FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Mast Cell Tryptase ... - Dako

Klargøring af prøve,
inklusiv nødvendige
materialer, der ikke
medfølger
Farvningsprocedure
inklusiv nødvendige
materialer, der ikke
medfølger
Fortolkning af
farvning
Præstationskarakteristika
Antistoffet kan anvendes til mærkning af paraffinindstøbte vævssnit fikseret i formalin. Vævsprøverne skal skæres i
snit med en tykkelse på ca. 4 µm.
Det er nødvendigt at forbehandle med varmeinduceret epitop-retrieval (HIER) med Dako PT Link (kode
PT100/PT101). Der henvises til brugervejledningen for PT Link. Der opnås optimale resultater ved at forbehandle
væv med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (kode K8000/K8004).
Paraffinindstøbte snit: Det anbefales at forbehandle formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit ved hjælp af 3-i-1
præparatklargøringsproceduren for Dako PT Link. Følg forbehandlingsproceduren, der er beskrevet i indlægssedlen
til EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x), (kode K8000/K8004). Bemærk: Efter farvning skal
snittene dehydreres, renses og monteres ved hjælp af et permanent monteringsmedium.
Afparaffinerede snit: Det anbefales at forbehandle afparaffinerede, formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit ved
hjælp af Dako PT Link og følge den samme procedure, som er beskrevet for paraffinindstøbte snit. Efter farvningen
skal objektglassene monteres ved hjælp af et vandigt eller permanent monteringsmedie.
Vævssnittene må ikke udtørre under behandlingen eller under den efterfølgende immunhistokemiske
farvningsprocedure. Det tilrådes at anvende FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020), så vævssnittene hænger
bedre fast på objektglassene.
Det anbefalede visualiseringssystem er EnVision FLEX, High pH, (Link) (kode K8000). Farvningstrinnene og
inkubationstiderne er forprogrammerede i Autostainer Link-softwaren. Den anbefalede reagensapplikationsmængde
er 1 x 200 µL eller 2 x 150 µL pr. objektglas. Se brugervejledningen til Autostainer Link vedrørende yderligere
anvisninger til indføringen af objektglas og reagenser. Hvis protokollerne ikke findes på den anvendte Autostainerplatform,
kontaktes Dakos tekniske serviceafdeling. Alle inkubationstrin skal udføres ved stuetemperatur.
De optimale forhold kan variere afhængigt af præparatet og klargøringsmetoder og bør fastlægges af hvert enkelt
laboratorium. Hvis den evaluerende patolog skulle ønske en anderledes farvningsintensitet, kan inkubationstider og
valget af EnVision FLEX/EnVision FLEX+ visualiseringssystem justeres. Kontakt evt. en Dako
applikationsspecialist/teknisk servicespecialist for oplysninger om, hvordan protokollen omprogrammeres. Kontrollér,
at præstationen af den justerede protokol stadig er gyldig ved at evaluere, at farvningsmønstret er identisk med
farvningsmønstret beskrevet i “Præstationskarakteristika”.
Det anbefales at kontrastfarve i hæmatoxylin ved hjælp af EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (kode K8008). Det
anbefales at anvende et ikke-vandbaseret, permanent monteringsmedium.
Der skal udføres positive og negative kontroller samtidigt ved hjælp af den samme protokol som patientprøverne.
Det positive kontrolvæv skal omfatte tonsil, og cellerne/strukturerne skal udvise reaktionsmønstre, som beskrevet for
dette væv i “Præstationskarakteristika” i alle positive præparater. Det anbefalede negative kontrolreagens er FLEX
Negative Control, Mouse, (Link) (kode IR750).
Celler, der mærkes af antistoffet, udviser en granulær cytoplasmisk farvning (6).
Normalt væv: Antistoffet mærker specifikt mastceller (MC) i adskillige humane væv indbefattet lunge, tonsil, colon,
ventrikelslimhinde og hud, hvorimod der kun kan påvises få MC’er i hypofysen. Antistoffet mærker ikke basofile eller
andre normale blodleukocytter, og ligeledes er der ikke observeret mærkning af keratinocytter (6). Mastceller i
tonsillen viser en moderat til stærk farvningsreaktion.
Unormalt væv: I et studie af mere end 150 tilfælde af forskellige MC-lidelser blev det påvist, at