi<br />
Nella popolazione Caucasica i soggetti RhD- hanno la<br />
delezione del gene RhD<br />
In altre popolazioni come i Giapponesi o gli Africani il<br />
fenotipo D- non è legato alla perdita del gene.<br />
Avent N., Blood 2000
Sistema LEWIS<br />
Gli Ag sono correlati con quelli AB0; i<br />
G.R.acquisiscono il fenotipo adsorbendoli<br />
dal plasma; il gene è distinto ma correlato<br />
con quello del carattere di “secretore”<br />
Sistema P<br />
La maggioranza degli uomini è P1 + La maggioranza degli uomini è P1 ; le + ; le<br />
reazioni trasfusionali sono rare ma gravi<br />
Sistema MN<br />
Gli Ag sono glicoforine; gli Ac anti-M o N<br />
umani sono rari; se IgG→eritroblastosi
Sistema KELL e Sistema Duffy<br />
Possono causare reazioni<br />
trasfusionali gravi, evitabili con<br />
la prova crociata maggiore<br />
Gli antigeni K e Fy(a) / (b)<br />
sono buoni immunogeni ed<br />
evocano la produzione di<br />
anticorpi di isotipo IgG
I principali obiettivi del trasfusionista sono<br />
due:<br />
il primo è prevenire la reazione<br />
trasfusionale identificando i pazienti<br />
immunizzati e fornendo loro sangue<br />
compatibile;<br />
il secondo è prevenire la produzione di<br />
anticorpi, scegliendo i donatori più<br />
simili, come caratteristiche gruppoematiche,<br />
al paziente.
COMPATIBILITY TESTING<br />
What is Compatibility Testing?<br />
• Pre Transfusion Protocol to insure the<br />
Patients health and the survival of<br />
transfused red cells. It includes:<br />
– Patient Identification, Labeling, Collection<br />
of patient sample, ABO, Rh, Crossmatch<br />
search for irregular antibodies.
PROVE DI COMPATIBILITA’<br />
Prove crociate<br />
IL SIERO DEL PAZIENTE VIENE INCUBATO A<br />
37C°CON I GLOBULI ROSSI DELLE UNITA’<br />
DI SANGUE DA TRASFONDERE<br />
CONSENTE DI RILEVARE:<br />
L’ INCOMPATIBILITA’ PER IL SISTEMA ABO<br />
ED EVENTUALI Ab DIRETTI CONTRO<br />
Ag a FREQUENZA MOLTO BASSA
Steps In Compatibility Testing<br />
Review available Recipient Records FOR:<br />
– PREVIOUS ABO & Rh<br />
– Any PRIOR UNEXPECTED Antibodies<br />
– Any PRIOR ADVERSE REACTIONS to<br />
transfusion<br />
Correct identification of Donor Unit by<br />
Confirming<br />
1. The unit ID with the ID on the donor<br />
unit’s records<br />
2. The unit’s ABO & Rh on the record for<br />
consistency with that of the patient
Gli anticorpi verso gli antigeni eritrocitari<br />
• anticorpi naturali<br />
• anticorpi irregolari
Comprendono: l’anti-A dei soggetti B, l’anti B dei<br />
soggetti A e l’anti-A, anti-B e anti-AB dei soggetti 0.<br />
Oltre questi ricordiamo, gli anticorpi irregolari anti-A1<br />
che si ritrovano nei soggetti con fenotipo A2 e A2B e<br />
l’anti-H che si può ritrovare in alcuni soggetti A1, A1B, B<br />
ed in tutti i soggetti con fenotipo Bombay.<br />
Anti-A1: i sieri dei soggetti B e 0 contengono una miscela<br />
di anti-A e anti-A1. L’anti-A1 è anche presente nel 2% dei<br />
soggetti A2 e nel 25% nei soggetti A2B<br />
Anti-H: esistono 3 tipi di anti-H, uno attivo a 37°C che si<br />
osserva nei soggetti con fenotipo Bombay, uno “freddo”<br />
con optimum termico a 4°C (nei soggetti A1, A1B o B non<br />
secretori di sostanze gruppo specifiche) e uno che viene<br />
formato come autoanticorpo.
Anticorpi Irregolari<br />
Per “ricerca di anticorpi irregolari”, si<br />
intende quell’insieme di procedure<br />
atte alla evidenziazione della<br />
presenza di anticorpi “inattesi” nel<br />
siero di un paziente.<br />
Ricerca di anticorpi:<br />
1. Prove di compatibilità<br />
2. Coombs diretto<br />
3. Prova indiretta del gruppo sanguigno
Test di Coombs<br />
•Test di emoagglutinazione in vitro utilizzato<br />
per evidenziare anticorpi eritrocitari<br />
•Test diretto<br />
•Test indiretto
ANTIGRAM<br />
L’ANTIGRAM di un pannello eritrocitario<br />
ad 11 cellule costituito da aliquote di<br />
emazie del gruppo 0 provenienti da<br />
singolo donatore selezionate per la loro<br />
composizione antigenica ci mostra i più<br />
frequenti anticorpi che si possono trovare<br />
nel siero di un paziente.
REAZIONI TRASFUSIONALI<br />
IMMUNOLOGICHE<br />
emolitiche<br />
febbrili non emolitiche<br />
Allergiche (cutanee e<br />
anafil.)<br />
edema polmonare non<br />
cardiogeno (TRALI)<br />
ACUTE<br />
NON<br />
IMMUNOLOGICHE<br />
contaminazione<br />
batterica<br />
sovraccarico<br />
circolatorio<br />
emolisi fisica/chimica<br />
danni da conservazione
EDEMA POLMONARE NON CARDIOGENO<br />
transfusion related acute lung<br />
injury (TRALI)<br />
Grave sindrome respiratoria, caratterizzata dal<br />
classico quadro radiologico e sintomatologico<br />
senza insufficienza cardiaca, che interviene<br />
durante o entro 6 ore dal termine della<br />
<strong>trasfusione</strong> con una frequenza variabile 1:5000 -<br />
1:190000 eventi trasfusionali (le forme lievi<br />
frequentemente non vengono diagnosticate)<br />
E’ causato da una reazione tra leucoagglutinine del<br />
donatore e leucociti del ricevente con formazione di<br />
aggregati leucocitari che, intrappolati nel microcircolo<br />
polmonare, ne alterano la permeabilità vasale
REAZIONI TRASFUSIONALI<br />
IMMUNOLOGICHE<br />
emolitiche ritardate<br />
alloimmunizzazione<br />
leucociti piastrine<br />
porpora post-trasfusionale<br />
da HPA1-a<br />
RITARDATE<br />
NON IMMUNOLOGICHE<br />
emosiderosi indotta dalle<br />
trasfusioni<br />
trasmissione malattie<br />
infettive (virali)
REAZIONI IMMUNOLOGICHE<br />
EMOLITICHE RITARDATE<br />
SINTOMI<br />
febbre, ittero, ANEMIA inattesa (7-10gg dopo<br />
l’infusione) puo’ essere necessaria un’altra <strong>trasfusione</strong><br />
talvolta asintomatiche<br />
EZIOLOGIA<br />
EZIOLOGIA<br />
anticorpi IgG risposta anamnestica<br />
• Rh,Kell,Duffy, Kidd, MNS<br />
anticorpi siero - eluato
Complicanze infettive<br />
• virali:<br />
epatite B, C<br />
HIV1-2<br />
Mononucleosi infettiva<br />
CMV<br />
HTLV 1 -2<br />
Parvovirus<br />
•batteriche<br />
endogene (dal sangue del donatore)<br />
treponema,brucella,rickettsia,yersinia,campylobacter,staph.aureus,<br />
strept.viridans<br />
esogene (dalla cutedel donatore o dall’ambiente)<br />
staph.epidermidis,micrococcus,sarcina,pseudomonas,flavobacterium<br />
bacillus<br />
•parassiti<br />
•malaria,tripanosoma,toxoplasma,babesia,leishmania
• La disponibilità di sangue è limitata<br />
• da ciò deriva la necessità di stabilire i<br />
criteri per un uso congruo di tale<br />
risorsa
Pazienti di competenza chirurgica<br />
Abitualmente viene richiesta una quantità di sangue eccedente le reali necessità, con<br />
conseguente sequestro delle unità non utilizzate da parte dei reparti per almeno<br />
due o tre giorni e conseguente invecchiamento del sangue stesso e quindi a<br />
rischio di scadenza. La soluzione a questo problema è l’assegnazione “a<br />
disposizione” e la prova rapida di compatibilità.<br />
Pazienti di competenza medica<br />
Ai pazienti di competenza medica è raccomandata la seguente strategia:<br />
1. Tipizzazione eritrocitaria per il maggior numero di antigeni prima di iniziare le<br />
trasfusioni.<br />
2. Prova di compatibilità per ogni unità assegnata.<br />
3. Ricerca di anticorpi irregolari.<br />
4. Controllo autologo.<br />
Donne in gravidanza<br />
Devono essere sottoposte alle seguenti indagini:<br />
1. Tipizzazione eritrocitaria.<br />
2. Ricerca di allo-anticorpi irregolari.<br />
3. Nel caso di compatibilità A B 0 eventualmente cross-match con le emazie del<br />
marito.<br />
Donatori di sangue<br />
La ricerca di anticorpi irregolari si esegue per i seguenti motivi.<br />
Evidenziare la presenza di anticorpi.<br />
Nel caso in cui sangue di gruppo 0 venga impiegato per un ricevente di altro<br />
gruppo.
GLI EMOCOMPONENTI<br />
Gli emocomponenti sono i prodotti della<br />
separazione degli elementi costituitivi del sangue<br />
e vengono ottenuti sia da una donazione tradizionale di sangue<br />
intero sia da una donazione mediante aferesi con separatore<br />
cellulare.<br />
Gli Gli emocomponenti emocomponenti si si distinguono distinguono in in due due grandi<br />
categorie:<br />
USO TRASFUSIONALE<br />
USO TOPICO
Emocomponenti<br />
Emocomponenti: Classificazione<br />
Per uso<br />
Trasfusionale<br />
Per uso<br />
Topico<br />
Concentrati eritrocitari<br />
convenzionali o modificati<br />
Concentrati piastrinici<br />
convenzionali o modificati<br />
Plasma fresco congelato<br />
Concentrati leucocitari<br />
Concentrati di c. staminali da<br />
sangue periferico<br />
Sangue placentare<br />
Colla di fibrina<br />
Gel piastrinico
Emocomponenti: Uso più frequente<br />
Preparazione di C.E. ; P.F.C. ; C.P. (da Buffycoat)<br />
Partendo da una donazione di 450 ml di sangue intero in sacca quadrupla<br />
Prima centrifugazione (a.T.A.) Alta velocità<br />
Parte superiore della<br />
sacca<br />
Strato intermedio tra il<br />
plasma e i globuli rossi<br />
Parte inferiore<br />
della sacca<br />
Emocomponenti Caratteristiche<br />
Plasma povero di<br />
piastrine<br />
Buffy - coat<br />
Globuli Rossi<br />
200 200-250 250 ml di plasma<br />
(contiene la maggior parte<br />
del plasma da congelare.)<br />
50 ml Contenenti:<br />
10% di globuli rossi 70% di<br />
leucociti 80% delle piastrine<br />
160 160-180 180 ml di globuli rossi + 100<br />
ml di S.A.G.M (contengono circa<br />
il 30 30% % di leucociti) leucociti
Seconda Centrifugazione (a.T.A.) Bassa velocità<br />
Parte superiore della<br />
sacca<br />
Parte inferiore<br />
della sacca<br />
Emocomponenti Caratteristiche<br />
Concentrato Piastrinico<br />
Da Buffy Buffy-coat coat<br />
1) Da singolo B.C.<br />
2) Da pool di 44-6<br />
6 B.C. B.C<br />
B.C. povero di<br />
piastrine<br />
1) ) 50 ml contenenti:<br />
50 50-60 60 x 10 109 50 50-60 60 x 10 piastrine<br />
9 piastrine<br />
2) 350 350-400 400 ml contenenti:<br />
280 280-360 360 x 10 109 piastrine<br />
Contiene circa il 10 10% % di globuli<br />
rossi e il 70 70% % di leucociti donati
CONCENTRATI ERITROCITARI E PIASTRINICI<br />
MODIFICATI<br />
Concentrati Eritrocitari<br />
Modificati<br />
Concentrati Piastrinici<br />
Modificati<br />
C. Eritrocitari leucodepleti<br />
C. Eritrocitari lavati<br />
C. Eritrocitari irradiati<br />
C. Eritrocitari congelati<br />
C. Eritrocitari per uso pediatrico<br />
C. Eritrocitari “universali”<br />
C. Piastrinici leucodepleti<br />
C. Piastrinici lavati<br />
C. Piastrinici irradiati<br />
C. Piastrinici congelati
Quando si trasfonde ?<br />
• Emazie<br />
• Piastrine<br />
Chemioterapia<br />
Chemioterapia<br />
Trapianto<br />
Trapianto<br />
Anemia Aplastica Anemia Aplastica<br />
Mielodisplasie<br />
Mielodisplasie<br />
Insufficienza midollare<br />
Insufficienza midollare<br />
CID<br />
Trombocitopatie<br />
•Plasma<br />
CID<br />
HUS-TTP<br />
sovradosaggio di:<br />
anticoagulanti orali<br />
agenti trombolitici
In caso di emorragia acuta …..<br />
La <strong>trasfusione</strong> di emazie dovrebbe in teoria essere<br />
effettuata tanto rapidamente quanto è necessario per<br />
correggere il deficit di trasporto di ossigeno nella<br />
emorragia acuta<br />
una unità di emazie aumenterà il livello di emoglobina di<br />
1 g/dl in una persona di 70 chilogrammi (3-4 ml/kg di<br />
emazie concentrate).
TRASFUSIONE DI GLOBULI ROSSI NELL’ANEMIA CRONICA<br />
L’obiettivo della <strong>trasfusione</strong> di globuli rossi in questi pazienti è di ridurre gli<br />
effetti deleteri dell’anemia portando il tasso di emoglobina o l’ematocrito al di<br />
sopra del livello stabilito.<br />
Sintomi dell’anemia insorgono di solito quando il tasso di emoglobina scende al<br />
di sotto di 4.5-5 g/dL.<br />
I sintomi includono tachicardia, dispnea/tachipnea, sensazione di “testa vuota”,<br />
sincope, astenia od intolleranza allo sforzo muscolare, angina, cefalea,<br />
claudicatio ed affaticamento.<br />
I sintomi possono esordire precocemente (ad esempio con tasso di emoglobina<br />
di 7 g/dL) in pazienti con età avanzata e/o con ridotta funzionalità<br />
cardiorespiratoria.<br />
Pazienti con tasso di emoglobina superiore ad 8 g/dL raramente richiedono<br />
<strong>trasfusione</strong> di globuli rossi.
Indicazioni per la <strong>trasfusione</strong> di un<br />
Indicato per concentrato incrementare l’apporto eritrocitario<br />
di ossigeno ai tessuti :<br />
Hb < 8g/dl o Ht < 24%<br />
Hb < 9 g/dl in pazienti in programma per intervento<br />
Hb < 10 g/dl in paziente sintomatico per anemia in cardiopatia<br />
e/o pneumopatia<br />
Neonati con Hb
Note di buona pratica clinica<br />
Per valutare l’efficacia della <strong>trasfusione</strong> occorre<br />
valutare le modificazioni dei parametri ematologici<br />
e riportarli nella cartella clinica<br />
La quantità di CE da trasfondere può essere calcolata<br />
con la seguente formula :<br />
Corrected Count Increment<br />
Q. tà sangue da trasfondere = 251 x peso Pz. in Kg x<br />
l’incremento di Hb desiderato/Ht medio unità da<br />
trasfondere
Emazie congelate<br />
•Congelate entro 7 giorni dal prelievo<br />
Metodica ad “alto glicerolo”conservate da –60°C a -80°C<br />
Metodica a “basso glicerolo” conservate in vapori di azoto<br />
liquido a temperatura compresa tra -140°C e -150°C<br />
Possono essere conservate per 10 anni<br />
Scongelate, lavate e ricostituite, sospese in una soluzione<br />
fisiologica. Conservate tra +2 e +6 °C per non più di 24 ore<br />
CQ:<br />
Ht compreso tra 0,65 e 0,75%<br />
Hb >36g/unità<br />
Leucociti < 1x10 9
Concentrati piastrinici<br />
Indicati:<br />
Per il trattamento e profilassi delle emorragie dovute a carenza qualitativa<br />
o quantitativa delle piastrine<br />
Per i pazienti medici stabili e senza complicazioni il valore soglia è 10.000/<br />
µL<br />
Terapia dell’emorragia nei pazienti medici con piastrine 20.000/µL<br />
Per i pazienti chirurgici il valore soglia è 50.000/ µL<br />
Se il conteggio è compreso tra 50.000 e 100.000/ µL la <strong>trasfusione</strong> di<br />
piastrine è indicata solo in condizioni particolari (procedure a cielo<br />
coperto, neurochirurgia, campi operatori altamente vascolarizzati).<br />
CQ:<br />
Contenuto in piastrine = 45-85 x 10 9<br />
Plasma = 50-60 ml.<br />
Leucociti < 1x10 9<br />
Eritrociti
Non indicati:<br />
•Nelle piastrinopenie da eccessiva<br />
distruzione (porpora trombocitopenica<br />
idiopatica, porpora trombotica<br />
trombocitopenica, sindrome uremica-<br />
emolitica, coagulazione intravascolare<br />
disseminata)<br />
nella circolazione extracorporea e nella<br />
<strong>trasfusione</strong> massiva a scopo profilattico<br />
come profilassi se il conteggio è<br />
>10.000/microlitro e il paziente è in<br />
condizioni<br />
stabili
Trasfusione di Piastrine
Valutazione clinica della risposta<br />
alla <strong>trasfusione</strong> piastrinica<br />
Viene effettuata tramite la formula del corretto<br />
incremento (Correct Count Increment)<br />
CCI = incremento della conta piastrinica<br />
(migliaia/µL) x superficie corporea in mq /numero di<br />
piastrine trasfuse (x 1011 )<br />
La <strong>trasfusione</strong> viene considerata:<br />
efficace CCI >7500<br />
parzialmente efficace CCI 5000-7500<br />
inefficace CCI
Plasma per uso clinico<br />
•Prodotto da sangue intero o da aferesi di donatori periodici e volontari<br />
Congelato entro 6 ore dalla donazione<br />
Congelato in maniera uniforme, entro 1 ora<br />
Conservato per 24 mesi se stoccato a - 40°C Scongelato in bagno con continua<br />
agitazione a temperatura tra + 30° e + 37°C<br />
Utilizzato nel più breve tempo possibile, non oltre 24 ore se conservato tra 2°- 6°C<br />
CQ:<br />
Deve contenere almeno il 70% del contenuto originale di Fattore VIII<br />
Proteine totali > 50 g/L<br />
Assenza di anticorpi irregolari clinicamente significativi<br />
Emazie residuo < 6 x10 9<br />
Leucociti residuo
Change in INR/unit FFP<br />
Pretransfusion INR Predicts the<br />
0.9<br />
0.6<br />
0.3<br />
0<br />
-0.3<br />
-0.6<br />
-0.9<br />
0.1<br />
(0.0)<br />
Effect of FFP<br />
(0.0) (0.0) (0.1) (0.1)<br />
(0.4)<br />
1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 >1.6<br />
Pre-transfusion INR
Crioprecipitato<br />
•Costituito dalla frazione crioglobulinica del plasma<br />
fresco<br />
Scongelato lentamente a 2°- 6°C per 12 ore e<br />
concentrato ( per centrifugazione o sifonamento) in un<br />
volume finale di 10-20 ml<br />
Contiene fatt.VIII,fatt. di Von Willebrand, fibrinogeno,<br />
fatt.XIII e fibronectina<br />
CQ :<br />
Fatt.VIII ≥ 70% del contenuto di partenza
Indicazioni alla raccolta di<br />
sangue autologo.<br />
Tipo intervento<br />
Interventi di chirurgia vascolare<br />
maggiore<br />
Interventi a cuore aperto<br />
Protesi totale d’anca<br />
Protesi totale di ginocchio<br />
Interventi correttivi per scoliosi<br />
Prostatectomia radicale<br />
Placenta previa<br />
Gravidanza plurima<br />
Trapianto di fegato<br />
Predeposito<br />
Si<br />
Si<br />
Si<br />
Si<br />
Si<br />
Si<br />
Si<br />
Si<br />
Si<br />
Recupero<br />
Si<br />
Si<br />
Si<br />
No<br />
Si<br />
Si<br />
No<br />
No<br />
Si
Emocomponenti per uso non<br />
trasfusionale<br />
Gel di piastrine azione di stimolo sulla rigenerazione<br />
tessutale derivato dall’associazione del concentrato<br />
piastrinico ( fonte di fattori di crescita) con il<br />
crioprecipitato ( fonte di fibrinogeno, fibronectina e altri<br />
fattori procoagulanti)<br />
Colla di fibrina azione adesiva ed emostatica derivato da<br />
plasma (ricco fibrinogeno, fibronectina ed altre proteine<br />
plasmatiche con scarsa presenza di piastrine)<br />
Per essere utilizzati clinicamente devono essere attivati,<br />
utilizzando cloruro di calcio ( o gluconato di calcio) e<br />
trombina autologa o batroxobina<br />
Piastrine e plasma rappresentano una fonte autologa o<br />
omologa di fattori di crescita e proteine procoagulanti,<br />
clinicamente impiegabili (PRP)
L’AFERESI<br />
SEPARATORE A SEPARATORE A<br />
FLUSSO DISCONTINUO FLUSSO CONTINUO
Plasma<br />
Piastrine<br />
Monociti<br />
Linfociti<br />
Neutrofili<br />
Eritrociti<br />
L’AFERESI<br />
Densità<br />
g/cm 3<br />
1.026<br />
1.058<br />
1.062<br />
1.070<br />
1.082<br />
1.096<br />
Diametro<br />
2.5<br />
10.4<br />
6.5<br />
8.0<br />
5.5<br />
Volume µm 3<br />
16<br />
740<br />
230<br />
270<br />
87
L’AFERESI<br />
AFERESI PRODUTTIVA<br />
SINGLE COMPONENT MULTI COMPONENT<br />
PLT PFC GR - PLT<br />
PFC - PLT<br />
DOPPIA PLT<br />
GR - PFC<br />
DOPPIA GR
CELLULE STAMINALI DA SANGUE<br />
PERIFERICO<br />
Vengono raccolti da donatore mediante leucoaferesi dopo<br />
mobilizzazione nel torrente circolatorio con fattori di<br />
crescita GM-CSF. Per ottenere un numero adeguato di<br />
cellule CD 34 è necessario procedere afereticamente da 3 a 4<br />
volte il volume ematico (200 ml/kg di peso).<br />
Le cellule staminali da sangue periferico P.B.S.C.<br />
(Peripheral Blood Stem Stem Cell) vengono sospesi in<br />
una soluzione contenente un crioprotettore ( (DMSO DMSO) )<br />
e proteine ( (plasma plasma-albumina<br />
albumina) ) congelati e conservati<br />
a -180 180 °C C in fase gassosa di azoto.<br />
Devono essere trasfuse subito dopo<br />
scongelamento a 37 °C. C.
SANGUE PLACENTARE<br />
Contiene i progenitori emopoietici indispensabili ai fini<br />
del trapianto di midollo osseo sia autologo che<br />
allogenico ed è in grado di determinare un completo<br />
ripopolamento cellulare. Prelevato subito dopo la<br />
resezione del cordone ombelicale viene congelato nel<br />
più breve tempo possibile (in DMSO 10%). Viene<br />
conservato in azoto liquido a -140 °C fino a 15 anni .<br />
Volume sacca ≈: 60 ml; cellularità totali: >800*106 ;<br />
determinazioni in citofluorimetria delle cellule CD34<br />
Tipizzazione HLA. Tale volume però non consente<br />
nell’ adulto di di somministrare somministrare la dose dose minima<br />
cellulare raccomandato ( (20 20 milioni di cellule<br />
nucleate/kg di peso c o r p o r e o). Per ovviare a<br />
questi inconvenienti sono possibili programmi di<br />
espansione cellulare con aumenti in due settimane di<br />
circa 100 volte il numero di cellule staminali.