Maxwell® 16 Blood DNA Purification System - Promega
Maxwell® 16 Blood DNA Purification System - Promega
Maxwell® 16 Blood DNA Purification System - Promega
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
3.B. Klargøring af humane buffy coat-prøver<br />
Tabel 2. Buffy coat-prøvevolumen og forbehandlingskrav.<br />
Prøvetype Kit Volumen Forbehandlingskrav<br />
Human buffy<br />
coat<br />
Behandlingskapacitet og -udbytte af buffy coat-prøver<br />
Centrifugering af fuldblodsprøver ved 2.000 × g i 20 minutter resulterer i, at materialet<br />
deles i tre lag: et bundlag, som hovedsageligt indeholder røde blodlegemer, et toplag<br />
af plasma og et tyndt hvidt lag i grænsefladen med en koncentration af hvide<br />
blodlegemer. Der kan anvendes en 1 ml pipette til med forsigtighed at opsamle<br />
de koncentrerede hvide blodlegemer (buffy coat) fra grænsefladen. Dette fører<br />
typisk til en tidobbelt koncentration af hvide blodlegemer i en blodprøve, afhængig<br />
af brugerens teknik, og hvor godt de hvide blodlegemer samler sig. Karakteristika<br />
såsom prøvens alder og opbevaring, plasmalagets klarhed og tællingen af hvide<br />
blodlegemer kan påvirke genvindingen af buffy coat-fraktionen og det resulterende<br />
<strong>DNA</strong>-udbytte.<br />
En volumen på 250 µl buffy coat (opnået fra 2,5 ml fuldblod) kan behandles vha.<br />
Maxwell ® <strong>16</strong> <strong>Blood</strong> <strong>DNA</strong> Cartridge og buffy coat-metoden.<br />
Bemærkninger:<br />
<strong>Blood</strong> <strong>DNA</strong><br />
<strong>Purification</strong><br />
<strong>System</strong><br />
(katalognr.<br />
AS1015)<br />
250 µl<br />
koncentreret<br />
fra 2,5 ml<br />
fuldblod<br />
1. Rotér Vacutainer ® -røret<br />
i 20 minutter ved 2.000 × g.<br />
2. Hent de hvide blodlegemer<br />
op vha. en 1 ml pipette.<br />
3. Sæt prøven over i hul nr. 1.<br />
1. Elueringsvolumenen er vigtig.<br />
Anbring 300 µl elueringsbuffer i Maxwell ® <strong>16</strong>-elueringsrøret ved behandling af<br />
250 µl buffy coat-prøve. En del af elueringsbufferen vil gå tabt under kørslen<br />
pga. fordampning og absorption i MagneSil ®-partiklerne under elueringen.<br />
2. Når der arbejdes med koncentreret, genomisk <strong>DNA</strong>, kan eventuelle MagneSil ®-<br />
!<br />
restpartikler fjernes ved at udføre en sekundær clearing af Magnetic Elution<br />
Rack eller ved centrifugering af det eluerede materiale og overførsel af<br />
supernatanten til et nyt rør.<br />
3. Koncentrationen af den oprensede <strong>DNA</strong> bør måles via absorbans ved A 260.<br />
<strong>DNA</strong>-renheden bør bekræftes ved agarosegelelektroforese og ved at måle<br />
A 260/A 280-forholdet, som typisk er >1,7.<br />
4. Der skal inkluderes egnede kontroller i alle efterfølgende diagnostiske<br />
anvendelser, som gør brug af <strong>DNA</strong> oprenset vha. Maxwell ® <strong>16</strong> <strong>System</strong>.<br />
5. Under ydelsesvurderingen blev det vist, at overførslen af <strong>DNA</strong> mellem<br />
Cartridges var
Change language