Monitoramento e controle microbiológico - SBCC

Microbiologia
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Monitoramento e
controle microbiológico
omonitoramento e o controle mi-
crobiológico em salas limpas e
demais áreas críticas do processo
de produção de medicamentos
fazem parte da rotina de garantia da
qualidade nas indústrias farmacêuticas
de todo o mundo. O objetivo é medir e
avaliar sistematicamente a quantidade
de micro-organismos vivos presentes
nesses ambientes e orientar medidas
preventivas e corretivas para eliminar
possíveis focos de contaminação.
“Embora saibamos que a maior parte
dos contaminantes seja proveniente
de matérias-primas, o controle ambiental
é uma importante variável do
processo e merece atenção”, destaca
a farmacêutica Déa de Aguirra, da
Yugue Assessores, especializada em
consultoria e treinamento.
As técnicas comumente empregadas
para medir a carga microbiana
envolvem:
a) Coleta por meio de amostradores
de ar (amostragem ativa): utiliza
equipamentos como os de impactação,
indispensável para controlar a qualidade dos
ambientes de fabricação e manipulação de
produtos farmacêuticos (e de outros segmentos),
o monitoramento microbiológico de salas limpas
está em discussão internacional. No brasil, os
critérios de contagem microbiana e as medidas
de controle estão previstos em resolução técnica
estabelecida pela aNViSa
centrífuga e impinger, entre outros.
b) Sedimentação (amostragem
passiva): coleta realizada por exposição
de placas de Petri contendo uma
formulação padrão de meio de cultura
suplementado com ágar (técnica de
sedimentação).
c) Técnica de contato: amostragem
realizada diretamente sobre a superfície
do local desejado, principalmente
nos pontos críticos, utilizando pequenas
placas contendo meios de cultura
sólidos apropriados, também conhecidas
como Placas RODAC – Replicated
Organisms Detection and Counting.
d) Coletas com hastes flexíveis
com pontas de algodão produzidas
para esta finalidade (swabs). O material
é semeado diretamente – ou após
submetê-lo a suspensão e/ou diluição
– em placas de Petri ou caldos-
-padrão.
A análise dos resultados obtidos a
partir dessas técnicas serve de parâmetro
básico para avaliar se a carga
microbiana total se mantém dentro dos
Marcelo couto
limites estabelecidos pelas orientações
normativas.
A detecção da carga microbiana
presente no ambiente é fundamental
para a manutenção de um plano de
controle eficiente, elaboração dos
documentos e acompanhamento do
histórico de contaminação. Estas informações
são essenciais para a obediência
às Boas Práticas de Produção
(BPF), como a adoção de medidas
preventivas e corretivas relacionadas
aos procedimentos operacionais, validação
dos processos de limpeza e
sanitização das instalações e treinamento
do pessoal.
Os profissionais responsáveis pelo
monitoramento e controle microbiológico,
no entanto, esbarram em uma série
de desafios cotidianos, a começar pelo
manejo dos métodos e equipamentos
existentes para realizar as medições.
Uma situação: diferentes equipamentos
e métodos adotados nos testes
podem apresentar resultados diversos
para amostras realizadas ao mesmo

tempo, em função das limitações téc-
nicas. Algumas vezes não é possível
sequer relacionar o resultado dos chamados
métodos rápidos (alternativos)
com os obtidos pelo método convencional,
no qual os micro-organismos
são desenvolvidos em meio de cultura.
Pelo método convencional, que
utiliza meios de cultura e requer tempo
de incubação (em geral de cinco dias),
o resultado não reflete o momento atual
e sim aquele em que a amostra foi
colhida. “O monitoramento neste caso
ajuda a compor um histórico e avaliar
se o ambiente está em tendência de
melhora, de piora ou de estabilização
dos resultados. Na prática, o que se
faz é obter a situação do passado e
extrapolá-la para o presente, mas isso
implica em considerável grau de incerteza”,
aponta a consultora.
O desenvolvimento dos métodos
rápidos em microbiologia (também
conhecidos pela sigla em inglês RMM)
é uma tentativa de se obter um “retrato”
do ambiente a partir de resultados
imediatos e mais precisos, tornando
o controle mais efetivo. Em geral, o
princípio adotado nestes casos não é
baseado na capacidade de os micro-
-organismos crescerem em um meio
de cultura, mas sim na análise da atividade
ou do conteúdo das células, demonstrando
dessa maneira resultados
em termos de unidades viáveis e não
unidades formadoras de colônias.
“Embora os métodos rápidos estejam
conquistando cada vez mais aceitação,
ainda há certa resistência dos
microbiologistas, em função do domínio
das práticas tradicionais, de algumas
limitações dos próprios métodos e
da falta de reconhecimento mais amplo
deles pelos órgãos reguladores, mas a
tendências é que a tecnologia ganhe
espaço”, comenta Ana Lucia Gonella,
mestre em microbiologia e doutoranda
em biotecnologia pela Unicamp – Universidade
de Campinas.
limites de aceitação
Um dos maiores desafios, no entanto,
é a dificuldade de se estabelecer
limites de aceitação microbiana para os
diferentes tipos de ambientes de produção.
“Também devemos considerar que
a identificação dos micro-organismos
é tão importante quanto os limites de
aceitação deles. Por exemplo, na área
de produtos injetáveis, submetidos
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a esterilização terminal, não é segu-
ra a presença de micro-organismos
gram-negativos ou termorresistentes,
enquanto na manufatura de produtos
com filtração esterilizante devemos nos
preocupar com a presença de bactérias
com tamanho ≤ 0,2µm”, destaca a
microbiologista Ana Lucia. Os debates
são ainda mais intensos em relação
aos limites para áreas controladas de
produtos não-estéreis.
O IEST – Instituto de Ciências
Ambientais e Tecnologia, sediado nos
Estados Unidos, desenvolveu uma recomendação
sobre “Micro-organismos
em Salas Limpas”, a IEST-RP-CC023,
que é uma das importantes referências
sobre o assunto. O documento, que
aborda áreas estéreis e não-estéreis,
fornece diretrizes para o controle e a
medição da contaminação no ar e nas
superfícies, descrevendo procedimentos
e técnicas para alcançar o nível
de controle microbiano desejado. Ele
apresenta ainda uma introdução aos
métodos aceitos para controle e monitoramento
e os recursos disponíveis
para a realização dessa atividade, além
de orientações sobre desinfetantes,
seu espectro de letalidade e técnicas
de aplicação.
“No Brasil, a SBCC também deu
uma valiosa contribuição para o tema
ao publicar a recomendação normativa
RN-007-05, adaptada à realidade nacional”,
lembra Jean-Pierre Herlin, diretor
da Análise Engenharia e Consultoria,
um dos membros do comitê técnico
responsável pelo desenvolvimento da
RN. Publicado em 2005, como resultado
das atividades de um grupo de
especialistas, o documento, intitulado
“Metodologia e Limites Microbiológicos
em Áreas Limpas” continua em vigor e
é uma importante referência para os
interessados nessa questão.
No ano passado, a ANVISA – Agência
Nacional de Vigilância Sanitária
publicou a sua resolução RDC 17/2010,
em substituição à RDC 210, que dispõe
sobre as Boas Práticas de Fabricação
de Medicamentos e na qual estão
previstos, entre diversos critérios, os
parâmetros de monitoramento e controle
microbiológico. “Os critérios de
contagem microbiana e os limites de
contaminação microbiológica apresentados
foram baseados nas referências
da Organização Mundial da Saúde e
na regulamentação dos medicamentos
adotada na diretiva europeia, a GMP
EU”, comenta Andréa Muggiati de
Abreu, gerente de Garantia da Qualidade
do Instituto de Tecnologia do Paraná
- TECPAR. Ela reforça que essas
orientações, ao serem incorporadas na
resolução brasileira, tornaram-se compulsórias
no País.
A RDC 17, assim como já previa
a RDC 210, determina que as áreas
de produção onde estiverem sendo
processados produtos suscetíveis a
contaminação por micro-organismos
sejam monitoradas periodicamente,
considerando as diferentes classes das
áreas limpas. “Entre outros aspectos,
o documento estabelece que, quando
forem realizadas operações assépti-
GRaU
Da
sala
cas, o monitoramento seja frequente e
se utilize métodos apropriados, entre
os quais estão incluídos aqueles que
envolvem placas de sedimentação,
amostragens volumétrica de ar e de
superfícies”, destaca a representante
do TECPAR. As áreas, obviamente,
não devem ser contaminadas pelos
métodos de amostragem e os resultados
de monitoramento devem ser revisados
para fins de liberação do produto
terminado. Além disso, a resolução diz
que as superfícies e o pessoal deve ser
monitorados após operações críticas.
Ainda de acordo com a resolução
da ANVISA, as indústrias devem estabelecer
limites de alerta e de ação para
a detecção de contaminação microbiológica,
e para o monitoramento de
tendência da qualidade do ar nas suas
instalações. Os limites neste caso, expressos
em unidades formadoras de
colônia (UFC), são os que constam na
tabela abaixo, adotados em consonância
com o citado padrão europeu.
Os limites adotados levam em consideração
o grau de limpeza da sala.
Para aquelas classificadas como “A”,
onde estão localizadas zonas de alto
risco operacional e são realizados envases
e conexões assépticas, o limite
de UFC por metro cúbico nas amostras
Classificação RDC 17 e GMP UE
limites recomendados de contaminação microbiológica
(valores médios)
amostra de ar
UFC/m 3
Placa de
sedimentação
Ø90mm UFC/4h
Placa de
contato Ø55mm
UFC/placa
amostra de
luva (5 dedos)
UFC/luva
a

de ar deve ser menor que 1; em am-
bientes com grau “B”, que circundam
às de grau “A”, para preparações e envases
assépticos, esse número pode
chegar a 10; e nas áreas limpas onde
são realizadas etapas menos críticas
da fabricação de produtos estéreis os
limites podem atingir 100 UFC/m3 (grau
C) e 200 UFC/m3 (grau D). Padrões
também são estabelecidos para amostragens
de superfícies por meio das
análises de placas de sedimentação
para um período de quatro horas, de
placa de contato, além de amostras de
luva dos trabalhadores envolvidos.
O FDA, órgão norte-americano responsável
pela regulação de alimentos
e medicamentos, também adota limites
de contaminação microbiológica para
as diferentes classes de áreas limpas,
conforme demonstra a tabela ao lado.
Clean area
Classification
(0.5 µm
particles/ft 3 )
Classificação cGMP - FDa
IsO
Designation
b
≥ 0.5 µm
particles/m 3
Microbiological
active air
action levelsc (cfu/m 3 )
Microbiological
settling Plates
action levels c,d
(diam. 90mm;
cfu/4hours)
100 5 3,520 1 e 1 e
1000 6 35,200 7 3
10,000 7 352,000 10 5
100,000 8 3,520,000 100 50
Critical area
supporting clean area
Produto e embalagem
estéreis expostos
Área imediatamente
adjacente à linha de
processo asséptico
IsO Classe 5 para
partículas ≥ 0,5 µm
IsO Classe 7 em
operação ou Classe 6
ou Classe 5
less critical activities IsO Classe 8
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Os números integram as orientações
de Boas Práticas de Fabricação do
órgão, o cGMP (current Good Manufacturing
Practices), e são igualmente
levados em conta pelas indústrias
farmacêuticas de todo o mundo, seja
em observância aos padrões e procedimentos
corporativos adotados pelas
suas matrizes ou para que estejam credenciadas
a exportar e comercializar
seus produtos nos Estados Unidos.
Novos conceitos
e discussões
Na sua mais recente edição, a
USP – United States Pharmacopeia
acrescentou novos elementos para
a discussão da contagem microbiana
e do controle de contaminações
microbiológicas. Autoridade oficial
não-governamental que define padrões
para medicamentos e outros
produtos para a saúde, a USP tem as
suas orientações acompanhadas de
perto. Na versão 2011 (USP 34) do
documento são recomendados novos
critérios, que levam em conta a taxa de
incidência de contaminações. O limite
tolerável é de 0,1%. Isso significa que a
cada 1.000 contagens realizadas seria
permitida apenas a ocorrência de uma
placa com até 15 unidades formadoras
de colônia (UFC).
“O problema é que essa contagem
leva um tempo considerável para ser
obtida. Se uma indústria estabelecer,
por exemplo, que vai colher um
amostra por dia em determinada área
ou zona controlada, levará quase três
anos para completar 1.000 placas. Evidentemente,
esse tempo diminui à medida
que mais amostras sejam colhidas
em um mesmo dia, mas ainda assim
demanda longo período de avaliação”,
Expectativa é de que a
norma iSo 14698, que
está sendo revisada,
passe a oferecer
limites de aceitação
baseados em consenso
internacional
considera Silvia Eguchi, diretora de
Microbiologia da Dosage Pesquisas
Laboratoriais e coordenadora do GT 2
da SBCC, grupo de trabalho criado no
âmbito do ABNT CB-46 para tratar de
questões ligadas à biocontaminação
em áreas limpas.
Um dos caminhos para se chegar
a padrões mundiais deve ser a revisão
da norma ISO 14698 – Partes 1 e 2,
publicada em 2003 com a finalidade
de oferecer princípios e metodologia
básica para avaliar e controlar a biocontaminação.
O documento original,
porém, não foi muito adotado, pela
falta de parâmetros objetivos para a
realização de contagens e o estabelecimento
de limites microbiológicos
para as diferentes classes de áreas.
“Muitos profissionais consideram essa
norma um ‘guia’, por apresentar orientações
gerais, mas sem fixar critérios
de níveis de biocontaminação, obtidos
por dados do histórico do controle microbiológico”,
comenta Silvia Eguchi,
que é a delegada brasileira no grupo
de trabalho da ISO encarregado de
discutir a norma. “Do jeito que está, ela
não é exatamente uma norma e, por
isso, especialistas de diversos países
foram convocados para a sua reformulação”,
acrescenta. O processo de
revisão, iniciado há quatro anos, deve
consumir pelo menos mais três, mas a
expectativa é que, ao final, os especialistas
cheguem a números e critérios
globalmente aceitos.
O estabelecimento de padrões internacionais
por meio da norma ISO
esbarra não apenas na dificuldade técnica
de se estabelecer números exatos
– nem sempre facilmente aplicáveis na
área de microbiologia –, mas também
na resistência regional: adotar critérios
mais rígidos que os atuais implica em
rever procedimentos e realizar investimentos
para se adaptar. Representantes
de alguns países participantes das
discussões temem que a introdução
de números na norma se sobreponha
a regulamentações, legislação e guias
locais seguidos atualmente.
Apesar disso, a expectativa é de
que as discussões continuem avançando
e, nos próximos anos, os critérios
estabelecidos sejam mais claros e
harmonizados em todo o mundo. Para
isso, o que se busca é estabelecer
padrões mínimos, aplicáveis de forma
prática e objetiva em todos os países
afiliados à ISO, o que representa uma
evolução do ponto de vista técnico e
também operacional e mercadológico
para uma indústria cuja produção se
dá em escala mundial e com atuação
em mercados globalizados.
A busca pelo aperfeiçoamento das
técnicas de contagem microbiana e a
definição de números consensuais,
que balizem os limites aceitáveis nos
diferentes ambientes classificados,
são os principais desafios vivenciados
pelos profissionais que atuam na
indústria farmacêutica – e também em
outros segmentos como os de alimentos
e de cosméticos – com o objetivo
de desenvolver práticas cada vez
melhores de produção, com adequado
controle microbiológico e segurança
dos seus produtos.

A especialista em microbiologia
Silvia Eguchi, coordenadora do GT
2 da SBCC mantido pelo comitê
ABNT CB-46 para tratar de questões
ligadas à biocontaminação
em áreas limpas defende o estabelecimento
de critérios internacionais
e o aperfeiçoamento dos
métodos de mensuração e controle
microbiano nos ambientes
críticos classificados. Ela comenta
a questão dos números:
Como os limites aceitáveis são
definidos?
São convenções estabelecidas
pelos pesquisadores do assunto e
profissionais que militam na área,
Questão dos números
a partir de estudos e das experiências
práticas. Como se trata de critérios
estabelecidos pelo homem,
os limites fixados estão sujeitos a
questionamentos decorrentes do
avanço científico e do próprio desenvolvimento
de análises estatísticas
aplicadas à microbiologia. Por
isso, é natural que sejam continuamente
discutidos, de acordo com o
avanço técnico-científico.
Mas é importante ter números?
Sim, em termos. Eles são mais
importantes em áreas limpas,
onde a contaminação microbiana
é muito baixa. Buscamos um
indicador numérico, baseado em
C M Y CM MY CY CMY K
Foto: Glaucia Motta
estatísticas e critérios científicos, a
ser tomado como referência. Seja
ele qual for, é importante que seja
acordado por especialistas dos
diversos países e tenhamos parâmetros
claramente estabelecidos.
Caminhamos nesta direção e estou
confiante de que a revisão da
norma ISO 14698 será um avanço
para harmonizar padrões.