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Em matriz polimérica Métodos de Imobilização de Enzimas Organogéis de micro emulsão óleo-água como gelatina, agarose ou kcarragenanas, gel de agar, PEO, caseínato de sódio, amido. Ligação Cruzada Adsorção Física Enzimas Encapsuladas Quitosana (QTS), PVA ou QTS/PVA com glutaraldeído. Álcool polivinílico (PVA), galactomanana, xantana, quitosana, poli-óxido de etileno (PEO), poli (ácido acrílico) (Carbopol), nanoparticulas. Enzimas Ligadas Em microcápsulas Quitosana com alginato de cálcio e gliceraldeído,alginatos ou carragenanas com cloreto de cálcio ou potássio, nanoesferas de sílica. Ligação Covalente glutaraldéido. Adsorção Iônica Sílica, sílica porosa, a, celulose, algodãopoli(etilenoglicol) (PEG), resina metacrílico , Resina de trocas iônicas (DEAEsefadex,CMcelulose,Dowex 66, Duolite 568N). Figura 7. Métodos de imobilização de enzimas. (adaptada das refs. (11; 41) ) 16
Ligação em suporte: este método está subdividido em adsorção física, ligação iônica e covalente. O procedimento de adsorção de uma proteína é simples, e é um dos métodos mais utilizados. A enzima é imobilizada em um suporte sólido por ligação de baixa energia, tais como interação de van der Waals ou hidrofóbicas, ligações de hidrogênio ou iônicas. (39) Boscolo e col. relataram a caracterização preliminar de um sistema de adsorção para a lipase de P. fluorescens em uma ciclodextrina recém-sintetizada em nanoesponja de carbonato (CD-NS-1:4). Os parâmetros avaliados foram a atividade e estabilidade estrutural da lipase adsorvida sobre este novo suporte, o efeito da temperatura, pH e solventes orgânicos (metanol) na estrutura e função da enzima, que foram comparados com os da forma livre em solução. (40) Os estudos mostraram que as interações não-covalente da lipase P. fluorescens com o CD-NS-1:4 resultaram na estabilização estrutural e funcional da enzima, pois a mesma mantevese ativa após 66 dias de incubação a t ~18 °C. Ao contrário da enzima solubilizada, a lipase adsorvida foi ativa em t > 40 °C, em pH 5, após 24 h de incubação com 70% (v/v metanol), (atividade residual de 13%). (40) Ligação cruzada: as enzimas estão ligadas umas as outras ou a proteínas inativas (gelatina, albumina), formando uma estrutura tridimensional complexa. Pode ser obtida por métodos físicos ou químicos. Quando obtidas por métodos químicos são resultantes das ligações covalentes entre as enzimas e são favorecidas pelo uso de agentes bi- ou multifuncionais. (41; 42) Gupta e col. utilizaram a técnica de imobilização cruzada (CLEAS – cross-linked enzyme aggregates) para imobilizar a lipase de Thermomyces lanuginosa. Foi observada uma maior eficiência da ligação cruzada quando o sulfato de amônio foi utilizado como precipitantes, juntamente com um duplo aumento na atividade na presença de dodecilsulfato de sódio (SDS). As microfotografias de microscopia eletrônica de transmissão (MET) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) dos CLEAs formados 17
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5. CONCLUSÃO A partir dos resultad
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7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1.
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59. Marples, B. A. Elementary Organ
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79. Habulin, M.; Knez, Z. Optimizat
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