B ProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) Amplified DNA ... - BD

12. Etter 15 min, fjern rørene fra vannbadet og sentrifuger (16 000 x g ) i omtrent 5 s.
13. Fjern rørene fra sentrifugen. Åpne hvert rør og tilsett 500 µL 96 – 100 % etanol.
14. Sett korken på igjen, og pulsvortex i 5 s.
15. Sentrifuger prøvene (16 000 x g) i om lag 5 s.
16. Merk en QIAGEN-sentrifugeringskolonne og oppsamlingsrør for hver prøve.
17. Overfør 700 µL prøve til den riktig merkede QIAGEN-sentrifugeringskolonnen.
18. Sentrifuger rørene (16 000 x g) i 1 min.
19. Overfør kolonnene til nye QIAamp-oppsamlingsrør. Kast rørene som inneholder filtrat.
20. Overfør forsiktig 700 µL mer av prøven til den riktige kolonnen.
21. Sentrifuger rørene (16 000 x g) i 1 min.
22. Overfør kolonnene til rene QIAamp-oppsamlingsrør. Kast rørene som inneholder filtrat.
23. Åpne QIAmp-kolonnene og tilsett 500 µL QIAGEN AW1-vaskebuffer i hver.
24. Sentrifuger rørene (16 000 x g) i 1 min.
25. Overfør kolonnene til nye QIAamp-oppsamlingsrør. Kast rørene som inneholder filtrat.
26. Åpne QIAmp-kolonnene og tilsett 500 µL QIAGEN AW2-vaskebuffer i hver.
27. Sentrifuger rørene (16 000 x g) i 3 min.
28. Overfør kolonnene til endelig merkede QIAmp-oppsamlingsrør. Kast rørene som inneholder filtrat.
MERK: Oppsamlingsrørene skal være merket på dette stadiet.
MERK: Pass på at det ikke er igjen noe væske i bunnen av kolonnen. Dersom gjenværende vaskemiddel
overføres til rørene, kan det påvirke resultatene.
29. Åpne kolonnene og tilsett 225 µL QIAGEN AE-elusjonsbuffer i hver.
30. Inkuber ved romtemperatur i 1 min.
31. Sentrifuger rørene (16 000 x g) i 1 min.
32. Kast kolonnene.
33. Merk et 2 mL rør med skrukork for hver prøve.
34. Overfør 400 µL Respiratory and Media Diluent (CF/LP/MP) til hvert prøverør med skrukork.
MERK: Fyll et vannbad med destillert vann, og bring det til kokepunktet før bruk i trinn 38.
35. Overfør 200 µL av oppløsningen til det riktig merkede røret som inneholder 400 µL Respiratory and
Media Diluent (CF/LP/MP).
36. Sett korken på igjen, og pulsvortex i 5 s.
37. Gjør i stand kontrollene. Se Klargjøring av kontroll nedre luftveier (avsnitt E).
38. Overfør prøvene og kontrollene til et vannbadstativ.
39. Plasser vannbadstativet i kokende vann i 5 min.
40. Etter 5 min, fjern vannbadstativet og la rørene avkjøles ved romtemperatur i 15 min.
ADVARSEL: Pass på å unngå brannskader fra det kokende vannet, vannbadstativet eller overflatene på
vannbadet som kan være varme.
41. Etter avkjøling, sentrifuger (16 000 x g) i om lag 5 s.
MERK: Etter at prøvene er kokt:
a. De kan oppbevares ved 18 – 33 °C i opptil 6 t og kan testes uten ny koking.
b. De kan oppbevares i opptil 3 dager ved 2 – 8 °C. Prøvene må vortexes og kokes på nytt før testing.
c. De kan oppbevares i opptil 14 dager ved ≤ -20 °C. Prøvene må tines ved romtemperatur, vortexes og
kokes på nytt før testing.
42. Prøvene er nå klare for Testprosedyre for BD ProbeTec ET LP-analyse (avsnitt F).
E. Klargjøring av kontroll for nedre luftveier:
1. For hver runde (plate) som skal testes, gjør i stand et negativt kontrollrør (CF/LP/MP) og et positivt
kontrollrør (CF/LP/MP). Hvis en plate inneholder mer enn et reagens-partinummer (lot), må kontroller
testes for hvert parti (lot).
2. Vend QIAGEN-buffer-AE og Respiratory and Media Diluent forsiktig før bruk.
3. Fjern korken fra det negative kontrollrøret (CF/LP/MP).
4. Bruk en ny pipettespiss for hvert kontrollrør og tilsett 200 µL QIAGEN-buffer-AE.
5. Bruk en ny pipettespiss for hvert kontrollrør og tilsett 400 µL Respiratory and Media Diluent.
6. Sett korken tett på.
7. Fjern korken fra det positive kontrollrøret (CF/LP/MP).
8. Bruk en ny pipettespiss for hvert kontrollrør og tilsett 200 µL QIAGEN-buffer-AE.
9. Bruk en ny pipettespiss for hvert kontrollrør og tilsett 400 µL Respiratory and Media Diluent.
10. Sett korken tett på.
11. Vortex kontrollrørene i 5 s.
12. Kontrollene er nå klare til koking. Se Behandling av prøver fra nedre luftveier (avsnitt D).
5