kolumnowa chromatografia cieczowa w rozdzielaniu i analizie ...

Rozdzielanie chromatograficzne strawionych peptydów jest prowadzonez zastosowaniem kolumnowej chromatografii cieczowej w warunkachelucji gradientowej. Tak zwane wielowymiarowe uk ady chromatograficznez systemem prze czania kolumn s cz sto wykorzystywane. Na rysunku 9chromatogram obrazuje przyk ad rozdzielania peptydów uzyskanych z kazeinypo trawieniu trypsyn [74]. Produkty strawienia s u jako odcisk palcaanalizowanego bia ka.Poprzez po czenie stworzonych map peptydowych po trawieniutrypsyn z odpowiednimi bazami danych biolodzy i biotechnolodzy niedawnouzyskali bardzo skuteczne narz dzie identyfikacji oparte na technikachHPLC i MS.Rys. 9. Przyk ad rozdzielania peptydów powsta ych po trawieniu trypsyn kazeiny na kolumnieJupiter proteo 90 Å column [72]CHROMATOGRAFIA POWINOWACTWA(AFFINITY CHROMATOGRAPHY)Bardzo szerokie zastosowanie do rozdzielania bia ek znajduj szczególnieselektywne metody chromatografii powinowactwa (Affinity Chromatography).Ta technika jest przede wszystkim wykorzystywana do specyficznychzastosowa i do bia ek o konkretnych w a ciwo ciach. Jedynie tzw.chromatografia metalopowinowactwa [10,75] ma do ogólne zastosowaniedo rozdzielania bia ek i peptydów posiadaj cych atomy siarki w cz steczce.W innych zastosowaniach chromatografii powinowactwa metody post powanias cz sto zale ne od enzymatycznych lub koenzymatycznych w a ciwoci wyodr bnianych bia ek. Mimo stosowania nazwy chromatografia powinowactwa,metody powinowactwa winny by raczej zaliczane do grupymetod selektywnej chemisorpcji ni do metod chromatograficznych. Chromatografiapowinowactwa zostanie szerzej omówiona w nast pnej pracy.133