Dissertação em PDF - departamento de engenharia florestal - ufpr ...

Quando o material de origem é proveniente de sementes, os métodos de
desinfestação devem ser eficazes para que a plântula esteja livre de
microorganismos maléficos (COUTO et al., 2004).
Várias substâncias com ação germicida podem ser utilizadas neste
processo, sendo mais comum agentes como etanol e compostos a base de cloro, tal
como hipoclorito de sódio e hipoclorito de cálcio. Além desses, também podem ser
utilizados bicloreto de mercúrio, ácido clorídrico, peróxido de hidrogênio, entre outros
(GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998).
Após esta desinfestação, o material deve ser triplamente lavado em câmara
de fluxo laminar com água destilada autoclavada, pois a permanência de resíduos
pode prejudicar tecidos sadios e comprometer o desenvolvimento da plântula
(GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998).
3.2.3 Isolamento do Material Vegetal
O isolamento do material vegetal deve ser realizado dentro de câmaras de
fluxo laminar após a desinfestação do mesmo (GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998).
Deste modo, a contaminação por microorganismos diminui e é até mesmo evitada
(GEORGE; SHERRINGTON, 1984). A manipulação nesta fase é o que condiciona a
sobrevivência do explante (GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998).
É necessária destreza manual para evitar, principalmente, a desidratação dos
tecidos (GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998). A excisão do explante em um curto
espaço de tempo, a inoculação em meio de cultura e a imediata vedação do frasco
são fundamentais para evitar a desidratação do material (HU; WANG, 1983).
São utilizados, nesta fase, diversos instrumentos, como bisturis, pinças de
tamanhos variados, estiletes, seringas, dentre outros, que devem ser flambados
após serem imersos em solução de etanol absoluto e utilizados apenas após seu
resfriamento a fim de evitar danos aos tecidos do explante (GRATTAPAGLIA;
MACHADO, 1998).
Alguns problemas podem surgir durante o isolamento dos explantes. A
oxidação dos compostos fenólicos liberados pelas células que foram danificadas
com o corte é o mais freqüente e crítico no isolamento de explantes de espécies
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