V. Tüberküloz Lab. Tanı Yöntemleri Uyg. Kurs Kitabı - Klimik

) ELD‹VEN DE⁄‹fiT‹R‹L‹R
c) Plate yerleflim plan›na göre Priming kuyucuklar› haz›rlan›r,
d) Pipet program› seçilir (DTB Pipet Prog 1), pipetörün uç aral›klar› ayarlan›r
e) Numune ve kontrol tüplerinden 200 μl çekilir.
f) Pipet aral›¤› kapat›l›r ve Priming kuyucuklar›na 150 μL numune aktar›l›r
(Aktarma yap›l›rken kuyucuklar›n duvar›na do¤ru b›rakmak kross
kontaminasyonun önlenmesi için önemlidir).
g) Pipet uçlar› at›l›r ve numune tüpleri yeni kapaklarla kapat›larak kald›r›l›r.
h) Priming kuyucuklar›n›n üzeri plastik kapa¤› ile kapat›larak 20 dk oda ›s›s›nda
inkübasyona b›rak›l›r ( Bu süre 6 saate kadar uzat›labilir)
i) ELD‹VEN DE⁄‹fiT‹R‹L‹R
fiekil 13 fiekil 14
a) ‹nkübasyon süresinin sonuna do¤ru Priming kuyucuklar›n›n haz›rlan›fl›na
benzer flekilde Amplifikasyon kuyucuklar› haz›rlan›r
b) Süre sonunda Priming kuyucuklar› üzerindeki plastik kapak ç›kart›l›r ve Priming
Is›t›c›s›na (72C) konulur. Buna paralel olarak ayn› zaman dilimi içerisinde haz›rlanan
Amplification kuyucuklar›da Amplifikasyon ›s›t›c›s›na yerlefltirilir
(54 C). 10 dk. (+ / - 1 dk.) beklenir. Bu aflamada süre oldukça kritiktir.
c) ‹nkübasyon s›ras›nda Pipetörde ‘’DTB Pipet Prog 5’’ seçilir. Süre bitiminde
Priming kuyucuklar›ndan 100 μL al›n›p Amplifikasyon kuyucuklar›na aktar›l›r
ve hava kabarc›¤› oluflturmadan pipet program›n›n 50 μL ‘lik hacmi ile üç kez
kar›flt›r›l›r.
d) ‹fllem tamamland›¤›nda Amplifikasyon kuyucuklar›n›n›n üzeri yap›flkan bir
kart ile tüm test kuyucuklar› tamamen kapat›l›r. Yap›flkanl› kapak pla¤›n d›fl›na
ç›kmamal›d›r (aksi takdirde cihazdaki okumalarda hata ç›kabilir)
102