marcatori autoanticorpali per la diagnosi del diabete tipo i - Simel
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MARCATORI AUTOANTICORPALI PER LA<br />
DIAGNOSI DEL DIABETE TIPO I:<br />
CONSIDERAZIONI METODOLOGICHE E<br />
APPLICAZIONI CLINICHE<br />
E. Tonutti (Udine)
10<br />
42<br />
L’incidenza di DT1 in<br />
Europa ed in altri Paesi<br />
<strong>del</strong> Mediterraneo.<br />
(età 0-14 anni)<br />
Rischio elevato<br />
Rischio moderato<br />
Rischio basso<br />
7<br />
19<br />
14<br />
15 12 11<br />
17<br />
20<br />
16<br />
8 8<br />
36<br />
13<br />
10<br />
12<br />
7<br />
22<br />
13<br />
14<br />
12<br />
10<br />
21<br />
8<br />
9.8<br />
8<br />
7 6<br />
9<br />
26<br />
6<br />
6<br />
12<br />
7<br />
9<br />
7<br />
36<br />
6<br />
9<br />
10<br />
7<br />
6<br />
15<br />
7<br />
5<br />
6<br />
15<br />
8<br />
5
Stages in Development of Type 1 Diabetes<br />
GENETICALLY AT RISK<br />
BETA CELL MASS<br />
GENETIC<br />
PREDISPOSITI<br />
ON<br />
INSULITIS<br />
BETA CELL INJURY<br />
MULTIPLE ANTIBODY<br />
POSITIVE<br />
LOSS OF FIRST PHASE<br />
INSULIN RESPONSE<br />
“PRE”-<br />
DIABETES<br />
DIABETES<br />
J. Skyler<br />
TIME<br />
NEWLY DIAGNOSED DIABETES
Gestational Diabetes: Risk at 2 years Type 1<br />
Diabetes by Autoantibodies<br />
ICA, GAD65, ICA512(IA-2)<br />
90<br />
80<br />
70<br />
60<br />
50<br />
40<br />
30<br />
20<br />
10<br />
0<br />
0 Ab >=1 Ab 1 Ab 2 Ab 3 Ab<br />
Sensitivity GAD=63%; Sensitivity 3 Abs=82%<br />
Ziegler et al. Diabetes 1997: 46:1459-67, N=437
Sensitivity<br />
Comment<br />
Insulin 49-92% Higher levels young children<br />
GAD (Glutamic acid<br />
Decarboxy<strong>la</strong>se)<br />
84%<br />
ICA512/IA-2 74%<br />
IA-2β/Phogrin 61%<br />
Carboxypeptidase H 10% Infrequent<br />
Higher sensitivity adult onset<br />
type 1A<br />
Tyrosine Phosphatase like<br />
molecule<br />
Tyrosine Phosphatase like<br />
molecule<br />
GLIMA38 14-38% Not yet sequenced<br />
GM2-1 <br />
ICA69 <br />
ICA12
DIABETE TIPO I E MARCATORI<br />
IMMUNOLOGICI<br />
•Oltre agli anti-insu<strong>la</strong> (ICA in IFI) l’orientamento diagnostico<br />
attuale prevede <strong>la</strong> determinazione di IAA, GADA, IA-2 utilizzando<br />
antigeni ottenuti con tecniche ricombinanti:<br />
IAA: più frequenti nei primi anni di vita. Rapida scomparsa.<br />
GADA: prolungata <strong>per</strong>sistenza dopo l’esordio.<br />
IA-2: rapida evoluzione verso DT1.
ICA NEL PAZIENTE DIABETICO<br />
Il maggiore ingrandimento mette in evidenza positività<br />
verso le cellule β: si osserva una fluorescenza di <strong>tipo</strong><br />
granu<strong>la</strong>re nel citop<strong>la</strong>sma di una parte <strong>del</strong>le cellule insu<strong>la</strong>ri.<br />
Cellule β<br />
Cellule α,δ,<br />
PP negative
RIA-EIA a-GAD N=51 r = 0,944<br />
CORRELAZIONE ANTI-GAD RIA ADALTIS-ELISA EUROIMMUN r = 0,944<br />
60<br />
55<br />
50<br />
RIA ANTI-GAD U/ml<br />
45<br />
40<br />
35<br />
30<br />
25<br />
20<br />
15<br />
10<br />
5<br />
0<br />
1 10 100 1000 10000<br />
ELISA ANTI-GAD IU/ml
RIA-EIA a-IA2 N=56 r = 0,915<br />
CORRELAZIONE ANTI-IA2 RIA ADALTIS-ELISA EUROIMMUN r =0,915<br />
60<br />
55<br />
50<br />
45<br />
RIA ANTI-IA2 U/ml<br />
40<br />
35<br />
30<br />
25<br />
20<br />
15<br />
10<br />
5<br />
0<br />
1 10 100 1000 10000<br />
ELISA ANTI-IA2 IU/ml
OBBIETTIVO<br />
• Valutare le <strong>per</strong>formance diagnostiche dei nuovi<br />
test ELISA <strong>per</strong> anti-GAD e anti-IA2 DiaMetra-<br />
Menarini<br />
• Comparazione con i test ELISA attualmente in<br />
uso<br />
• Valutazione dei test anti-GAD e anti-IA2<br />
DiaMetra-Menarini su una popo<strong>la</strong>zioni di 175<br />
pazienti con <strong>diabete</strong> <strong>tipo</strong> I <strong>del</strong> Nord-Africa<br />
(Tripoli-Libia)<br />
• Studio <strong>del</strong><strong>la</strong> prevalenza di anti-GAD, IA2, antitireo<strong>per</strong>ossidasi<br />
(a-TPO), anti-tireoglobulina (a-<br />
TG) e anti-transglutaminasi (a-tTG) nel<strong>la</strong><br />
popo<strong>la</strong>zione diabetica
EIA-EIA a-GAD N=60 r = 0,995<br />
CORRELAZIONE ANTI-GAD EIA EUROIMMUN-EIA DIA METRA<br />
MENARINI<br />
r = 0,995<br />
EIA DIA METRA MENARINI ANTI-GAD<br />
IU/ml<br />
275<br />
250<br />
225<br />
200<br />
175<br />
150<br />
125<br />
100<br />
75<br />
50<br />
25<br />
0<br />
0 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 275<br />
EIA EUROIMMUN ANTI-GAD IU/ml
EIA-EIA a-IA2 N=53 r = 0,991<br />
CORRELAZIONE ANTI-IA2 EIA EUROIMMUN-EIA DIA METRA-<br />
MENARINI<br />
r = 0,991<br />
EIA DIA METRA-MENARINI ANTI-IA2<br />
IU/ml<br />
450<br />
400<br />
350<br />
300<br />
250<br />
200<br />
150<br />
100<br />
50<br />
0<br />
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450<br />
EIA EUROIMMUN ANTI-IA2IU/ml
Pazienti arruo<strong>la</strong>ti: n° 175 pazienti con <strong>diabete</strong><br />
<strong>tipo</strong> I (102 F/73 M)<br />
Età media: 9.9 anni<br />
Media dal<strong>la</strong> data di insorgenza <strong>del</strong> <strong>diabete</strong>: 6.5<br />
anni<br />
Pazienti che afferiscono al Tripoli Medical<br />
Center (Prof. Suleiman Abusrewil) (Libia)
1 2 3 4 5 6<br />
PERCENTUALE DI POSITIVITA' AUTOANTICORPI IN 175<br />
PAZIENTI PEDIATRICI CON T1DM<br />
80<br />
74,3<br />
70<br />
60<br />
50<br />
40<br />
30<br />
20<br />
10<br />
0<br />
23,4<br />
TPO<br />
8 9,7 9,4<br />
EMA<br />
tTG<br />
TIR<br />
33,1<br />
a-TPO a-TIR a-tTG EMA a-GAD a-IA2<br />
GAD<br />
IA2
175 pazienti con<br />
<strong>diabete</strong> <strong>tipo</strong> I<br />
% di positività <strong>per</strong> a-GAD e/o a-IA2 = 80%<br />
56.3<br />
16.8 4.7<br />
2.2<br />
4.6<br />
0 2.8<br />
% di positività <strong>per</strong> a-<br />
TPO e/o a-TG = 23.6%<br />
% di positività <strong>per</strong><br />
a-tTG = 9.7%<br />
% di copresenza dei diversi autoanticorpi associati a<br />
<strong>diabete</strong> <strong>tipo</strong> I, tiroidite autoimmune e celiachia
175 pazienti con<br />
<strong>diabete</strong> <strong>tipo</strong> I<br />
% di positività <strong>per</strong> a-GAD e/o a-IA2 = 80%<br />
56.3<br />
16.8 4.7<br />
2.2<br />
4.6<br />
0 2.8<br />
% di positività <strong>per</strong> a-<br />
TPO e/o a-TG = 23.6%<br />
% di positività <strong>per</strong><br />
a-tTG = 9.7%<br />
% di copresenza dei diversi autoanticorpi associati a<br />
<strong>diabete</strong> <strong>tipo</strong> I, tiroidite autoimmune e celiachia
Il rischio cumu<strong>la</strong>tivo di<br />
sviluppare anticorpi anti-TPO è<br />
<strong>del</strong> 20.3% dopo 14 anni.
•Gli anticorpi anti-TPO compaiono in<br />
soggetti anti-GAD positivi, ma non si<br />
associano con positività <strong>per</strong> anti-IA2 o antiinsulina.<br />
Nel<strong>la</strong> maggioranza dei bambini con<br />
positività <strong>per</strong> anti-GAD e anti-TPO gli anti-<br />
GAD compaiono prima degli anti-TPO.<br />
•Il rischio di sviluppare anti-TPO è più<br />
elevato nel sesso femminile, in bambini con<br />
ambedue i genitori diabetici e si associa al<br />
geno<strong>tipo</strong> HLA DRB1*03/DRB1*04-<br />
DQB1*0302.
Barker, J. M. et al. J Clin Endocrinol<br />
Metab 2004<br />
• Su 162 bambini con almeno 1 anticorpo positivo<br />
(GAD, IA2 e IAA) e monitorati <strong>per</strong> un <strong>per</strong>iodo<br />
medio di 4.06 anni si è evidenziato che:<br />
• Nel 31% era un falso positivo<br />
• Nel 31% era una positività transitoria<br />
• Nel 36% era una <strong>per</strong>sistente positività<br />
• Qualora al<strong>la</strong> prima visita era presente più di un<br />
anticorpo in associazione al geno<strong>tipo</strong> HLA DR3/4<br />
DQ8 <strong>la</strong> <strong>per</strong>sistente positività era certa<br />
• Solo <strong>la</strong> presenza <strong>del</strong> geno<strong>tipo</strong> HLA DR3/4 DQ8 era<br />
predittivo di progressione in <strong>diabete</strong> <strong>tipo</strong> I
TAKE HOME MESSAGES<br />
• Il metodo ELISA è assolutamente affidabile <strong>per</strong><br />
<strong>la</strong> ricerca di autoanticorpi associati al <strong>diabete</strong><br />
• I test DiaMetra-Menarini offrono <strong>per</strong>formance<br />
eccellenti<br />
• La ricerca di anticorpi anti-GAD, anti-IA2, antiinsu<strong>la</strong><br />
e anti-insulina hanno un elevato valore<br />
predittivo <strong>per</strong> <strong>diabete</strong><br />
• I pazienti con <strong>diabete</strong> <strong>tipo</strong> I presentano un<br />
rischio elevato di sviluppare celiachia e<br />
patologie tiroidee autoimmuni
TAKE HOME MESSAGES<br />
• La determinazione di anticorpi anti-GAD<br />
risulta importante in tutti i pazienti diabetici.<br />
• I diabetici anti-GAD positivi sono più a<br />
rischio dei pazienti anti-GAD negativi di<br />
sviluppare celiachia e tiroiditi autoimmuni.<br />
• I pazienti diabetici devono essere monitorati<br />
eseguendo i test <strong>per</strong> a-tTG e anti-TPO/anti-<br />
TG (e TSH)