Protocollo diagnosi Monilinia fructicola.pdf - Strateco

Tabella 8. Ospiti inoculati artificialmente e non, utilizzati per i test diagnostici
molecolari.
INOCULI FRUTTI SAGGIATI N° di campioni
M. fructicola Pesca, pera, susina, mela 4
M. fructigena Pesca, pera, susina, mela 4
M. laxa Pesca, pera, susina, mela 4
Non inoculato Pesca, pera, susina, mela 4
Le infezioni artificiali del materiale ospite sono state condotte attraverso i passaggi di seguito
riportati:
- I frutti sono stati preliminarmente disinfettati con ipoclorito di sodio al 1% per 3’
- Dopo l’incubazione in ipoclorito di sodio i frutti hanno subito tre lavaggi: il primo con
acqua di rubinetto, il secondo con acqua bidistillata e il terzo con acqua bidistillata sterile
- Una volta asciutti, sotto cappa, ciascun frutto è stato lievemente reciso con la punta di un
bisturi sterile.
- Su ciascuna ferita è stato posto un tassello di micelio (5 mm di diametro) prelevato al
margine di colonie di Monilinia spp. di circa 5 giorni di età allevate su PDA a 20°C al buio.
- I frutti inoculati sono stati disposti in ambiente confinato, sterile e saturo di umidità
costituito da vaschette in alluminio contenenti carta bibula inumidita con acqua distillata
sterile e chiusi in bustine di plastica trasparenti.
- Il materiale inoculato è stato così incubato a temperatura ambiente fino alla comparsa dei
sintomi dell’infezione e delle fruttificazioni miceliari.
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