RH's analysevejledning for glukose

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
Analysevejledning
083-216 P(fPt)—Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) DNK35842
Udarbejdet af: KK, MSa
Sidst revideret af:
Gennemlæst af:
Gennemlæst af:
Gennemlæst af:
Godkendt af:
Revisionsskema
Udgave
Roche/Hitachi – Modular P
Initialer Navn Dato
Ikrafttrædelsesdato:
1 25. jun. 2003
Karin Knudsen, Michele
Saldo
Distribution: (1) Vejledningsarkiv, (2) Analyseplads
KB3011: 083-216_1.doc
/KHaa
Kapitel og afsnit:
4. feb. 2003
Side 1 af 9

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
INDHOLDSFORTEGNELSE
1 FORMÅL OG BAGGRUND ................................................................................................ 3
2 ANALYSE- OG MÅLEMETODE........................................................................................ 4
2.1 Analyseprincip....................................................................................................................... 4
2.2 Måleprincip............................................................................................................................ 4
3 KEMIKALIER OG REAGENSER ....................................................................................... 4
3.1 Kalibrator............................................................................................................................... 5
3.2 Kontroller............................................................................................................................... 5
4 UDSTYR ............................................................................................................................... 6
5 PRØVEMATERIALE ........................................................................................................... 6
6 KALIBRERING OG KVALITETSKONTROL ................................................................... 6
6.1 Kalibrering............................................................................................................................. 6
6.2 Kvalitetskontrol - (Produktionskontrol/procesovervågning)................................................. 6
6.3 Analysespecifikationer........................................................................................................... 7
6.4 Analysemåleområde............................................................................................................... 7
7 FREMGANGSMÅDE........................................................................................................... 7
7.1 Praktisk udførelse .................................................................................................................. 7
7.2 Beregningsmetode ................................................................................................................. 7
8 RESULTATVURDERING ................................................................................................... 7
9 SVARAFGIVELSE............................................................................................................... 7
10 MANGELLISTER.................................................................................................................8
11 REFERENCEINTERVAL..................................................................................................... 8
12 NØDPROCEDURE............................................................................................................... 8
13 DIVERSE............................................................................................................................... 8
14 LITTERATUR....................................................................................................................... 8
15 BILAG ................................................................................................................................... 8
16 ARBEJDSPLADSBRUGSANVISNINGER......................................................................... 8
KB3011: 083-216_1.doc
/KHaa
Side 2 af 9

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
1 FORMÅL OG BAGGRUND
Glucose er cellernes primære energi-kilde. Kulhydrater indtaget med kosten nedbrydes til
glucose, der transporteres ind i cellerne. Ved hjælp af forskellige reaktioner, som
tilsammen kaldes Glycolyse og Krebs cyclus, frigøres nu glucosens energi.
Glucose-overskuddet fra kosten omdannes til glycogen i et lager, som kan gemmes til
senere nedbrydning til glucose imellem måltiderne. Dette har især betydning i musklerne,
som lagrer glycogen til eget brug, og i leveren, som lagrer glycogen til brug for resten af
kroppens organer, fx hjernen. Reaktionerne styres af forholdet mellem hormonerne insulin
og glukagon. Hvis balancen hælder mod insulin (efter et måltid), sænkes blodsukkeret, idet
det transporteres ind i cellerne mhp. oplagring. Hvis balancen hælder mod glukagon
(mellem måltiderne og ved sult), dannes glucose af den oplagrede glycogen for at holde
blodsukkeret oppe i normalområdet.
Analysering for glucose kan opdeles således:
1. Måling af plasma-glucose til diagnostik af sukkersyge (diabetes mellitus). Denne
vejledning.
2. Måling af glucose i blod eller urin ved kendt diabetes mellitus eller ved mistanke
om hypo- eller hyperglykæmi. Se vejledning 012-215/ B,U-Glucose; stofk.
3. Måling af glucose i cerebrospinalvæske, ledvæske og peritonealvæske på mistanke
om infektion. Se vejledning 021-215/ Csv,m.fl.-Glucose; stofk.
Ad 1. Ved diabetes mellitus type 1 (sukkersyge) producerer bugspytkirtlen ikke længere
insulin. Ved diabetes mellitus type 2 (tidligere kaldt gammelmands sukkersyge) reagerer
cellerne ikke længere på den insulin, der dannes.
Derfor vil man have et blodsukker, der er ”for højt”, hvilket benyttes til at diagnosticere
sukkersygen. Da det er naturligt at have et højt blodsukker lige efter et måltid, gælder
referenceintervallet kun hvis patienten har fastet og afholdt sig fra tobak i minimum 8
timer. For at gøre resultatet helt præcist, tages prøven i NaF (Natrium-Flond)-glas og
transporteres isafkølet til laboratoriet; skal centrifugeres med det samme.
The American Diabetes Association (ADA) og WHO er fremkommet med nye rekommendationer
for diagnostik af diabetes (Scand.J Clin Lab Invest 2001;61:169 – 204).
Det anbefales at benytte faste plasmaglucose-koncentration, bestemt mindst 2 gange med
dages mellemrum.
Fastende patient veneplasma glucosekoncentration forkortes: (fPt)vPG
Ad 2 og 3 se respektive vejledninger.
KB3011: 083-216_1.doc
/KHaa
Side 3 af 9

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
2 ANALYSE- OG MÅLEMETODE
2.1 Analyseprincip
Glucose analyseres vha. en koblet enzymreaktions metode.
Enzymet hexokinase katalyserer phosphoryleringen af glucose til glucose-6-phosphat under
tilstedeværelse af co-enzymet ATP:
HK
Glucose + ATP → Glucose-6-phosphat + ADP.
Det dannede Glucose-6-phosphat oxideres til Gluconat-6-phosphat vha. enzymet G-6-PDH
under tilstedeværelse af co-enzymet NADP + , som herved reduceres til NADPH:
G-6-PDH
Glucose-6-phosphat + NADP + → Gluconat-6-phosphat + NADPH + H +
Reaktionen er specifik for glucose.
Mg 2+ er tilsat reagenset som vigtig co-faktor for ATP/ADP-reaktionen.
Enzymer og co-enzymer:
HK = (EC 2.7.1.1) Hexokinase.
G6-PDH = (EC 1.1.1.49) Glucose-6-phosphatdehydrogenase.
ATP = Adenosin-trifosfat,
NADP = Niacin-Adenin-dinucleotidfosfat.
2.2 Måleprincip
NADPH (reduceret co-enzym) absorberer lys ved 340 nm, hvorimod NADP + (oxideret coenzym)
ikke absorberer lys ved denne bølgelængde.
NADP´s omdannelse til NADPH er direkte proportional med Glucose koncentrationen,
hvorved der registreres en absorbansstigning.
Der måles vha. en 2-punkts endepunkt metode, målt over 10 min. Endepunkt måles ved den
34. fotometerpassage, og der korrigeres for prøveblind ved den 10. fotometerpassage. Der
benyttes bichromatisk fotometerprincip med hovedbølgelængde på 340 nm. og bibølgelængde
på 700nm.
3 KEMIKALIER OG REAGENSER
Der anvendes reagenser fra Roche, GLU, Gluco-quant ® Glucose/HK
katalog nr. 1 876 899
Applikation barkode ACN 312
OPBEVARING: ved 4 °C.
HOLDBARHED: se udløbsdato.
KB3011: 083-216_1.doc
/KHaa
Side 4 af 9

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
Reagens 1 (R1)
Buffer/co-enzymer, flaske á 66 ml. indeholder:
TRIS buffer, pH 7,8; 100 mmol/l
Mg ++ 4 mmol/l
ATP ≥ 1,7 mmol/l
NADP ≥ 1,0 mmol/l
Konserveringsmiddel
Reagenset er klar til brug.
Påfør dato og initialer ved isætning på maskinen i reagensbakkens ydre ring.
OBS: Læs bilag for manuel registrering før påsætning af reagens.
HOLDBARHED: 28 dage på apparatet.
Reagens 2 (R3)
Buffer/enzymer, flaske á 16 ml. indeholder:
HEPES buffer, pH 7.0 30 mmol/l
Mg ++ 4 mmol/l
Hexokinase ≥ 8,3 U/ml
Glucose-6-phosphatdehydrogenase ≥ 15 U/ml
Konserveringsmiddel
Reagenset er klar til brug.
Påfør dato og initialer ved isætning på maskinen i reagensbakkens indre ring.
OBS: Læs bilag for manuel registrering før påsætning af reagens.
HOLDBARHED: 28 dage på apparatet.
NaCl (0,9%) 100 ml fra H:S apotek 154 mmol/l
OPBEVARING: rumtemperatur
HOLDBARHED: se udløbsdato. Efter anbrud 1 uge.
3.1 Kalibrator
C.f.a.s. (Calibrator for automated system) fra Roche
Katalog nr. 759 350
Koncentrationen er lot-specifik. Se C.f.a.s. value sheet for værdier.
Fremstilling: se noten ”Fremstilling af kalibratorer og kontroller”
OPBEVARING: ved 4°C
HOLDBARHED: uåbnet: se udløbsdato
rekonstitueret: 1 uge ved 4°C
1 måned ved - 20°C
3.2 Kontroller
Precinorm® U (PN), katalog nr. 171743
Precipath® U (PP), katalog nr. 171778
Koncentrationen er lot-specifik, se value sheet for værdier.
Fremstilling: se noten” fremstilling af kalibratorer og kontroller”
OPBEVARING: ved 4°C
HOLDBARHED: uåbnet: se udløbsdato
rekonstitueret: 1 uge ved 4°C
1 måned ved - 20°C
KB3011: 083-216_1.doc
/KHaa
Side 5 af 9

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
4 UDSTYR
Roche/Hitachi Modular modul P.
Netværks PC med fejlseddelprinter.
Hitachi-kopper med låg.
Betjeningsvejledning til Roche/Hitachi Modular analytics.
5 PRØVEMATERIALE
Blodprøvetagning – preanalytisk (notat N2001_05_RFS.doc):
- Minimum 8 timers faste og ingen tobaksrygning
- Ingen hård fysisk aktivitet indenfor 2 timer før blodprøvetagning
- Siddende, hvilende position minimum 15 min. inden blodprøvetagning
Blodprøven tages i KLM-140 rør eller KLM-141 rør (med natriumfluorid)
Efter blodprøvetagning skal prøven straks anbringes i isvand eller isboks (0°C) og
centrifugeres inden 60 min. (standardcentrifugering)
HOLDBARHED: max 1 time ved 4 °C
plasma afpipetteret til andet prøverør 48 timer ved 4 °C
6 KALIBRERING OG KVALITETSKONTROL
Metoden er standardiseret overfor ’Isotop-massespektrometri metoden, og kalibreret med
primært reference materiale.
6.1 Kalibrering
Der foretages reagensblindbestemmelse ved skift af reagens med samme lot.nr.:
St.1 NaCl 154 mmol/l anbringes i et sort kalibratorrack i følge ’load-list’. Se- og følg betje-
ningsvejledning afsn. 2.1.
Der foretages 2 punkt lineær kalibrering ved skift af reagens lot. nr., samt evt. ved udredning
af analyseproblemer:
St. 1 NaCl 154 mmol/l og St. 2, C.f.a.s. anbringes i et sort kalibratorrack i følge ’load-list’.
Se- følg betjeningsvejledning afsn. 2.2.
Kalibreringsdata gemmes i mappen ’Kalibreringer og Kontroller’ under dags-dato i 2
måneder. Samles derefter i kasser og gemmes på depot i 5 år.
6.2 Kvalitetskontrol - (Produktionskontrol/procesovervågning)
Til kontrol af analysen benyttes Precinorm® U og Precipath® U.
Disse anbringes i hvid kontrolrack i følge ’load-list’. Se betjeningsvejledning afsn. 2.1.
Kontrol analyseres ifølge betjeningsvejledning, afsn. 2.
Kontrolregler- og afvigelse: Se betjeningsvejledning afsn. 2.4, 2.4.1 og 2.4.2, samt skema
’kontrolgrænser’ på analysepladsen.
Kontrolresultater lagres i Modular’s hukommelse dags-dato. Kontroludskrifter arkiveres i
mappen ’Kalibreringer og Kontroller under dags-dato i 2 måneder. Samles derefter i kasser
og gemmes på depot i 5 år.
Deltager i ekstern kvalitetskontrol
KB3011: 083-216_1.doc
/KHaa
Side 6 af 9

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
6.3 Analysespecifikationer
Impræcision: Maksimal tilladelig dag til dag variation CV% (KB fastlagt): 4%
Detectionsgrænse (Roche): 0,11 mmol/l
Specificitet: Ikke angivet.
Interferens (Roche):
Icterus: Der er ingen signifikant interferens op til et indeks på 60 for konjugeret- og
ukonjugeret bilirubin, hvilket ca. svarer til total bilirubin koncentration på 1026 µmol/l.
Hæmolyse: Der er ingen signifikant interferens op til et indeks på 1000, hvilket ca. svarer
til en hæmoglobin koncentration i plasma på 621 µmol/l
Lipæmi (Intralipid). Der er ingen signifikant interferens op til et indeks på 1000, hvilket ca.
svarer til en triglycerid koncentration på 22,6 mmol/l. Der er dårlig korrelation mellem
turbiditeten og triglycerid koncentrationen.
Akkuratesse: Ikke angivet.
6.4 Analysemåleområde
Analysen er lineær i området (standard): 0,11 – 41,6 mmol/l
Udvidet måleområde (maskinel fortynding): 0,11 – 91,5 mmol/l
Manuel fortynding: Nej
7 FREMGANGSMÅDE
7.1 Praktisk udførelse
Prøver til Diag. glucose sorteres til grå rack med blå farvemarkering. Prøverne skal manuelt
indtastes til modular, hvorpå racks´ne anbringes i ’sample loader’. Se betjeningsvejledning
afsn. 3.3.1.
7.2 Beregningsmetode
Udføres af modular
8 RESULTATVURDERING
Analyseresultaterne kan godkendes hvis kontrolværdierne ligger inden for de fastlagte
grænser og resultaterne er uden bemærkninger og flag.
Prøver med koncentration > 41,6 mmol/l bliver automatisk analyseret om i decrease
funktionen.
Prøver med koncentrationer < 0,11 mmol/l omanalyseres i increase funktionen.
9 SVARAFGIVELSE
Apparatet er tilsluttet laboratoriets informationssystem. Resultaterne tastes manuelt hertil i
enheden mmol/l og med 1 decimal.
Hvis analyseresultatet er 20,0 mmol/l, skal svar straks ringes til
rekvirerende afdeling.
KB3011: 083-216_1.doc
/KHaa
Side 7 af 9

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
10 MANGELLISTER
Tages ud i henhold til listen ”Mangelliste til Modular”.
11 REFERENCEINTERVAL
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn)(mmol/l): 4,5 – 6,4 mmol/l
12 NØDPROCEDURE
Kan opsættes på andet P - modul
13 DIVERSE
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn)(mmol/l) er benævnt D-GLU på Modular og analyseres på
P – modulet.
Application code: ACN 312
14 LITTERATUR
Burtis CA, Ashwood ER et al: Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3. ed., 1999, kap. 24
Devlin TM: Textbook of Biochemistry With Clinical Correlations, 5. ed., 2002, kap. 13-15
Application sheet, Roche. 2000-09-1934635001 01 06
Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2.ed. side 958-960.
Notat: Fastende P-glucose, diagnostisk. N2001_05_RFS.doc
Scand.J Clin Lab Invest 2001;61:169 – 204
15 BILAG
Bilag 1: Manuel registrering af reagenser påsat Modular.
16 ARBEJDSPLADSBRUGSANVISNINGER
Se Betjeningsvejledning til Roche/Hitachi Modular analytics.
KB3011: 083-216_1.doc
/KHaa
Side 8 af 9

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
Bilag 1: Manuel registrering af reagenser til modular (D-GLU)
Manuel registrering af reagenser til modular (D-GLU)
Efter blanding af reagenser påsættes ny stregkode-etikette oven på den eksisterende. Disse
benyttes til manuel registrering. Påfør dato og ID på etikketten.
Etiketten er en mærkat med en stregkode til identificering af reagens i en ’åben kanal’. Der
benyttes etikette til både reagens 1 og reagens 2. Det er samme etikette uanset
flaskestørrelse. Etiketterne er placeret på hylden i køleskabet sammen med glucose
reagenset, der er pakket i en brun kuvert og kaldes:
Open channel
Label 20 ml.
129950.
Fremgangsmåde:
• Kontrolér på hvilket P-modul, analysen er opsat.
• Låget til reagenstallerkenen åbnes, og der observeres en ledig plads.
• Låget lukkes uden at påsætte reagenser.
Registrering:
Markér hovedmenuen ’Reagent’ → vælg ’Manuel Registration’. På oversigten ’klikkes’ på
det anvendte modul. Nyt billede, ’P-’ Manuel Registration P module, fremkommer.
Ved:
• Disk number Vælg 1(for reagens 1)
• Position Indtast nr. for den observerede ledige plads
• Markér ’Test’ Klik med musen
• Vælg Reagenstype (for reagens 1) ved
• Vælg Bottle Size (f.eks. 70 ml. flaskestørrelse)
• Tryk OK (lyser gult)
Gentag denne procedure, men vælg 2 (for reagens 2 -timingen), eller 3 (for reagens 3 –
timingen).
Sæt derefter reagensflaskerne i den valgte position.
KB3011: 083-216_1.doc
/KHaa
Side 9 af 9

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
Analyselogbog for
083-215 P(fPt)—Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l)
Prøvetagningsrør
Dato Init. Prøvetagningsrør Bemærkninger
Feb. 2003 KK KLM-140 rør eller KLM-
141
Skal straks anbringes i isvand/isboks
Metode og reagens
Dato Init. Metode Reagens Bemærkninger
Feb. 2003 KK Hexokinase metode Roche Reagens som til ’øvrige
glucose analyser’

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
Analyselogbog for
083-215 P(fPt)—Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l)
Referenceinterval og enhed
Dato Init. Referenceinterval Enhed Bemærkninger
Feb. 2003 KK P(fPt)-Glucose; stofk.
(Diagn) (mmol/l): 4,5-6,4
mmol/l D-GLU

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
Analyselogbog for
083-215 P(fPt)—Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l)
Kalibrator
Dato Init. Kalibrator Bemærkninger
Feb. 2003 KK Calibrator for automated
systems (C.f.a.s.)
Roche

Klinisk Biokemisk Afdeling, KB 3-01-1
Diagnostisk Center
P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Udgave 1
Analyselogbog for
083-215 P(fPt)—Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l)
Revideret / ændret / gennemset
Udgave/dato Init. Årsag til revision
1/Jun. 2003 KK Ny komponentbestemmelse. Ny vejledning.