FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Mast Cell Tryptase ... - Dako

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Mast Cell Tryptase
Klon AA1
Ready-to-Use
(Link)
Kode IR640
Tilsigtet anvendelse Anvendes til in vitro-diagnostik.
Resumé
og forklaring
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Mast Cell Tryptase, klon AA1, Ready-to-Use, (Link), er beregnet til
anvendelse ved immunhistokemi sammen med Autostainer Link-instrumenter. Antistoffet mærker humane mastceller
og er et nyttigt værktøj til genkendelse af meget atypiske eller umodne mastceller (MC) ved mastcelleleukæmi og til
påvisning af små, endog meget små, tætte, fokale MC-infiltrater i stadieinddelingsprocedurer hos patienter med
kendt kutan mastocytose (1). Den kliniske fortolkning af enhver farvning eller mangel på samme skal suppleres med
morfologiske undersøgelser med anvendelse af korrekte kontroller og evalueres i relation til patientens kliniske
forhistorie og andre diagnostiske analyser af en kvalificeret patolog.
Humane mastcelletryptaser (EC 3.4.21.59) omfatter en familie af trypsinlignende neutrale serinproteaser, der er
overvejende udtrykkes i mastceller (2). I sin enzymatisk aktive form er mastcelletryptase til stede som en
nonkovalent bundet tetramer på 132 kDa (2, 3). Mastcelletryptase er i stand til at nedbryde vasoaktivt intestinalt
peptid og til at aktivere prækallikrein såvel som til at generere kininer, alle vigtige mediatorer involveret i
bronkokonstriktion og luftvejs-hyperreaktivitet, der er vigtige faktorer i allergisk luftvejslidelse (2). Mastceller aktiveres
af en række stimuli, herunder antigen, superoxider, komplementprotein, neuropeptider og lipoproteiner, hvilket fører
til aktivering og degranulering. Mastceller spiller en aktiv rolle ved så forskellige sygdomme som aterosklerose,
astma, arthritis, galdevejsfibrose, malignitet og lungefibrose (4, 5).
Identifikation af mastceller ved hjælp af vævsfarvning med antistoffer specifikke for human mastcelletryptase har
været nyttig til identifikation af fokale og diffuse MC-infiltrater ved primær MC-sygdom og mastocytose. Påvisning af
mastcelletryptase er essentiel for identifikation af meget atypiske, hypogranulerede eller endog ikke-metakromatiske
MCer, navnlig ved MC-leukæmi, og for påvisning af ganske små eller meget små MCinfiltrater (1).
Se Dakos Generelle instruktioner vedrørende immunhistokemisk farvning eller detektionssystemets vejledning for
IHC-procedurer vedrørende: 1) Princip for proceduren, 2) Nødvendige materialer, der ikke medfølger, 3) Opbevaring,
4) Klargøring af prøve, 5) Farvningsprocedure, 6) Kvalitetskontrol, 7) Fejlfinding, 8) Fortolkning af farvning,
9) Generelle begrænsninger.
Leveret reagens Monoklonalt museantistof, der er klar til brug, leveret i væskeform i en buffer, der indeholder stabiliserende protein
og 0,015 mol/L natriumazid.
Klon: AA1 (3). Isotype: IgG1, kappa.
Immunogen Mastcelletryptase isoleret fra human lunge (3).
Specificitet I Western-blotting af et tryptaserigt ekstrakt af human lunge under reducerende forhold mærker antistoffet et bånd på
cirka 32,5 kDa svarende til human mastcelletryptase (3).
I indirekte ELISA viser antistoffet ingen reaktion med oprenset humant mastcelletryptase (3).
Antistofbinding til mastcelletryptasen påvirker ikke enzymaktiviteten (3).
Periodatbehandling af mastcelletryptase har ingen effekt på antistofmærkningen, hvilket viser, at kulhydratepitoper ikke
er involveret i genkendelsen af antistofferne. Antistofgenkendelsen påvirkes heller ikke af tilstedeværelse af heparin (3).
Forholdsregler 1. Anvendes af professionelle brugere.
2. Produktet indeholder natriumazid (NaN3), et kemikalie, der er yderst giftigt i ren form. Selvom koncentrationen i
produktet ikke er klassificeret som farlig, kan natriumazid reagere med bly og kobber og danne meget eksplosive
ophobninger af metalazider. Efter bortskaffelse skylles med rigelige mængder vand for at hindre ophobning af
metalazid i afløb.
3. Som med alle produkter, der er afledt ud fra biologiske kilder, bør der iagttages korrekte håndteringsprocedurer.
4. Brug egnet personligt beskyttelsesudstyr for at undgå kontakt med øjne og hud.
5. Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokale, nationale og føderale bestemmelser.
Opbevaring Opbevares ved 2 – 8 °C. Må ikke anvendes efter udlø bsdatoen på flasken. Hvis reagenserne opbevares under
andre betingelser end de specificerede, skal betingelserne verificeres af brugeren. Der er ingen synlige tegn på, at
produktet kan være ustabilt. Der bør derfor udføres positive og negative kontroller samtidigt med patientprøver.
Kontakt Dakos tekniske serviceafdeling, hvis der observeres uventet farvning, som ikke kan forklares med
variationer i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et problem med antistoffet.
(117829-002) IR640/DK/MNI/2009.12.04 p. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17

Klargøring af prøve,
inklusiv nødvendige
materialer, der ikke
medfølger
Farvningsprocedure
inklusiv nødvendige
materialer, der ikke
medfølger
Fortolkning af
farvning
Præstationskarakteristika
Antistoffet kan anvendes til mærkning af paraffinindstøbte vævssnit fikseret i formalin. Vævsprøverne skal skæres i
snit med en tykkelse på ca. 4 µm.
Det er nødvendigt at forbehandle med varmeinduceret epitop-retrieval (HIER) med Dako PT Link (kode
PT100/PT101). Der henvises til brugervejledningen for PT Link. Der opnås optimale resultater ved at forbehandle
væv med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (kode K8000/K8004).
Paraffinindstøbte snit: Det anbefales at forbehandle formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit ved hjælp af 3-i-1
præparatklargøringsproceduren for Dako PT Link. Følg forbehandlingsproceduren, der er beskrevet i indlægssedlen
til EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x), (kode K8000/K8004). Bemærk: Efter farvning skal
snittene dehydreres, renses og monteres ved hjælp af et permanent monteringsmedium.
Afparaffinerede snit: Det anbefales at forbehandle afparaffinerede, formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit ved
hjælp af Dako PT Link og følge den samme procedure, som er beskrevet for paraffinindstøbte snit. Efter farvningen
skal objektglassene monteres ved hjælp af et vandigt eller permanent monteringsmedie.
Vævssnittene må ikke udtørre under behandlingen eller under den efterfølgende immunhistokemiske
farvningsprocedure. Det tilrådes at anvende FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020), så vævssnittene hænger
bedre fast på objektglassene.
Det anbefalede visualiseringssystem er EnVision FLEX, High pH, (Link) (kode K8000). Farvningstrinnene og
inkubationstiderne er forprogrammerede i Autostainer Link-softwaren. Den anbefalede reagensapplikationsmængde
er 1 x 200 µL eller 2 x 150 µL pr. objektglas. Se brugervejledningen til Autostainer Link vedrørende yderligere
anvisninger til indføringen af objektglas og reagenser. Hvis protokollerne ikke findes på den anvendte Autostainerplatform,
kontaktes Dakos tekniske serviceafdeling. Alle inkubationstrin skal udføres ved stuetemperatur.
De optimale forhold kan variere afhængigt af præparatet og klargøringsmetoder og bør fastlægges af hvert enkelt
laboratorium. Hvis den evaluerende patolog skulle ønske en anderledes farvningsintensitet, kan inkubationstider og
valget af EnVision FLEX/EnVision FLEX+ visualiseringssystem justeres. Kontakt evt. en Dako
applikationsspecialist/teknisk servicespecialist for oplysninger om, hvordan protokollen omprogrammeres. Kontrollér,
at præstationen af den justerede protokol stadig er gyldig ved at evaluere, at farvningsmønstret er identisk med
farvningsmønstret beskrevet i “Præstationskarakteristika”.
Det anbefales at kontrastfarve i hæmatoxylin ved hjælp af EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (kode K8008). Det
anbefales at anvende et ikke-vandbaseret, permanent monteringsmedium.
Der skal udføres positive og negative kontroller samtidigt ved hjælp af den samme protokol som patientprøverne.
Det positive kontrolvæv skal omfatte tonsil, og cellerne/strukturerne skal udvise reaktionsmønstre, som beskrevet for
dette væv i “Præstationskarakteristika” i alle positive præparater. Det anbefalede negative kontrolreagens er FLEX
Negative Control, Mouse, (Link) (kode IR750).
Celler, der mærkes af antistoffet, udviser en granulær cytoplasmisk farvning (6).
Normalt væv: Antistoffet mærker specifikt mastceller (MC) i adskillige humane væv indbefattet lunge, tonsil, colon,
ventrikelslimhinde og hud, hvorimod der kun kan påvises få MC’er i hypofysen. Antistoffet mærker ikke basofile eller
andre normale blodleukocytter, og ligeledes er der ikke observeret mærkning af keratinocytter (6). Mastceller i
tonsillen viser en moderat til stærk farvningsreaktion.
Unormalt væv: I et studie af mere end 150 tilfælde af forskellige MC-lidelser blev det påvist, at