il laboratorio nella diagnostica delle epatopatie autoimmuni

12/11/10
IL LABORATORIO NELLA DIAGNOSTICA
DELLE EPATOPATIE AUTOIMMUNI
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DIPARTIMENTO DI PATOLOGIA CLINICA
ASL3 GENOVESE

e iare ite indromi autoimmune sclerosante sieronegativa
SP OCITARIO
mune re LIARE C ISTO primitiva(PBC)
+ EAI
verlap
tipo 1 (EAI 1)
va(CSP) (EAI2 NEG) )
{BC2DAF09-0944-47EF-B1DA-7E1D12D522E9}
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EPATOPATIE AUTOIMMUNI
DANNO EPATICO

CRITERI DI
VALUTAZIONE
EPATITI OLOGICI (aumento VIRALI PRESENZA GPT ASSENZA A,B,C ,GOT, DI AUTOANTICORPI
Y-GLOBULINE…)
DI MALATTIE ASSENZA ESAME DI GENETICHE
ISTOLOGICO
DANNO TOSSICO DA FARMACO O A
NELLE EAI
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Criteri internazionali
nella diagnosi delle epatiti autoimmuni
Parametri
positivi
Sesso
femminile
Punteggio
+2
Aumento IgG
>2 N +3
1.5-2.0 N +2
1.0-1.5 N +1
1:80
+3
1:80 +2
1:40 +1
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12/11/10
Parametri positivi Punteggio
No uso farmaci epatotossici +1
Uso alcool 3 -2
Istologia : normale -5
Istologia:alterazioni dotti biliari -3
Istologia: altre alterazioni epatiche -3
Non risposta alla terapia -2
Uso alcool > 60 g/die -2

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Interpretazione del punteggio
DIAGNOSI PUNTEGGIO
Prima della terapia:
CERTA >15
PROBABILE 10 – 15
Dopo la terapia:
CERTA >17
PROBABILE 12 – 17

Criteri semplificati per la diagnosi di epatite
autoimmune
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Parametro Punteggio
AUTOANTICORPI : ANA , SMA o LKM
Positivo > 1:40 +1
Positivo > 1:80 +2
AUMENTO IgG SIERICHE
IgG > 16 g/I +1
IgG > 18 g/l +2
ISTOLOGIA del FEGATO
Compatibile per EAI +1
Tipica per EAI +2
INFEZIONE VIRALE
Assente +1
Presente +2

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Interpretazione del punteggio
Diagnosi Punteggio
CERTA >= 7
PROBABILE > 6

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Validità del punteggio semplificato
Diagnosi probabile
Sensibilità 88 %
Specificità 97 %
Diagnosi certa
Sensibilità 81 %
Specificità 99 %

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Tecnica di indagine
IMMUNOFLUORESCENZA
INDIRETTA (IFI)
• Permette di rilevare tutti gli
autoanticorpi epatici esclusi gli anti –SLA e
anti-ASGPR
• Necessita di tecniche complementari
(elisa,western blot,immunoblot…) per
individuare meglio la specificità
autoanticorpale

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SUBSTRATI
• Sezioni criostatiche di rene, fegato,
stomaco di animale(ratto,topo,scimmia)
• Cellule HEp-2 ( linea cellulare
proveniente da cancro laringeo umano)

Autoanticorpi nelle epatiti autoimmuni
(EAI)
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ANA
ASMA
Convenzionali
EAI tipo 1
Anti-LKM1 EAI tipo 2
Non convenzionali
Anti-LC1 EAI tipo 2
Anti-SLA EAI tipo 1 e 2
p-ANCA EAI tipo 1
Anti-LKM3 EAI tipo2
Anti-ASGPR EAI tipo 1 e 2

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anticorpi anti- nucleo
• Presenti nel 70-80 % EAI Tipo 1
• Associati spesso ad ASMA
• Alta sensibilità
• Bassa specificità (connettiviti, malattie infettive, farmaci,
cancro, soggetto normale)
• Antigeni bersaglio: nucleari eterogenei e mal definiti
• La ricerca della specificità anticorpale non aggiunge
informazioni alla precisione diagnostica
• Il pattern più comune è l’ omogeneo usualmente a titolo
elevato meno frequente il granulare(speckled) o altri

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Quadri fluoroscopici
ANTI-NUCLEO
• GRANULARE(SPECKLED)
• OMOGENEO

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ANTICORPI ANTI-MUSCOLO LISCIO
ASMA
• Presenti nell’ 80% EAI Tipo 1
• Associati spesso ad ANA
• Antigeni bersaglio: F- actina (sensibilità 85%,Specificità
80%);
nel 20% di EAI di tipo 1 gli ASMA sono diretti verso altri
antigeni del citoscheletro (vimentina, desmina, ..)
• Gli ASMA-F actina sono markers di severità clinica e
istologica
• Titolo IFI >1:40 su triplice tessuto
• Identificare la specificità F-actina : IFI su cellule Hep-2 o

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Quadri fluoroscopici asma
• RENE STOMACO FEGATO

AUTO-
ANTICORPO
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anti-microsoma fegato e rene
ANTI-lkm
ANTIGENE
BERSAGLIO
Anti-LKM1 Citocromo P
450 2D6
Anti-LKM3 1UDPglucoronosiltransferasi
Anti-LM Citocromo P
450 1A2
Citocromo P
450 2A6
MALATTIA
ASSOCIATA
90 %
EAI tipo 2
8%
EAI tipo 2
10-15%
EAI nella
sindrome
poliendocrina
tipo1
ANTICORPO
ASSOCIATO
Anti-LC1 (24-
32%)
titolo IFI su
triplice tessuto
>1:40
>1:40
>1:40

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Quadro fluoroscopico anti-lkm1
• • FEGATO RENE

• Presente in EAI tipo2
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Anti- CITOSOL DEL FeGATO
anti-LC1
• Associato a anti-LKM1 24-32%
• Isolato 10%
• Antigene bersaglio : formiminotransferasi
ciclodeaminasi
• Spesso mascherato da anti-LKM1
• Il titolo anticorpale correla con l’attività di malattia
• Marker prognostico di rapida progressione verso la
cirrosi

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Quadro fluoroscopico anti-LC1

ANTICORPI ANTI- ANTIGENE SOLUBILE FEGATO
Anti-SLA
• Presente in EAI tipo 1 ( adulti e bambini)
• Presente in EAI tipo 2 (bambini)
• Bassa sensibiltà (16%)
• Alta specificità (99%)
• Antigene bersaglio: [Sep(o-phosphoserine)tRNA-:
(selenocysteine)tRNA syntethase]
• Marker prognostico di malattia severa e di recidiva
dopo sospensione della terapia
• Metodo di rilevamento: ELISA,IB, RIA
12/11/10

12/11/10
ANTICITOPLASMA DEI NEUTROFILI
ANCA
• Presenti nel 90% EAI tipo1
• Pattern : p-ANCA (atipico)
• Antigeni bersaglio : componente della membrana nucleare
• Non specifici ( presenti anche CSP, IBD e altre malattie )
• Nessuna correlazione con l’attività di malattia

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Quadro fluoroscopico
p-anca

12/11/10
Anti recettore dell’asialoglicoproteina
ANTI-ASGPR
• Presenti nel 90% EAI 1 e EAI 2
• Non specifici ( presenti anche in epatite virale cronica
B e C, epatite acuta B,ep. alcolica , PBC )
• Antigene bersaglio: glicoproteina transmembrana
dell’epatocita
• Marker di attività istologica e di efficacia terapeutica
• Metodo di rilevamento : ELISA, RIFA

Criteri diagnostici della cirrosi biliare primitiva
(pbc)
• Aumento persistente (> 6 mesi) della ALP > 1.5 N
• AMA > 1:40
• Quadro istologico : lesioni dei dotti interlobulari
compatibili con PBC
12/11/10
Diagnosi Probabile : due criteri
Diagnosi Definita : tre criteri

• AMA
12/11/10
AUTOANTICORPI NELLA CIRROSI BILIARE
PRIMITIVA (PBC)
• ANA PBC specifici
• Anti-CENTROMERO
• ASMA
• ASCA

• Presenti nel 90-95% PBC
• Specificità alta (98%)
12/11/10
AMA
• Antigeni bersaglio : M2 composto da 5 subunità
diverse (E2 -PDC,E2 -BCOACD, E2-OGDA, E1a -PDC,E1b-
PDC) nelle membrane interne del mitocondrio
• Titolo IFI > 1:40 su triplice tessuto
• Solo AMA-M2 significativi per la diagnosi di PBC
• Utile ricercare con metodo ELISA gli anti-MIT3 ( ibrido
ricombinante delle tre pricipali subunità) quando gli
AMA sono negativi con metodo IF

12/11/10
Quadri fluoroscopici ama
Rene Stomaco
Fegato Cellule HEp2

• Bersaglio antigenico :
ANA PBC specifici
anti-GP210 , anti-P62 pattern fluoroscopico rim
like (nuclear lamins,nuclear pore)
anti-Sp100 e anti-PML pattern fluoroscopico
nuclear dots
• Bassa sensibilità,alta specificità
• Identificano un sottogruppo di pazienti AMAnegativi
in IFI e ELISA
• Markers di ra rimpida progressione istologica (Sp-
12/11/10 100),e di severa colestasi (gp-210)

ANTI-CENTROMERO
Presenti nel 15-20 % PBC
Marker di danno severo a carico dei dotti biliari
ASMA
Presenti fino 50 % PBC a basso titolo
12/11/10

QUADRI FLUOROSCOPICI ANA PBC Associati
Rim Like/Nuclear
Lamins
12/11/10
Multiple Nuclear Dots
Centromerico

CRITERI DIAGNOSTICI NELLA COLANGITE
SCLEROSANTE PRIMITIVA
• Criteri biochimici:
ALP e GGT 2N, con o senza iperbilirubinemia
• Criteri radiodiologici :
tecniche di immagine CPRE e CPRM
• Criteri istologici
• Autoanticorpi :
p-ANCA (84%) CSP utili nella dd con PBC
12/11/10

12/11/10
CRITERI DIAGNOSTICI
SidromE overlap PBC-EAI
Devono essere soddisfatti :
� due criteri diagnostici per EAI tra :
ALP> 2N
AMA >1:40
GGT >5N
Colangite distruttiva linfocitaria
e
� due criteri diagnostici per EAI tra :
transamiasi >5N

• Rara ( 2-5 % CSP)
12/11/10
Sindrome overlap csp-eai
• Più frequente nel bambino e giovane adulto spesso maschi
• Profilo sierologico simile a quello dell’EAI
• Per la diagnosi si fa riferimento ai criteri per EAI

EAI
ANA+
12/11/10
SMA+ LKM-1+
EPATOPATIA DA CAUSA
SCONOSCIUTA
AMA
+
PBC
SLA+
AUTOANTICORPI CONVENZIONALI
NEGATIVI
F-actina,SLA,LC1,p-
ANCA , LKM3,MIT3,sp-
100,gp210
MIT3+/ +
P-ANCA+ NEG
sp100+/gp210+
CSP
EAI
Factina+
ANA,ASMA,LKM1,AMA
EAI
LC1+
LKM3+
PBC
EPATITE CRONICA
CRIPTOGENETICA