RH's analysevejledning for glukose

More documents

Recommendations

Info

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1 Diagnostisk Center P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1 2 ANALYSE- OG MÅLEMETODE 2.1 Analyseprincip Glucose analyseres vha. en koblet enzymreaktions metode. Enzymet hexokinase katalyserer phosphoryleringen af glucose til glucose-6-phosphat under tilstedeværelse af co-enzymet ATP: HK Glucose + ATP → Glucose-6-phosphat + ADP. Det dannede Glucose-6-phosphat oxideres til Gluconat-6-phosphat vha. enzymet G-6-PDH under tilstedeværelse af co-enzymet NADP + , som herved reduceres til NADPH: G-6-PDH Glucose-6-phosphat + NADP + → Gluconat-6-phosphat + NADPH + H + Reaktionen er specifik for glucose. Mg 2+ er tilsat reagenset som vigtig co-faktor for ATP/ADP-reaktionen. Enzymer og co-enzymer: HK = (EC 2.7.1.1) Hexokinase. G6-PDH = (EC 1.1.1.49) Glucose-6-phosphatdehydrogenase. ATP = Adenosin-trifosfat, NADP = Niacin-Adenin-dinucleotidfosfat. 2.2 Måleprincip NADPH (reduceret co-enzym) absorberer lys ved 340 nm, hvorimod NADP + (oxideret coenzym) ikke absorberer lys ved denne bølgelængde. NADP´s omdannelse til NADPH er direkte proportional med Glucose koncentrationen, hvorved der registreres en absorbansstigning. Der måles vha. en 2-punkts endepunkt metode, målt over 10 min. Endepunkt måles ved den 34. fotometerpassage, og der korrigeres for prøveblind ved den 10. fotometerpassage. Der benyttes bichromatisk fotometerprincip med hovedbølgelængde på 340 nm. og bibølgelængde på 700nm. 3 KEMIKALIER OG REAGENSER Der anvendes reagenser fra Roche, GLU, Gluco-quant ® Glucose/HK katalog nr. 1 876 899 Applikation barkode ACN 312 OPBEVARING: ved 4 °C. HOLDBARHED: se udløbsdato. KB3011: 083-216_1.doc /KHaa Side 4 af 9
Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1 Diagnostisk Center P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1 Reagens 1 (R1) Buffer/co-enzymer, flaske á 66 ml. indeholder: TRIS buffer, pH 7,8; 100 mmol/l Mg ++ 4 mmol/l ATP ≥ 1,7 mmol/l NADP ≥ 1,0 mmol/l Konserveringsmiddel Reagenset er klar til brug. Påfør dato og initialer ved isætning på maskinen i reagensbakkens ydre ring. OBS: Læs bilag for manuel registrering før påsætning af reagens. HOLDBARHED: 28 dage på apparatet. Reagens 2 (R3) Buffer/enzymer, flaske á 16 ml. indeholder: HEPES buffer, pH 7.0 30 mmol/l Mg ++ 4 mmol/l Hexokinase ≥ 8,3 U/ml Glucose-6-phosphatdehydrogenase ≥ 15 U/ml Konserveringsmiddel Reagenset er klar til brug. Påfør dato og initialer ved isætning på maskinen i reagensbakkens indre ring. OBS: Læs bilag for manuel registrering før påsætning af reagens. HOLDBARHED: 28 dage på apparatet. NaCl (0,9%) 100 ml fra H:S apotek 154 mmol/l OPBEVARING: rumtemperatur HOLDBARHED: se udløbsdato. Efter anbrud 1 uge. 3.1 Kalibrator C.f.a.s. (Calibrator for automated system) fra Roche Katalog nr. 759 350 Koncentrationen er lot-specifik. Se C.f.a.s. value sheet for værdier. Fremstilling: se noten ”Fremstilling af kalibratorer og kontroller” OPBEVARING: ved 4°C HOLDBARHED: uåbnet: se udløbsdato rekonstitueret: 1 uge ved 4°C 1 måned ved - 20°C 3.2 Kontroller Precinorm® U (PN), katalog nr. 171743 Precipath® U (PP), katalog nr. 171778 Koncentrationen er lot-specifik, se value sheet for værdier. Fremstilling: se noten” fremstilling af kalibratorer og kontroller” OPBEVARING: ved 4°C HOLDBARHED: uåbnet: se udløbsdato rekonstitueret: 1 uge ved 4°C 1 måned ved - 20°C KB3011: 083-216_1.doc /KHaa Side 5 af 9
Page 1 and 2: Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01
Page 3: Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01
Page 13: Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01

RH's analysevejledning for glukose

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?