Revista Biosfera - 1ª Edição

e l l y C r i s t i n a S i l v a C a r v a l h o , T a í c i a P a c h e c o F i l l 1 , P r o f . D r .
K
d s o n R o d r i g u e s - F i l h o 2
E
Otimização da extração proteica do fungo Penicillium
brasillianum, um endofítico de Melia azedarach
Introdução
Muitos micro-organismos, em especial os
fungos endofíticos, têm se mostrado uma
fonte importante de metabólitos
secundários bioativos e enzimas
responsáveis pelas mais diversas reações.
Entretanto, estudos genômicos recentes
revelaram que o potencial biossintético
destes organismos é muito inexplorado,
uma vez que apenas alguns genes
responsáveis pela biossíntese de produtos
naturais são expressos sob as condições
de cultivo laboratoriais.
Visando a produção desses metabólitos
secundários bioativos, assim como novas
enzimas biossintéticas, estudos com
enfoque na abordagem OSMAC (One
Strain Many Compounds) são de grande
interesse. Esta abordagem se baseia em
alterações das condições de cultivo no
sentido de gerar diversidade metabólica e,
no caso em estudo, diversidade
proteômica. Nosso principal interesse esta
no fungo endofítico P. brasilianum,
produtor de diferentes metabólitos
secundários, como alcalóides
tremorgênicos, meroterpenos inseticidas e
brasiliamidas, indicando o seu grande
potencial químico e bioquímico1.
O principal objetivo do presente trabalho
foi realizar modificações no meio de
cultivo do fungo P. brasillianum e verificar
alterações no seu metabolma e proteôma.
As modificações incluiram adição de sais
inorgânicos ao meio de cultura como
NaCl, KCl, FeCl3, CaCl2, CuCl2, NiCl3,
CoCl2, NaBr e KBr, e posteriormente
extração de metabólitos e proteínas.
Estudando e realizando experimentos
com tais modificações, visou-se melhorar
os rendimentos dos metabólitos
secundários, gerando assim uma
ampliação dos estudos sobre o endofítico
P. brasillianum.
Resultados e Discussões
Inicialmente, visando a otimização dos
parâmetros de extração proteica, o fungo
P. brasillianum foi cultivado em meio
líquido Czapek’s por 15 dias, em triplicata.
Após este período, adicionou-se ao
micélio, N2-liq para que fosse possível
triturá-lo. Em seguida, testou-se dois
diferentes tampões de extração, o
primeiro 50mM Tris-HCl pH 8.5, e
posteriormente o tampão fofato pH 7.