- MIX3 (tampão PCR 1X; 1,5 mM de MgCl2; 200 mM de cada dNTPs; 2,5 U de Taq. DNA polimerase; 380 nM de cada iniciador T2U; T2D). - MIX4 (enzima de restrição Alu1, 0,5 µL de tampão digestão). - MIX5 (acetato de amônia a 8M; isopropanol PA; glicogênio 20 mg/mL, na proporção de 24:75:1). - padrão marcador (50µL de padrão marcador DNA, 95,0 µL de H20 Milli Q. estéril, 20 µL Looding Buffer 6x). Usar 5,0 µL. - PGA1.5 (dissolveu-se 1,5% de gel de agarose em TBE 1X, adicionou-se brometo de etídio a 0,3% mg/mL; solidificou-se em cuba de eletroforese em TA, submergiu-se em TBE 1X; utilizou-se 0,54 de marcador de peso molecular de 100 pb; 2,0 µL de tampão de corrida; 8,0 µL do DNA. Ligou-se a fonte de eletroforese a 110V e 60mA, durante 40,0 minutos. Visualizou-se em UV e documentou-se em câmera Polaroid modelo DS34, com filme 667 de 3000 ASA). - PGA2 (2% de gel de agarose dissolvido em TBE 1X, adicionou-se em brometo de etidio a 0,3% mg/mL; solidificou-se em cuba de eletroforese em TA, submergiu-se em TBE 1X; adicionou-se 0,54 de marcador de peso molecular de 100 pb; 2,0 pL de tampão de corrida; 8,0 µL do DNA. Ligou-se a fonte de eletroforese a 110V e 60mA, durante 40,0 minutos. Visualizou-se em UV e documentou-se em câmera Polaroid modelo DS34, com filme 667 de 3000 ASA). - PK - 204 de PK (solução padrão 400µg/mL). - PTC1 (1 ciclo de 4 minutos a 94°C; seguido de 40 ciclos: cada ciclo de 94°C, 1 minuto; 57°C, 1 minuto e 72°C, 1 minuto e um ciclo de 72°C durante 10 minutos e finalizar com esfriamento de 4°C). - PTC2 (40 ciclos a 94°C durante 1 minuto; 57°C durante 2 minutos; 72°C durante 2 minutos). Extensão final de 72°C durante 10 minutos e esfriamento a 4°C. - TAE 50x (Tris 242g, ácido acético glacial 57,1mL, EDTA a 0,5M pH 8,0, 1000 mL de H20 q.s.p). - tampão amostra 6x (azul de bromofenol 0,25% - 25mg; xyleno cyanol FF 0,25% - 25 mg; glicerol 30% - 3mL; 10mL de H20 q.s.p. 94
- tampão de corrida (10mM Tris HCI pH 7.4; 0,1 mM EDTA; 1mM 2 mercapto etanol; 500 µg/mL BSA; 50mM KCI e 50% U/U glicerol). - tampão POR 10x (100mM de Tris HCI pH 9,0; 15mM - MgCI2; 500 mM KCI). Usar 1X. - TBE 10x (108 g Tris base, 55g ácido bórico, 40 mL; 0,5 M EDTA pH 8,0, 1000mL de H20 q.s.p.). - TE (1,0 mM de Tris HCI pH 8,0; 00.1 mM EDTA, 1000mL de H20 q.s.p.). 95
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UNIVERSIDADE FLUMINENSE CENTRO DE C
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aar = bacilo álcool ácido resiste
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Observa-se na rotina do Laboratóri
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estados como Minas Gerais, Espírit
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as células fagocitárias transform
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Quando esta reação for em consequ
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aproximadamente 10 4 bacilos por mL
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anti-BCG e encontraram positividade
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Plikaytis et al., (1990), utilizara
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Santos et al., (1995) ensaiaram um
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4.1 - Material 25 4. MATERIAL E MÉ
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1 - Utilizou-se 10 vezes mais o vol
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de agarose dissolvido em TBE 1X, ad
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Teste dos controles e das amostras
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Tabela 12: Teste de inibidores das
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Os 73 casos com baar negativo (PB)
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