cache

More documents

Recommendations

Info

A B ภาพที่ 1 หลักการทํางานของ Pulsed-field gel electrophoresis ระบบ Contour-clamped homogeneous electric field ประกอบดวยชุดขั้วไฟฟา A และ B โดยเมื่อใหกระแสไฟฟาที่ ชุดขั้วไฟฟา A ดีเอ็นเอจะเคลื่อนที่จากขั้วลบไปทางดานขวาซึ่งเปนขั้วบวกดังแสดงในลูก ศรแรก เมื่อหยุดใหกระแสไฟฟาที่ชุดขั้วไฟฟา A และใหกระแสไฟฟาที่ชุดขั้วไฟฟา B ดีเอ็นเอจะกลับทิศทางและเคลื่อนที่จากขั้วลบไปขั้วบวก สลับทิศทางสนามไฟฟาเชนนี้ไป เรื่อยๆ ที่มา: Anonymous (1997) 9
PFGE ทุกระบบมีหลักการทํางานเหมือนกันแตออกแบบใหมีจํานวนและการจัดเรียงตัว ของขั้วไฟฟาแตกตางกันทั้งนี้เพื่อใหสามารถแยกแถบดีเอ็นเอที่มีขนาดใหญได การแยกและการ เคลื่อนที่ของโมเลกุลดีเอ็นเอในเทคนิค PFGE ขึ้นอยูกับปจจัยหลายอยาง ดังนี้ ระยะเวลาในการสลับทิศทางสนามไฟฟา (switching time หรือ pulse time) เนื่องจากการ แยกตัวออกของโมเลกุลดีเอ็นเอเปนสัดสวนโดยตรงกับเวลาที่ใชในการสลับทิศทางของสนามไฟ ฟากลาวคือ ดีเอ็นเอที่มีโมเลกุลขนาดใหญจะเคลื่อนที่ชากวาโมเลกุลขนาดเล็กเพราะตองใชเวลา นานเพื่อหมุนและยืดสายดีเอ็นเอภายใตสนามไฟฟา ดีเอ็นเอโมเลกุลใหญจึงใชเวลาในการสลับทิศ ทางมากกวาโมเลกุลขนาดเล็ก ดังนั้นการเลือกใชเวลาในการสลับทิศทางของสนามไฟฟาจึงควร พิจารณาใหเหมาะสมกับขนาดของโมเลกุลดีเอ็นเอ ระดับความตางศักย (voltage gradients) ระดับความตางศักย หมายถึง ระดับความแตกตาง ของศักยไฟฟาระหวางขั้วไฟฟาในกลองเจลทําใหเกิดการขับเคลื่อนของโมเลกุลดีเอ็นเอ ในการ เลือกใชระดับความตางศักยที่เหมาะสมนั้นควรทราบขนาดดีเอ็นเอโดยคราวๆ กอน ดีเอ็นเอที่มี ขนาดใหญไมสามารถแยกขนาดไดในสภาวะที่มีความตางศักยไฟฟาสูง ทั้งนี้ควรพิจารณาให สัมพันธกับเวลาที่ใชในการสลับทิศทางสนามไฟฟาดวย กลาวคือหากใชความตางศักยไฟฟาต่ําควร ใชเวลาในการสลับทิศทางสนามไฟฟาใหนานขึ้น ความเขมขนของเจล (agarose concentration) ความเขมขนของเจลเปนอีกปจจัยหนึ่งที่มีผล ตอความเร็วในการเคลื่อนที่และการแยกตัวของโมเลกุลดีเอ็นเอ การใชเจลอะกาโรสที่มีความเขมขน สูงทําใหขนาดรูพรุน (pore) ภายในเจลเล็กลงกวาเจลอะกาโรสความเขมขนต่ํา โมเลกุลของดีเอ็นเอ จึงเคลื่อนที่ผานรูพรุนไดชา ดังนั้นเมื่อเปลี่ยนความเขมขนของเจลอะกาโรสจึงควรเปลี่ยนเวลาที่ใช ในการสลับทิศทางสนามไฟฟาดวย โดยทั่วไปหากตองการแยกดีเอ็นเอขนาด 1-2,500 kb จะใชเจล อะกาโรสความเขมขน 1% แตหากตองการแยกดีเอ็นเอขนาดใหญกวานี้ควรใชเจลอะกาโรสความ เขมขน 0.7% หรือ 0.8% อุณหภูมิ (running temperature) การทํางานของเครื่อง PFGE นั้น ตองมีการไหลเวียนของ บัฟเฟอรตลอดเวลาเพื่อรักษาอุณหภูมิทั้งระบบใหเทากันตลอด โดยทั่วไป PFGE จะทําที่อุณหภูมิต่ํา ในชวง 4-15 o ซ ดีเอ็นเอจะเคลื่อนที่ไดเร็วที่อุณหภูมิสูงแตการกระจายตัวในการแยกขนาดของ โมเลกุล (resolution) จะลดลงตรงกันขามกับอุณหภูมิต่ําที่ดีเอ็นเอจะเคลื่อนที่ชาแตการแยกขนาด 10
Page 2: วิทยานิพนธ เ
Page 6 and 7: สารบัญ สารบั
Page 8 and 9: สารบัญภาพ ภา
Page 10 and 11: ลักษณะลายพิ
Page 12 and 13: การตรวจเอกส
Page 14 and 15: การแพรระบาด
Page 16 and 17: ตารางที่ 1 กา
Page 20 and 21: ของดีเอ็นเอ
Page 22 and 23: สําหรับเชื้
Page 24 and 25: Smith et al. (1998) รายงา
Page 26 and 27: อุปกรณและวิ
Page 28 and 29: ครั้ง และในก
Page 30 and 31: สําหรับการว
Page 32 and 33: Gene Directory 1. โปรแก
Page 34 and 35: ผลการทดลอง 1.
Page 36 and 37: 1 C 4 2 3 ก ข dul man sor mal l
Page 38 and 39: ตารางที่ 2 (ตอ)
Page 40 and 41: ตารางที่ 2 (ตอ)
Page 42 and 43: มะเขือยาว ได
Page 44 and 45: 2.3 Dendogram จากการว
Page 46 and 47: 37 ภาพที่ 6 Dendogram
Page 48 and 49: Size (kb) 630 582 533 485 436 388 3
Page 50 and 51: 53 100 99 96 73 98 99 100 100 71 10
Page 52 and 53: 0.20 0.60 1.00 Similarity Coefficie
Page 54 and 55: ที่ 1 ประกอบด
Page 56 and 57: 4 และแยกกลุมอ
Page 58 and 59: 6. การวิเคราะ
Page 60 and 61: Arnold, D. L., A. Pitman and R. W.
Page 62 and 63: Genin, S and C. Boucher. 2002. Rals
Page 64 and 65: Lee, Y. A., S. C. Fan, L. Y. Chiu a
Page 66 and 67: Smith, J. J., L. C. Offord, M. Hold
Page 68 and 69:
Douoroff, 1973), comb. nov. and Ral
Page 70 and 71:
สูตรการคําน
Page 72 and 73:
ตารางผนวกที
Page 74 and 75:
Page 76 and 77:
Page 78 and 79:
Page 80 and 81:
Page 82 and 83:
Page 84 and 85:
Page 86 and 87:
Page 88 and 89:
Page 90 and 91:
Page 92 and 93:
Page 94 and 95:
Page 96 and 97:
Page 98:
show all

cache

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?