Maxwell® 16 Blood DNA Purification System - Promega

More documents

Recommendations

Info

3.B. Klargøring af humane buffy coat-prøver Tabel 2. Buffy coat-prøvevolumen og forbehandlingskrav. Prøvetype Kit Volumen Forbehandlingskrav Human buffy coat Behandlingskapacitet og -udbytte af buffy coat-prøver Centrifugering af fuldblodsprøver ved 2.000 × g i 20 minutter resulterer i, at materialet deles i tre lag: et bundlag, som hovedsageligt indeholder røde blodlegemer, et toplag af plasma og et tyndt hvidt lag i grænsefladen med en koncentration af hvide blodlegemer. Der kan anvendes en 1 ml pipette til med forsigtighed at opsamle de koncentrerede hvide blodlegemer (buffy coat) fra grænsefladen. Dette fører typisk til en tidobbelt koncentration af hvide blodlegemer i en blodprøve, afhængig af brugerens teknik, og hvor godt de hvide blodlegemer samler sig. Karakteristika såsom prøvens alder og opbevaring, plasmalagets klarhed og tællingen af hvide blodlegemer kan påvirke genvindingen af buffy coat-fraktionen og det resulterende DNA-udbytte. En volumen på 250 µl buffy coat (opnået fra 2,5 ml fuldblod) kan behandles vha. Maxwell ® 16 Blood DNA Cartridge og buffy coat-metoden. Bemærkninger: Blood DNA Purification System (katalognr. AS1015) 250 µl koncentreret fra 2,5 ml fuldblod 1. Rotér Vacutainer ® -røret i 20 minutter ved 2.000 × g. 2. Hent de hvide blodlegemer op vha. en 1 ml pipette. 3. Sæt prøven over i hul nr. 1. 1. Elueringsvolumenen er vigtig. Anbring 300 µl elueringsbuffer i Maxwell ® 16-elueringsrøret ved behandling af 250 µl buffy coat-prøve. En del af elueringsbufferen vil gå tabt under kørslen pga. fordampning og absorption i MagneSil ®-partiklerne under elueringen. 2. Når der arbejdes med koncentreret, genomisk DNA, kan eventuelle MagneSil ®- ! restpartikler fjernes ved at udføre en sekundær clearing af Magnetic Elution Rack eller ved centrifugering af det eluerede materiale og overførsel af supernatanten til et nyt rør. 3. Koncentrationen af den oprensede DNA bør måles via absorbans ved A 260. DNA-renheden bør bekræftes ved agarosegelelektroforese og ved at måle A 260/A 280-forholdet, som typisk er >1,7. 4. Der skal inkluderes egnede kontroller i alle efterfølgende diagnostiske anvendelser, som gør brug af DNA oprenset vha. Maxwell ® 16 System. 5. Under ydelsesvurderingen blev det vist, at overførslen af DNA mellem Cartridges var
! 3.C. Klargøring af Maxwell ® 16 Cartridge Figur 1. Maxwell ® 16 Blood DNA Purification System Cartridge. Prøven sættes i hul nr. 1. Følg de standardmæssige laboratorieprocedurer for at undgå krydskontaminering af prøverne. Bær handsker og skift dem ofte. Anvend aerosolresistente spidser ved overførsel af prøver for at mindske potentialet for krydskontaminering. Anvend ikke Cartridges, hvis forseglingerne er blevet beskadiget eller mangler. 1. Anbring alle de Cartridges, der skal anvendes, i Maxwell ® 16 Cartridge Rack med den kammede side af Cartridge med front mod holderens nummerside. Fjern forsigtigt forseglingen fra hver enkelt Cartridge. Sørg for at undgå kontaminering af reagens-Cartridges når forseglingen fjernes. Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399, USA Gratisnummer i USA 800-356-9526 · Telefon 608-274-4330 · Fax 608-277-2516 · www.promega.com Delnr. TM301 Trykt i USA. Side 8 4/13 5361MB
Page 1 and 2: Teknisk vejledning Maxwell ® 16 Bl
Page 3 and 4: Begrænsninger i brugen Maxwell ®
Page 5 and 6: 2. Produktkomponenter, opbevaringsf
Page 7: 3. Inden du går i gang Materialer,
Page 11 and 12: 4. Automatisk DNA-oprensning i Maxw
Page 13 and 14: 5. Fejlfinding Kontakt venligst det

Maxwell® 16 Blood DNA Purification System - Promega

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?