TESE CARON-corrig. pos defesa- 08-12-10 -PDF.pdf - Universidade ...

Estas amostras foram colhidas posteriormente a análise sorológica e não
houve relação com os resultados da sorologia. Do total de 70 amostras, as 50
com as melhores condições relativas a pouca hemólise, menor turbidez e
ausência de pedaços de tecidos foram escolhidas para inoculação em ovo
embrionado de galinha. As amostras foram inoculadas em ovos embrionados
de galinha segundo metodologia recomendada no Manual Técnico sobre
emergência sanitária em doença de Newcastle e Influenza aviária (MAPA,
2001).
- As amostras foram preparadas a partir de uma suspensão a 10 - 20%
em PBS pH 7,2 adicionada de antibióticos (anfotericina B a 1,25ug/ mL;
penicilina a 20UI/ mL; e estreptomicina a 200ug/ mL);
4ºC;
- Trituradas, em gral esterilizado, e deixadas em repouso 1 a 2 horas a
- Centrifugadas a 1000 x g durante 10 minutos a 4ºC, sendo recolhido o
sobrenadante;
- A suspensão foi inoculada na cavidade alantóide de ovos embrionados
de galinha de granjas sabidamente negativas para influenza, com 8 a 11 dias
de incubação, no volume de 0,1 a 0,2mL;
- Incubação dos ovos a 37ºC por 7 dias;
- Os embriões foram observados ao longo desta semana para se
observar eventuais mortos ou agonizantes, apesar de não ser o efeito normal
de vírus de origem suína de baixa patogenicidade;
- Ao final dos 7 dias de incubação foi coletado líquido cório-alantóide, e
submetido a prova de hemaglutinação, ou quando possível re-inoculado em
ovos embrionados por mais duas vezes;
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