FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Thyroglobulin Ready-to ... - Dako

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Thyroglobulin
Ready-to-Use
(Link)
Kode IR509
Tilsigtet anvendelse Anvendes til in vitro diagnostik.
Resumé
og forklaring
FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Thyroglobulin, Ready-to-Use, (Link), er beregnet til anvendelse ved
immunhistokemi sammen med Autostainer Link instrumenter. Antistoffet er nyttigt til identifikation af thyroglobulin i
skjoldbruskkirtelvæv, og er et nyttigt værktøj til identifikation af godt differentierede skjoldbruskcarcinomer (1,2). Den
kliniske fortolkning af enhver farvning eller mangel på samme skal suppleres med morfologiske undersøgelser med
anvendelse af korrekte kontroller og evalueres i relation til patientens kliniske forhistorie og andre diagnostiske
analyser af en kvalificeret patolog.
Thyroglobulin (Tg) er et glykoprotein med en prædominant form som en 660 kDa homodimer. Tg, prækursoren for
skjoldbruskkirtelhormoner, syntetiseres af thyrocytter og transporteres til den apikale overflade, hvor det sekreteres
ind i lumen af folliklerne i skjoldbruskkirtlen og gemmes som hovedkomponenten af kolloid (> 95 %). En mindre del
af Tg findes som 330 kDa monomer eller som tetramer. Reducering eller nedbrydning af 660 kDa eller 330 kDa Tg
molekyler kan føre til dannelsen af mindre popypeptider, hvoraf nogle er til stede i sporlige mængder i kolloid. I det
celle-kolloide interface forekommer der post-transitionale modifikationer af Tg, der karakteriseres med kobling af
tyrosyl rester med iodid, der fører til dannelsen af skjoldbruskkirtelhormon rester inden i Tg molekylet. Frigivelse af
hormon kræver generelt optagelse af Tg from fra kolloiden af thyrocytter og proteolytisk spaltning langs med den
lysosomale bane (3).
Se Dakos Generelle Instruktioner vedrørende Immunhistokemisk Farvning eller detektionssystemets vejledning for
IHC procedurer vedrørende: 1) Princip for proceduren, 2) Nødvendige materialer, der ikke medfølger, 3) Opbevaring,
4) Klargøring af prøve, 5) Farvningsprocedure, 6) Kvalitetskontrol, 7) Fejlfinding, 8) Fortolkning af farvning,
9) Generelle begrænsninger.
Leveret reagens Polyklonalt kaninantistof, der er klar til brug, leveret i væskeform i en buffer, indeholdende stabiliserende protein og
0,015 mol/L NaN3.
Immunogen Human thyroglobulin isoleret fra humane skjoldbruskkirtler.
Specificitet Antistoffet mærker human Tg. Spor af forurenende antistoffer er fjernet ved hjælp af fastfaseabsorption med humane
plasmaproteiner.
I krydset immunelektroforese, hvor der anvendes en koncentration på 12,5 μL antistof per cm 2 gelområde mod 2 μL
af humant skjoldbruskkirtelekstrakt, fremkom der kun én udfældning svarende til Tg. Med 2 μL humant plasma
fremkom der ingen udfældning. Farvning: Coomassie Brilliant Blue.
I humane skjoldbruskkirtel cellekulturer mærker antistoffet intracellulært Tg (4).
Forholdsregler 1. Anvendes af professionelle brugere.
2. Produktet indeholder natriumazid (NaN3), et kemikalie, der er yderst giftigt i ren form. Selvom koncentrationen i
produktet ikke er klassificeret som farlig, kan natriumazid reagere med bly og kobber og danne meget eksplosive
ophobninger af metalazider. Efter bortskaffelse skylles med rigelige mængder vand for at hindre ophobning af
metalazid i afløb.
3. Som med alle produkter, der er afledt ud fra biologiske kilder, bør der iagttages korrekte håndteringsprocedurer.
4. Anvend hensigtsmæssigt personligt beskyttelsesudstyr for at undgå kontakt med øjne og hud.
5. Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokale, nationale og føderale bestemmelser.
Opbevaring Opbevares ved 2–8 °C. Må ikke anvendes efter udløbs datoen på flasken. Hvis reagenserne opbevares under andre
betingelser end de specificerede, skal betingelserne verificeres af brugeren. Der er ingen synlige tegn på, at
produktet kan være ustabilt. Der bør derfor udføres positive og negative kontroller samtidigt med patientprøver.
Kontakt Dakos tekniske serviceafdeling, hvis der observeres uventet farvning, som ikke kan forklares med
variationer i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et problem med antistoffet.
Klargøring af prøve
inklusive nødvendige
materialer, der ikke
medfølger
Antistoffet kan anvendes til mærkning af paraffinindstøbte vævssnit fikseret i formalin. Vævsprøverne skal skæres i
snit med en tykkelse på ca. 4 µm.
Det er nødvendigt at forbehandle med varmeinduceret epitop-retrieval (HIER) med Dako PT Link (kode
PT100/PT101). Der henvises til brugervejledningen for PT Link. Der opnås optimale resultater ved at forbehandle
væv med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (kode K8000/K8004).
Paraffinindstøbte snit: Det anbefales at forbehandle formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit ved hjælp af 3-i-1
præparatklargøringsproceduren for Dako PT Link. Følg forbehandlingsproceduren, der er beskrevet i indlægssedlen
til EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x), (kode K8000/K8004). Bemærk: Efter farvning skal
snittene dehydreres, renses og monteres ved hjælp af et permanent monteringsmedium.
Afparaffinerede snit: Det anbefales at forbehandle afparaffinerede, formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit ved
hjælp af Dako PT Link og følge den samme procedure, som er beskrevet for paraffinindstøbte snit. Efter farvningen
(115712-002) IR509/DK/MNI/2009.12.04 s. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17

Farvningsprocedure
inklusive nødvendige
materialer, der ikke
medfølger
Fortolkning af
farvning
Præstations
karakteristika
skal objektglassene monteres ved hjælp af et vandigt eller permanent monteringsmedie.
Vævssnittene må ikke udtørre under behandlingen eller under den efterfølgende immunhistokemiske
farvningsprocedure. Det tilrådes at anvende FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020), så vævssnittene hænger
bedre fast på objektglassene.
Det anbefalede visualiseringssystem er EnVision FLEX, High pH, (Link) (kode K8000). Farvningstrinnene og
inkubationstiderne er forprogrammerede i Autostainer Link-softwaren. Den anbefalede reagensapplikationsmængde
er 1 x 200 µL eller 2 x 150 µL pr. objektglas. Se brugervejledningen til Autostainer Link vedrørende yderligere
anvisninger til indføringen af objektglas og reagenser. Hvis protokollerne ikke findes på den anvendte Autostainer
platform, kontaktes Dakos tekniske serviceafdeling. Alle inkubationstrin skal udføres ved stuetemperatur.
De optimale forhold kan variere afhængig af præparatet og klargøringsmetoder og bør fastlægges af hvert enkelt
laboratorium. Hvis den evaluerende patolog skulle ønske en anderledes farvningsintensitet, kan inkubationstider og
valget af EnVision FLEX/EnVision FLEX+ visualiseringssystem justeres. Kontakt evt. en Dako
applikationsspecialist/teknisk servicespecialist for oplysninger om, hvordan protokollen omprogrammeres. Kontrollér,
at præstationen af den justerede protokol stadig er gyldig ved at evaluere, at farvningsmønstret er identisk med
farvningsmønstret beskrevet i “Præstationskarakteristika”.
Det anbefales at kontrastfarve i hæmatoxylin ved hjælp af EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (K8008). Det
anbefales at anvende et ikke-vandbaseret, permanent monteringsmedium.
Der skal udføres positive og negative kontroller samtidigt ved hjælp af den samme protokol som patientprøverne.
Det positive kontrolvæv skal indeholde skjoldbruskkirtel, og cellerne/strukturerne skal vise reaktionsmønstre som
beskrevet for dette væv i ”Præstationskarakteristika” i alle positive prøver. Det anbefalede negative kontrolreagens
er FLEX Negative Control, Rabbit (Link) (kode IR600).
Det cellulære farvningsmønster er cytoplasmisk i lumen af folliklerne i skjoldbruskkirtlen og den apikale overflade af
thyrocytter.
Normalt væv: Antistoffet mærker Tg i folliklerne i skjoldbruskkirtlen og den apikale overflade af thyrocytter.
Thyroglobulin findes i thyroide, follikulære celler og i mindre omfang i interstitielt væv og thyroid stroma på grund af
normal lækage.
Unormalt væv: I hyperplastiske kirtler er der detekteret thyroglobulin i follikler og de glandulære celler i mindre
follikler. Antistoffet farver papillære, follikulære og multihormonproducerende medullære carcinomer (5-7).
Thyroglobulin er også blevet detekteret i follikulære clear cell carcinomer, mens andre clear cell neoplasmer ikke
blev mærket (5, 8). Visse anaplastiske ten og kæmpecellecarcinomer er også reaktive. Sarcomer og metastatiske
carcinomer er negative (5).
Referencer 1. Albores-Saavedra J, Nadji M, Civantos F, Morales AR. Thyroglobulin in carcinoma of the thyroid: An
immunohistochemical study. Hum Pathol 1983;14:62–6.
Symbolforklaring
Katalognummer
Medicinsk produkt til in vitro
diagnostik
Se brugsanvisningen
2. Burt AD, Kerr DJ, Brown IL, Boyle P. Lymphoid and epithelial markers in small cell anaplastic thyroid tumors.
J Clin Pathol 1985;38:893–6.
3. Marinò M, McLuskey RT. Role of thyroglobulin endocytic pathways in the control of thyroid hormone release. Am
J Physiol Cell Physiol 2000;279:1295–1306.
4. Kayser L, Olsen BE, Høyer PE. Quantitative cytochemical demonstration of intracellular thyroglobulin in cultured
human thyrocytes. Effects of fixatives, TSH and interleukin-1α. Histochem J 1991;23:235–40.
5. Albores-Saavedra J, et al. Thyroglobulin in carcinoma of the thyroid. An immunohistochemical study. Hum
Pathol 1983; 14:62
6. LiVolsi V, et al. Anaplastic thyroid tumors. Amer J Clin Pathol 1987; 87:434
7. Holm R, et al. Medullary thyroid carcinoma with thyroglobulin immunoreactivity. A special entity? Lab Invest
1987; 57:258
8. Civantos F, et al. Clear cell variant of thyroid carcinoma. Amer J Surg Pathol 1984; 8:187
Temperaturbegrænsning
Indeholder til analyser
Lotnummer
Anvendes senest
Producent
(115712-002) IR509/DK/MNI/2009.12.04 s. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17