Elucigene - Gen-Probe, Inc.

Elucigene ® CF29 v.2
Brugervejledning
Det forstærkende modstanddygtige mutationssystem (Amplification Refractory Mutation System
(ARMS ® ) beskyttes af det europæiske patent nr. 0332435, USA patent nr. 5595890 og
tilsvarende patenter verden over.
Varemærket ARMS ® tilhører AstraZeneca UK Ltd. og anvendes under licens.
Varemærket Elucigene ® tilhører Gen-Probe Life Sciences Ltd.
Varemærket NuSieve ® tilhører Lonza. Varemærket AmpliTaq Gold ® tilhører Roche Molecular
Systems Inc.
Elucigene ® sættene er udviklet og fremstillet af Gen-Probe Life Sciences Ltd inden for
kvalitetssystemer, der anerkendes af ISO9001:2008 et ISO13485:2003
Fremstillet af Gen-Probe Life Sciences Ltd.
Heron House
Oaks Business Park
Crewe Road
Wythenshawe
Manchester
M23 9HZ
For salgsafdeling, kundeservice og teknisk support:
T: +49 (0) 6122 7076 451
F: +49 (0) 6122 7076 155
E: customerservice@gen-probe.eu
E: technicalsupport@gen-probe.eu
CF030BY005DK
08/2012
Copyright 2012 Gen-Probe Life Sciences Ltd
Side 1 af 13

ELUCIGENE CF30
Katalog nr. - CF030B1 – 25 tests med AmpliTaq Gold
Anvendelsesområde
Til simultan kvalitativ in vitro-påvisning af menneskelige genmutationer ved cystisk fibrose
transmembrane konduktionsregulatorkanaler (CTFR) Y1092X, 1717-1G>A, G542X, W1282X,
N1303K, ΔF508, 3849+10kbC>T, 394delTT, 621+1G>T, R553X, G551D, R117H, R1162X,
R334W, A455E, 2183AA>G, 3659delC, 1078delT, ΔI507, R347P, S1251N, E60X,
1811+1.6kbG>A, 3272-26A>G, 3120+1G>A, 2789+5G>A, 711+1G>T, G85E, Y122X og W846X
i menneskeligt fuldblodsprøver. Derudover kan testen skelne mellem personer, der er
heterozygotiske og homozygotiske i forhold til mutationen ΔF508.
Procedurens principper
Metoden, der anvendes af ELUCIGENE CF30 sættet, er baseret på teknologien ARMS
(allelspecifik amplifikation), der kan påvise punktmutation eller mindre bortfald i
deoxyribonukleinsyre (DNA) (6) . Princippet med ARMS er, at oligonukleotider med en 3’
fejlparret rest under visse forhold ikke vil fungere som polymerasekædereaktion (PCR) primers.
Valget af egnede oligonukleotider tillader forstærkning og påvisning af specifikke mutant- eller
normale DNA-sekvenser.
Advarsler og sikkerhedsforanstaltninger
1. Kun til professionel in vitro-diagnostik.
2. Den normale DNA-kontrol i dette sæt er testet individuelt og fundet negativ for hepatitis B
virus (HBV), hepatitis C virus (HCV) og human immundefekt virus (HIV) 1 og 2.
3. Vær forsigtig ved håndtering af menneskelige materialer. Alle prøver skal anses som
eventuelt smittefarlige. Ingen testmetoder kan give fuld sikkerhed for, at HBV, HCV, HIV
1 eller andre smittefarlige agenter ikke er til stede.
4. Licenser for in vitro-diagnostikanalyse af genmutationer, der opdages af disse reagenser,
kan kræves og er reagenskøberens ansvar.
5. Håndtering af prøver og testkomponenter, deres anvendelse, opbevaring og
bortskaffelse skal ske i overensstemmelse med nationale bestemmelser og lovgivning
vedr. biologisk risikomateriale.
6. Opbevar alle reagenser ved under –20°C. Bortskaf 3 måneder efter åbning medmindre
der er tale om delalokvotering
Side 2 af 13

Symboler anvendt på etiketter
Symbolerne anvendt på alle etiketter og emballage stemmer overens med den harmoniserede
standard EN980
REF
LOT
X°C
Producent
Antal tests
Se brugsvejledningerne
Opbevar under den angivne temperatur
Anvend før den angivne dato
Katalogkode
Partinummer
Side 3 af 13

Medfølgende materialer
1. 1 hætteglas x 450l hver med CF030TA, CF030TB, CF030TC og CF030TD). –Mængden
af hætteglas er tilstrækkelig til 25 tests, hver af 4 primermix (TA,TB,TC og TD)
indeholdende primers til påvisning af følgende 29 CFTR-mutationer: Y1092X, 1717-
1G>A, G542X, W1282X, N1303K, ΔF508, 3849+10kbC>T, 394delTT, 621+1G>T,
R553X, G551D, R117H, R1162X, R334W, A455E, 2183AA>G, 3659delC, 1078delT,
ΔI507, R347P, S1251N, E60X, 1811+1.6kbG>A, 3272-26A>G, 3120+1G>A,
2789+5G>A, 711+1G>T, G85E, Y122X og W846X. Hvert primermix indeholder også
kontrolprimers og deoxynukleotidtrifosfater i buffer
2. 1 hætteglas x 200µl med CR000TV fortyndingsmiddel (Dilution Buffer (DB))
3. 1 hætteglas x 600µl med CR000TR initialfarve (Loading Dye (LD)) til 25 tests
4. 1 hætteglas x 50µl med CR050TW AmpliTaq Gold ® (AG) tilstrækkelig til 25 tests.
5. 1 x 50µl hætteglas med CF030TX DNA-kontrol (DC), normalt til mutationer, der er påvist
af ELUCIGENE TM CF30
25 farvede PCR-hætteglas (orange, lilla, grøn og blå) kan fås efter forespørgsel.
Påkrævede, men ikke medfølgende materialer
DNA-forberedelse - sterilt afioniseret vand af god kvalitet; natriumklorid (NaCl);
ethylendiamintetraeddikesyre; dinatriumsalt (EDTA); pelleteret natriumhydroxid (NaOH); 2amino-2-(hydroxymetyl)-1,3-propanediol;
krystalliseret (Tris-base); saltsyre 36% sp.gr.1.18
(HCl); ammoniumklorid (NH4Cl).
PCR-amplifikation – Sigma let hvid mineralolie*; sterilt destilleret vand af god kvalitet.
(a) Påkrævet til termiske variatorer uden opvarmede låg og til PCR-amplifikation i 0,5 ml PCR-
hætteglas.
Elektroforese – materialer til geleelektroforese som f.eks. NuSieve 3:1 Agarose (Lonza) og
50 baseparstige (Amersham Pharmacia Biotech).
Påkrævede materialer
Generelt
Laboratorieartikler – handsker; mikrofugerør med skruelåg; rørholdere; pipettespidser.
Laboratorieudstyr – præcisionspipetter (2 sæt: 1 til før-amplifikation og 1 til efter-amplifikation -
helst positive forskydningspipetter); glasartikler; beskyttelsesbeklædning; hvirvelblander;
mikrofuge; vægt.
DNA-forberedelse - Varmeblok (varmer op til 100°C).
PCR-amplifikation – Termisk variator, som rummer 0,5 ml, eller 0,2 ml hætteglas med en
temperaturnøjagtighed på +/-1,0°C mellem 33°C og 100°C og statisk temperaturensartethed på
+/-1°C. Valgfrie opvarmede låg.
Side 4 af 13

Elektroforese – Horisontal undervands-gelebeholder; strømforsyningsenhed; mikroovn;
vandbad til nedkøling af agarose; UV-kameralysbord; fotografisk system.
Prøveudtagning og opbevaring
Man bør anvende prøver fra fuldblod (EDTA) eller tørrede blodpletter.
Prøveudtagningsudstyr har til tider vist sig at være skadeligt for integriteten af visse analyser og
kan forstyrre visse metodeteknologier (9) . Det anbefales, at hver bruger sikrer, at det valgte
udstyr anvendes i overensstemmelse med producentens anvisninger og at både
prøveudtagningsudstyr og alternative DNA-forberedelsesmetoder er kompatible med denne
test.
Blodprøver skal opbevares ved -20°C før forberedelse af DNA. Undgå gentaget nedfrysning og
optøning.
Blodprøver (EDTA)
Forberedelse af DNA fra fuldblodsprøver (EDTA)
1. Pipetter 80l af hver blodprøve i et mikrofugerør med skruelåg.
2. Pipetter 320l af 170mM (9,09 g/l) NH4Cl opløsning i hvert rør.
3. Bland i 20 minutter ved mild hvirvel og inversion. Undgå kraftig rystelse og skumdannelse.
4. Centrifuger hvert rør i 2 minutter ved 12 000 g, indtil der dannes en pelleteret celle.
5. Fjern og bortskaf overflydende væske vha. pipetten.
6. Pipetter 300l af 10mM (0,58g/l) NaCl/10mM (3,72g/l) EDTA i hvert rør og udeluk cellerne
ved hvirvelblanding.
7. Centrifuger hvert rør i 1 minut ved 12 000 g, indtil der dannes en pelleteret celle.
8. Gentag trin 5 til 7 mindst to gange mere, indtil al synlig rød farve i den overflydende væske
er fjernet.
9. Fjern og bortskaf overflydende væske vha. pipetten.
10. Pipetter 200l af 50mM (2g/l) NaOH EDTA i hvert rør og udeluk cellerne ved hvirvelblanding.
11. Placer i en opvarmet blok ved 100°C i 10 minutter.
12. Pipetter 40l af 1M (121,1g/l) Tris-base/HCl (pH 7.5) i hvert rør og hvirvelbland.
13. Tilføj 1 ml sterilt afioniseret vand i hvert mikrofugerør for at opnå en samlet DNAprøvemængde
på 1,24 ml.
14. Centrifuger hvert rør i 1 minut ved 12 000 g, indtil der dannes pelleteret cellefragment.
DNA’en findes inde i den overflydende væske.
Side 5 af 13

Forberedelse af DNA fra tørrede blodpletter
1. Stans 2 x 3 mm skiver (b) fra prøvekortet i et 1,5 ml rør med skruelåg.
Der skal stanses fra et område af kortet, der er helt mættet med blod. Stans flere
”rene” kortpletter før hver prøve, for at undgå smitte mellem prøverne.
2. Tilføj 1ml af 10mM (0,58g/l) NaCl/10mM (3.72g/l) EDTA og bland i rotationsblanderen i 15 -
20 minutter. Hvis en rotationsblander ikke er tilgængelig, kan det være nødvendigt at
forlænge afvaskningerne med 30 minutter hver.
3. Fjern og bortskaf vaskeopløsningen.
4. Gentag trin 2 og 3 en gang mere.
5. På dette tidspunkt burde det meste af blodpigmentet være udtrukket fra skiven. En svag
rødbrun farve fra blodpletterne er ikke usædvanlig på dette tidspunkt.
6. Mikrofuger kort (3 sek.) for at samle overskydende vaskeopløsning i bunden af røret. Brug
en pipette til at fjerne og bortskaffe så meget vandopløsning som muligt uden at forstyrre
pletterne.
7. Denne korte mikrofugering fjerner typisk ekstra blodpigment fra blodpletterne.
8. Tilføj 150μl af 50mM (2g/l) NaOH i hvert glas. Rul forsigtigt mellem fingrene for at blande.
9. Placer i en opvarmet blok ved 100°C i 10 minutter.
10. Mikrofuger kort for at samle bundfald i bunden af røret.
11. Tilføj 30μ af 1M (121,1g/l) Tris-base/HCl (pH 7,5) i hvert glas for at neutralisere, og bland
forsigtigt.
12. Tilføj 420μl sterilt Sigma-vand i hver DNA-prøve for at opnå en samlet mængde på 600l.
13. Bland prøverne godt og mikrofuger for at samle.
14. Overfør bundfald til et nyetiketteret glas med skruelåg.
Opbevar det ekstraherede DNA ved –20°C.
(b) Det samlede anvendte blodprøveområde skal udgøre mindst 2 x 3 mm cirkulære blodpletter.
F.eks. kan der anvendes 1 x 6 mm kortpletter, hvis det er passende.
IsoCode kortet – DNA-isolationsudstyr til amplifikationssættet (Schleicher and Schuell, Inc.) er
blevet anvendt til DNA-forberedelse fra blodpletter og har også vist sig at give fortolkelige
resultater.
Alternative DNA-forberedelsesmetoder
DNA-forberedelsesmetoderne, der er beskrevet ovenfor, er anbefalet af Gen-Probe og har vist,
at de giver konsistente og pålidelige resultater. DNA, der er forberedt med andre metoder eller
fra andre prøvetyper, er måske ikke optimale til ELUCIGENE CF30 testen, og kan give
Side 6 af 13

esultater, der ligger under det optimale. Nøglekriteriet for alternative DNAforberedelsesmetoder
er DNA-koncentration og fravær af PCR-inhibitorer.
Det anbefales, at alternative metoder og prøvetyper evalueres grundigt med ELUCIGENE
CF30 testen, før resultaterne bruges til diagnostik. Tester af DNA-prøver ved koncentrationer

10. Placer alle hætteglas fast i den termiske variatorblok. Start den 94°C enkelttrinscyklus
efterfulgt af amplifikationscyklusprogrammet.
11. Bortskaf al resterende ubrugt AmpliTaq Gold fortynding.
12. Når amplifikationsprogrammet er fuldført, kan prøverne opbevares ved stuetemperatur
natten over eller ved 2-8°C i op til 7 dage før analysering med geleelektroforese.
(c) Til amplifikation udført i 0,5 ml PCR-hætteglas eller termiske variatorer uden opvarmede låg.
Geleelektroforese
Det anbefales, at hver bruger sikrer, at det valgte udstyr anvendes i overensstemmelse med
producentens anvisninger og er kompatibelt med denne test. I dette tilfælde er
nøgleparametrene dimensionerne på gelematrice og kam (brøndformer). Resultaterne er
opnået vha. følgende elektroforeseforhold:
1. PCR-produktet elektroforesebehandles i en 3 % NuSieve 3:1 agarosegele vha. trisborat med
etidiumbromid (TBE/EtBr) som flydende buffer. TBE/EtBr forberedes som 134mM (16,2g/l)
Trisbase, 74,9mM (4,63g/l) borsyre, 2,55mM (0,95g/l) EDTA opløsning med 0,1g/ml
etidiumbromid.
2. 3g af NuSieve 3:1 blev opløst i 100mL TBE/EtBr og hældt over i en 15 x 12 cm horisontal
gelebakke med 1.5mm x 5mm brøndformere, hængt op 1 mm over basen.
3. 15L af PCR-produktet (med initialfarve tilføjet under PCR opsætningsforløbet) hældes over
på en gele.
4. En 50 baseparstige (Amersham-Pharmacia Biotech) ved 1,5g/15l forberedes i den
medfølgende initialfarve (80l destilleret vand / 10l initialfarve / 10l 50 baseparstige).
Bemærk, at blandingen kan være orange før gelepåfyldning. 15l af denne fortynding hældes
over på geleen og køres ved siden af prøverne som en molekylær vægtmarkør.
5. Der udføres en elektroforese ved 5 til 6 V/cm (d) mellem elektroderne, indtil farvefronten har
flyttet sig 5 cm fra påfyldningsbrøndene hen imod anoden (1,5 til 2 timer).
6. Efter elektroforesen bliver geleerne sat på et UV-kameralysbord ved 260 nm, og derefter
efterset og fotograferet.
(d) Udregnet vha. afstanden i cm mellem elektroderne.
Fortolkning af resultater
PCR-produkterne vil blive observeret som bånd i geleens hætteglasbaner.
1. Det øvre og nedre kontrolbånd skal være tydeligt i alle prøver (se figur 1).
2. Alle baner skal være fri for overdreven udtværing og baggrundsfluorescens.
3. De øverste og nederste kontrolbånds position skal angive den korrekte molekylære
størrelse(se figur 1).
Side 8 af 13

4. Den negative kontrol bør ikke vise nogen bånd inden for det område, der er defineret af de
øvre og nedre kontrolbånd. Et diagnostikbånd bør ikke fortolkes, hvis et tilsvarende bånd
også er set i den negative kontrol for den PCR, der bliver kørt, da dette er tegn på
kontamination med genomisk DNA.
Hvis et af ovennævnte punkter ikke er til stede, bør resultaterne ikke fortolkes, og testen skal
gentages.
5. En person har to kopier af CFTR-genet. Hvis disse kopier har samme sekvens i et vilkårligt
område, beskrives personen som værende homozygotisk for dette område. Hvis disse kopier
har forskellig sekvens i et vilkårligt område, beskrives personen som værende heterozygotisk
i dette område.
6. Tilstedeværelsen af PCR-produktet, der er genereret fra den normale ΔF508 primer i
hætteglas B, angiver, at prøven indeholder den normale sekvens for dette område. Det
normale PCR-produkt kan ses i hætteglas B banen for geleen ved 160 bp og kan identificeres
ved sammenligning af båndpositionen med en tilstødende markørbane.
7. PCR-produkter fra en person, der bærer en af Y1092X, 1717-1G>A, G542X, W1282X,
N1303K, ΔF508 og 3849+10kbC>T mutationerne, vil kunne ses i hætteglas A banen for
geleen og kan identificeres ved sammenligning af båndpositionen med en tilstødende
markørbane. Produktbåndets størrelse i baseparret er vist i figur 1. Kun produktbånd med
den korrekte størrelse bør fortolkes.
8. PCR-produkter fra en person, der bærer en af 394delTT, 621+1G>T, S1251N, G551D,
R117H, R1162X og R334W mutationerne, vil kunne ses i hætteglas B banen for geleen og
kan identificeres ved sammenligning af båndpositionen med en tilstødende markørbane.
Produktbåndets størrelse i baseparret er vist i figur 1. Kun produktbånd med den korrekte
størrelse bør fortolkes.
9. PCR-produkter fra en person, der bærer en af A455E, 2183AA>G, 3659delC, 1078delT,
ΔI507, R347P, R553X og E60X mutationerne, vil kunne ses i hætteglas C banen for geleen
og kan identificeres ved sammenligning af båndpositionen med en tilstødende markørbane.
Produktbåndets størrelse i baseparret er vist i figur 1. Kun produktbånd med den korrekte
størrelse bør fortolkes.
10. PCR-produkter fra en person, der bærer en af 1811+1.6kbG>A, 3272-26G>A,
3120+1G>A, 2789+5G>A, 711+1G>T, G85E, Y122X og W846X mutationerne, vil kunne ses
som bånd og kan identificeres ved sammenligning af båndpositionen med en tilstødende
markørbane. Produktbåndets størrelse i baseparret (bp) er vist i figur 1. Kun produktbånd
med den korrekte størrelse bør fortolkes.
OBS: På grund af primermixets kompleksitet kan der forekomme primerfænomener
svarende til en størrelse på

Figur1
A
Apo B 423bp
D1152H 367bp
1717-1G>A 329bp
G542X 279bp
W1282X 240bp
N1303K 200bp
F508(M) 160bp
3849+10kbC>T 132bp
ODC 97bp
B
Apo B 526bp
621+1G>T 383bp
R553X 328bp
G551D 290bp
R117H 243bp
R1162X 200bp
F508(N) 160bp
R334W 140bp
ODC 97bp
C
Apo B 633bp
A455E 500bp
2183AA>G 425bp
3659delC 344bp
1078delT 272bp
I507 222bp
R347P 184bp
S1251N 150bp
E60X 121bp
ODC 97bp
ODC = nedre kontrol ApoB=Øvre kontrol
Side 10 af 13
D
Apo B 633bp
3120+1G>A 443bp
2789+5G>A 370bp
1898+1G>A 299bp
711+1G>T 261bp
G85E 224bp
2184delA 196bp
I148T 161bp
R560T 143bp
ODC 117bp
Molekylær vægtmarkør
(50 baseparstige)
650
600
550
500
450
400
350
300
250
200
150
100

Testvalidering
30 overensstemmende fuldblodsprøver og tørrede blodpletter, hvis gentype var kendt, blev
testet i en virksomhedsintern undersøgelse. DNA blev forberedt i overensstemmelse med disse
brugsvejledninger. Ud af de 30 testede prøver, var de seks prøver normale for de 30
mutationer, registreret af sættet. Hver af de 24 mutationer udviste mindst én af de mutationer,
der blev registreret af sættet. Sammensatte heterozygoter blev registreret af sættet, og alle
resultaterne var i overensstemmelse med den kendte gentype, der blev påvist med alternative
metoder.
Følgende valideringsprøver blev testet:
Heterozygoter –2 x 3849+10kbC>T/+, 711+1G>T/+, 3272-26A>G/+, S1251N/+, R347P/+,
R117H/+, R553X/+, dF508/+, 1811+1.6kbA>G/+, Y1092X/+, G542X/+, 1717-1G>A/+
Sammensatte heterozygoter - Y122X/dI507, R1162X/dF508, G551D/dF508, 711+1G>T/dF508,
A455E/dF508, 1717-1G>A/dF508, R117H/dF508, W846X/dF508, R117H/dF508
Homozygoter – 6 x +/+, 2 x dF508/dF508,
Krydsreaktivitet
De nødvendige foranstaltninger er blevet truffet for at undgå interferens i testfunktionen ved
tilstedeværelsen af andre rapporterede polymorfier og mutationer i CFTR-genet (8) . ELUCIGENE
CF30 sætter er en udvidelse af ELUCIGENE CF29, og de oplysninger om krydsreaktivitet, der
er angivet for ELUCIGENE CF29 er relevant og også angivet i disse instruktioner.
Følgende sjældne mutationer er blevet evalueret til krydsreaktivitet og blev ikke påvist af
ELUCIGENE CF29 sættet: R1283M, 1717-2A>G, R117C, 621+2T>C, R117L, I506V.
Følgende polymorfier blev heller ikke påvist af testen: 3617G/T, 1655T/G (F508C), 1651A/G.
Evaluering af kendte mutationer og polymorfier i CFTR-genet har fremhævet følgende
påvirkninger på ELUCIGENE CF30 sættets resultater:
1. ΔI507 i kombination med dup1716+51>61 producerer et PCR-produkt på 233 bp i
hætteglasset C i stedet for de forventede 222 bp.
2. Der er observeret lettere krydsreaktivitet i R347P primeren i hætteglas C med den sjældne
mutation R347H mutation, hvilket resulterer i svagt PCR-produkt, som kan ses ved R347P
positionen i hætteglas C.
3. En nyere rapporteret mutation, 2184insG (12) , vil i teorien krydsreagere med 2183AA>G
primeren i hætteglas C. Et 2183AA>G diagnostikbånd kan være tegn på, at 2184insG
mutationen er til stede.
4. En nylig rapporteret mutation F316L (12) vil krydsreagere med 1078delT primeren. Et
diagnosticeringsbånd ved 1078delT positionen i C mixet kan indikere tilstedeværelsen af
F316L mutationen.
Side 11 af 13

5. Følgende mutationer, der ikke er blevet kontrolleret pga. manglende relevante prøver, kan
forstyrre testfunktionen: R117P, 621+2T>G, R553G, R553Q, R347L, I506T, I506S og den
sjældne kombination af ΔI507 med polymorfi 1651A/G.
Procedurens begrænsninger
1. Resultaterne fra denne eller ethvert andet diagnostiksæt bør kun anvendes og fortolkes i
henhold til det samlede kliniske billede. Gen-Probe er ikke ansvarlig for de kliniske
afgørelser, der bliver truffet.
2. Fravær af mutationerne, der påvises med dette sæt, er ingen garanti for, at andre mutationer
i CFTR-genet ikke er til stede. Mange andre mutationer er mulige og er ikke påvist med dette
sæt.
3. Mutationer varierer i hyppighed mellem forskellige befolkningsgrupper. Data om
befolkningsmutationshyppigheden kan fås hos The Cystic Fibrosis Genetic Analysis
Consortium (8) (konsortium for genetisk analyse af cystisk fibrose).
Brugeren af dette sæt skal lægge vægt på disse punkter, når resultaterne rapporteres til
diagnoseklinikeren/den genetiske rådgiver.
Referencer
1. Welsh MJ et al. In Scriver CR et al (eds), The Metabolic and Molecular Basis of Inherited
Disease. McGraw-Hill, New York: 3799-3876 (1995).
2. Elborn JS et al. Cystic Fibrosis: current survival and population estimates to the year 2000.
Thorax 46: 881-885 (1991).
3. Riordan JR et al. Identification of the Cystic Fibrosis Gene. Cloning and Characterization of
Complementary DNA. Science 245: 1066-1073 (1989).
4. Rommens JM et al. Identification of the Cystic Fibrosis Gene: Chromosome Walking and
Jumping. Science245: 1059-1065 (1989).
5. The Cystic Fibrosis Mutation Database website at: http://www.genet.sickkids.on.ca
6. Newton CRet al. Analysis of any point mutation in DNA. The Amplification Refractory
Mutation System (ARMS). Nucleic Acids Res 17: 2503-2516 (1989).
7. Estivill X et al. Geographic distribution and regional origin of 272 cystic fibrosis mutations in
European populations. Hum Mut 10:135-154 (1997).
8. The Cystic Fibrosis Genetic Analysis Consortium. Hum Mutat 4: 167- 177 (1994).
Information also available from: http://www.genet.sickkids.on.ca
9. Satsangi Jet al. Effect of heparin on polymerase chain reaction. Lancet 343: 1509-1510
(1994).
Side 12 af 13

10. de Vries HG et al. Validation of the determination of ΔF508 mutations of the CF gene in over
11000 mouthwashes. Hum Genet 97: 334-336 (1996).
11. Riley J et al. Rapid determination of DNA concentration in multiple samples. Nucleic Acids
Res17: 8383 (1989).
12. Leoni GB et al. The Cystic Fibrosis Mutation Database website at:
http://www.genet.sickkids.on.ca .
Side 13 af 13