ANTİGLOBULİN TESTLER - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği
ANTİGLOBULİN TESTLER - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği
ANTİGLOBULİN TESTLER - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Tanımlarİnsan nsan globulinlerine karşıoluşan antikorlaraAnti-HumanGlobulinler(AHG, AHG, antikorlara karşıgelişen en anti-antikor)antikor)Bu u antikorların n kullanıldldığıtestlere:Anti-HumanGlobulin(AHG) Testi<strong>ve</strong>yaCoombs TestidenirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 2
Direkt Antiglobulin Testi(DAT)Eritrosit yüzeyinde yer alan antijenlerin,kendilerine özgül antikorlarla vücutta kaplanışınıgöstermek (sensitizasyonunu) için yapılan testeDAT <strong>ve</strong>ya Direkt Coombs Testi denirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 3
Indirekt Antiglobulin Testi(IAT)Eritrosit sensitizasyonunun vücut dışındagerçekleştirilmesi ile serum/plazmada eritrositantijenlerine karşı gelişen serbest antikorlarınvarlığını göstermek için yapılan testlereIAT <strong>ve</strong>ya Indirekt Coombs Testi denirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 4
Direkt <strong>ve</strong> İndirektAntiglobulin TestiUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 5
Direkt Coomb’s Testi,Direkt Antiglobulin TestiHastanınörneğiAgglutinasyonUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 6
DAT (+)1. Hastalarda %102. <strong>Kan</strong> donörlerinde 1/1000-1/10000Ulusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 7
DAT (+) Nedenleri-I1. Eritrosit antijenlerine karşı oluşmuşotoantikorların komplemanla birlikte <strong>ve</strong>ya tekbaşına eritrosit yüzeyini kaplaması2. <strong>Transfüzyon</strong> sonrası alıcı alloantikorlarınındonör eritrosit yüzeyini kaplaması3. Donör plazmasındaki antikorların alıcıeritrositlerinin yüzeyini kaplamasıUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 8
DAT (+) Nedenleri-II1. Annedeki alloantikorların fetus eritrositlerinikaplaması,2. Çeşitli ilaçlar ( Penisilin, sefalosporin, quinidine,phenacetin vb )3. Yüksek doz gamaglobulin tedavisi4. HipergamaglobulinemiUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 9
İndirekt Coomb’s Testi1. basamakHastanınörneği2. basamakAgglutinasyonUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 10
Alloantikor-Otoantikor-I1. Alloantikor : Bireyin kendi eritrositlerininyüzeyinde taşımadığı antijenlere karşıgeliştirdiği antikor2. Otoantikor : Bireyin kendi eritrositlerininyüzeyinde taşıdığı antijenlere karşı geliştirdiğiantikorUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 11
Alloantikor-Otoantikor-IIOtokontrol Test Hücresi AntikorPozitif Negatif OtoantikorNegatif Pozitif AlloantikorPozitif Pozitif OtoantikorOtoantikor+AlloantikorUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 12
Alloantikor OluşturanDurumlar1. <strong>Transfüzyon</strong>2. Hamilelik3. Transplantasyon4. Tanımlanamayan nedenlerUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 13
Önemli Antikor1. 37 o C’de reaktifdir2. Verilen eritrositin ömrünün kısalmasına3. Yenidoğanın hemolitik hastalığına4. Hemolitik transfüzyon reaksiyonuna nedenolanUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 14
TARAMA-TANIMLAMA1. Antikor Tarama Testi: bireyde eritrosit antijenlerine karşıantikor olup olmadığıığını tespit etmek içindiriindir2. Antikor Tanımlama Testi: var olan ya da muhtemel olanantikorun hangi kan grup sistemi ile ilişkili olduğunu unu <strong>ve</strong>hangi eritrosit antijenine karşıgeliştitiğini ini tespit etmekiçindirindirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 15
ANTİKOR TARAMA-TANIMLAMA<strong>TESTLER</strong>İ-I1. Fenotipik yapısı bilinen (tercihan homozigot) iki <strong>ve</strong>ya üç farklıdonörden alınmış test hücreleri tarama, daha fazla sayıda testhücreleri ise tanımlama testlerinde kullanılmalıdır2. Bir antikor homozigot hücrelerle heterozigot hücrelere göredaha kuv<strong>ve</strong>tli aglütinasyon oluşturuyorsa dozaj gösterdiğindensöz edilirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 16
ANTİKOR TARAMA-TANIMLAMA <strong>TESTLER</strong>İ-II1. Otokontrol (allo-oto antikor ayrımı) kullanılmalıdır2. Serumda, az rastlanılan eritrosit antijenlerine karşı birantikor varsa tarama testleri negatif olabilir. Bu türantikorların varlığı uygun olmayan cross-match testi ilegösterilebilirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 17
İndirekt antiglobulin testi;IAT; ETKİLEYENFAKTÖRLER1. İnkübasyon süresi <strong>ve</strong> sıcaklık2. pH3. İyonik konsantrasyon (İyonik güç)4. Antikorun afinite sabiti5. Antijen <strong>ve</strong> antikor oranıUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 18
İnkübasyon Süresi <strong>ve</strong> Sıcaklık1. Aglütinasyonun ilk aşamasını <strong>ve</strong>ya sensitizasyon fazınıetkileyebilir2. Klinik olarak önemli antikorlar, genellikle 30-37°Carasında reaksiyona girer3. Çoğu antikorlar, tuz <strong>ve</strong> albüminli test ortamları kullanıldığıtakdirde 37°C’de ortalama 30 dakikalık bir inkübasyonzamanı gerektirir4. Zayıf reaktif antikorlarda sürenin uzatılması gerekebilirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 19
pH6.8-7.2, fizyolojik pH uygundurUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 20
İyonik Güç1. Serum fizyolojikli ortamda Na+ (negatif yük etrafında) <strong>ve</strong> Cl- (pozitifyük etrafında) iyonları antijen <strong>ve</strong> antikorun çevresinde kümelenirler2. Zıt yüklü moleküller arasındaki çekme gücü azalınca antikorunantijenle bir araya gelmesi engellenir3. Düşük iyon gücüne sahip solüsyonlar (LISS) kullanıldığındaortamdaki iyon sayısı azalır; pozitif <strong>ve</strong> negatif yükler ortaya çıkar4. LISS, inkübasyon süresini kısaltır (37°C’de 10–15 dakika)Ulusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 21
Antikorun Afinite Sabiti1. Afinite sabiti, eritrositin herhangi bir antikora spesifik olaraksahip olduğu karakteristiklerden biridir2. Genelde denge sabiti ne kadar yüksekse antijen-antikorreaksiyonunun sensitizasyon fazında antikorların birleşmesi okadar yüksektirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 22
Antijen-Antikor Oranı1. Reaksiyon hızı, ortamdaki antikor miktarı <strong>ve</strong> eritrositantijenlerinin sayısına bağlıdır2. Antikor miktarını artırmak, test duyarlılığını artırabilir3. Nadiren, önemli antikor fazlası “prozon fenomeninin”oluşmasına neden olur4. Eritrosit serolojisinde sıklıkla kullanılan oran, 1 damla %2–5’ lik eritrosit süspansiyonuna 2 damla serum şeklindedir.Hemolitik transfüzyon reaksiyonlarında serum miktarı 10–20 kat artırılabilirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 23
Antihuman Globulin Reagenler1. Polispesifik AHG2. Monospesifik AHGn Anti-IgGn Anti-C3d <strong>ve</strong> Anti-C3bn Anti-C3dUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 24
Polispesifik AHG Reagenleri1. Poliklonal; Tavşan poliklonal anti-IgG <strong>ve</strong> anti-C3d içerir(Diğer antiglobulin antikorları <strong>ve</strong> antikomplemanlarıiçerebilir)2. Monoklonal karışım; Bir tavşan poliklonal anti human IgG<strong>ve</strong> fare monoklonal anti-C3b,C3d içerir3. Monoklonal; Fare monoklonal anti-IgG,-C3b <strong>ve</strong> –C3diçerirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 25
Monospesifik Anti-IgG AHGReagenlerinPoliklonal IgG; Tavşan poliklonal IgG, anti komplemanaktivitesi olmadan IgG ağır zincirleri sadece insangamaglobulinlerine karşı reaktif olan anti IgG içerirnMonoklonal IgG; ; Fare monoklonal anti-IgGiçerirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 26
Monospesifik Anti-C3d <strong>ve</strong> C3bAHG Reagenleri1. Poliklonal anti-C3d <strong>ve</strong> C3b (tavşan)an)2. Poliklonal anti-C3d, C4b, C4b (tavşan)an)3. Sadece işaretlenmiiaretlenmiş kompleman kompenentlerine karşıreaktif olan <strong>ve</strong> anti immünglobulinaktivitesi olmayanantikorları içerirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 27
Monospesifik Anti-C3d AHGReagenleri1. Monoklonal (fare)2. Monoklonal anti-C3d, C3b (fare)3. Sadece işaretlenmiiaretlenmiş kompleman kompenentlerinekarşıreaktif olan <strong>ve</strong> anti immünglobulinaktivitesiolmayan antikorları içerirUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 28
HastanıneritrositleriAgglutinasyonHastanıneritrositleriAgglutinasyonUlusal Direkt <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> Coomb’s <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 29
HastanınserumuEritrositİndirekt Coomb’s testiUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 30
Değerlendirme 1Çapraz karşılaştırmaOda ısısıIAT 37°C-Reaktiviteyi(+)inkübasyonartırmaALLOANTİKOR TANIMLAMAUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 31
Değerlendirme 2Otolog kontrol(-) (+) DATAlloantikor taramaAlloantikor tarama(+) (+)(-)AlloantikorOtoantikorOto antikorOtoantikor + AlloantikorUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 32
Değerlendirme 31. Miks aglutinasyon varlığı2. Rulo formasyonu / gerçek aglutinasyonUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 33
Reaktiviteyi ArtırmaAMAÇ:1) Aglütinasyonu arttırma2) İnkübasyon süresinikısaltmaKULLANILANLAR: LISSPEGAlbuminPolybreneUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 34
Hatalı Negatif DAT <strong>ve</strong> IAT-11. Eritrositlerin yeterli yıkanmaması2. AHG serumun geç eklenmesi3. Personelin değerlendirme becerisi4. Düzensiz santrifüjleme5. Eritrosit konsantrasyonunun hatalıolması6. Yüksek konsantrasyonda IgGparaproteini7. Yıkama solüsyonunun düşük pH düzeyiUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 35
Hatalı Negatif DAT <strong>ve</strong> IAT-2*Hatalı negatif DAT1. Sadece komplemanla kaplanmışhücrelerde değerlendirmenin geçyapılması2. Düşük antikor düzeyi*Hatalı negatif IAT1. Uygun koşullarda saklanmayan panelhücreleri2. Serum yerine plazma kullanmakUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 36
Hatalı Pozitif DAT <strong>ve</strong> IAT1. Soğuk reaktif otoantikorlar2. Kirli cam eşyalar3. Kontamine solüsyonlar4. Aşırı santrifüjleme5. Örnek almada silikon jelli tüp kullanımı6. Dextroz <strong>ve</strong>rilen damar yolundan örnekalmaUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 37
Test Teknikleri1. Tüp Metodu2. Solid Faz Eritrosit Adherans yöntemi3. Kolon Aglütinasyon Teknolojisi - Jel Metodu4. Immunflouresan5. Radioimmunassay6. ELISA7. Monoklonal antikor spesifik eritrosit antijenimmunobilizasyonu (MAIEA)Ulusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 38
Ulusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Gölcük Tıbbı Kursu Isparta39
<strong>Kan</strong> VerHayat VerUlusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong>Tıbbı Kursu 40
Change language