Huhn - SIFIN

Testseren und Gruber-Widal-Seren Anti-Coli O 1 und O 2
Für den serologischen Nachweis und die Bestätigung von E. coli O 1- und O 2-Isolaten
Mikrobiologie Bakteriologische Testreagenzien
Institut für Immunpräparate und Nährmedien GmbH Berlin
Berliner Allee 317-321 ∙ 13088 Berlin ∙ Deutschland
Fon +49 30 927030-0 ∙ Fax +49 30 927030-30 ∙ info@sifin.de ∙ www.sifin.de
Testseren
Anti-Coli O 1 und O 2
für den serologischen Nachweis
Gruber-Widal-Seren
Anti-Coli O 1 und O 2
für den Bestätigungstest
Kultivierung bei
Raumtemperatur
Optimaler Nachweis der
O 1- bzw. O 2-Antigene
Prüfung von nativen
Stämmen mittels Objektträgeragglutination
möglich

Prüfung der Spezifität neu
entwickelter Antiseren
zur Typisierung von E. coli O 1- und
E. coli O 2-Stämmen aviären und
humanen Ursprungs mittels PCR
B. Kleeßen 1 , C. Ewers 2 , G. Pollex 1 , L. H. Wieler 2
und A. Maaßen 1 , SIFIN Institut für Immunpräparate
und Nährmedien GmbH Berlin 1 , Institut
für Mikrobiologie und Tierseuchen, FB Veterinärmedizin,
FU Berlin 2
Da die Serotypisierung als Goldstandard
in der E. coli-Diagnostik gilt,
besteht weltweit der Bedarf an spezifischen
Antiseren, die eine zuverlässige
Serotypisierung mittels Objektträger-Agglutination
und anschließender
Bestätigung in der Gruber-Widal-
Reaktion erlauben. Spezifität und Sensitivität
kommerziell erhältlicher Antiseren
zur Bestimmung von O 1- und
O 2-Antigenen, die bei extraintestinal
pathogenen Stämmen, wie uropathogenen
(UPEC), aviär pathogenen
(APEC) und Neugeborenen-Meningitis
verursachenden E. coli (NMEC) vermehrt
nachgewiesen werden, sind jedoch
oft unzureichend.
Am Beispiel neu entwickelter monospezifischer
Antiseren gegen die
E. coli O 1- und O 2-Antigene wurde
daher geprüft, ob die serologischen
Ergebnisse der Objektträger-Agglutination
mit denen des E. coli-
Referenzlabors sowie mit den Resultaten
des molekularen Nachweises
der O-Antigen-spezifischen Gene
rfbO 1 und rfbO 2 mittels PCR übereinstimmen.
Hierzu wurden 38 APEC-Stämme,
d. h. 18 O 1- sowie 20 O 2-Stämme
und beispielhaft je drei humane Isolate
der Serotypen O 1 und O 2 (UPEC,
NMEC) untersucht, welche im E. coli-
Referenzlabor serotypisiert waren.
40 von 42 (95 %) der E. coli-Stämme
konnten mit den neu entwickelten
Testseren serologisch sicher typisiert
werden, zwei Stämme waren serologisch
nicht bewertbar (rauh). Es
zeigten sich keine Kreuzreaktionen
zwischen O 1 und O 2.
Für die serologische Überprüfung
wurden E. coli-Stämme bei Raumtemperatur
(RT) kultiviert.
Der molekulare Nachweis des
O 1-Antigen-kodierenden Locus rfbO1
stimmte zu 100 % mit den serologischen
Daten überein, während die
Sensitivität der O 2-Antiseren die der
molekularen Nachweismethode sogar
überstieg.
Die hier entwickelten Testseren erlauben
somit eine schnelle, spezifische
und kostengünstige Serotypisierung
für den Einsatz in der mikrobiologischen
Praxis.
Datum der Fassung: Oktober 2011
Anti-Coli O 1 und Anti-Coli O 2
Serologische und molekulare Überprüfung aviärer
und humaner E. coli O 1-Stämme
Serologische
Pathovar
Wirt
Serotyp
Überprüfung
Objektträgeragglutination
mit SIFIN Testserum
Anti-Coli O 1
Gruber-Widal-
Reaktion (Bestätigungstest)
mit SIFIN
Gruber-Widal-Test-
Molekulare
Überprüfung
PCR-Nachweis
O 1-
spezifisches
Gen rfbO 1
RT RT-Kontrolle
serum Anti-Coli O 1
Titer
(18-26°C) (NaCl)
(MTP)
APEC Geflügel O1 4+ negativ 1:800 positiv
APEC Geflügel O1 4+ V 1:3200 positiv
APEC Geflügel O1 4+ V 1:1600 positiv
APEC Geflügel O1 4+ negativ 1:1600 positiv
APEC Geflügel O1 4+ V 1:1600 positiv
APEC Geflügel O1 negativ V negativ negativ
APEC Geflügel O1 4+ V 1:800 positiv
APEC Geflügel O1 4+ negativ 1:3200 positiv
APEC Legehenne O1:H- 4+ negativ 1:3200 positiv
APEC Legehenne O1:H- 4+ negativ 1:1600 positiv
APEC Legehenne O1:K1:H7 (2+) A (A) positiv
APEC Legehenne O1 3+ V 1:1600 positiv
APEC
Papageientaucher
O1:K- 4+ V 1:1600 positiv
APEC Strauß O1:K1 3+ negativ 1:3200 positiv
APEC Pute O1 3+ negativ 1:1600 positiv
APEC Pute O1 2+ negativ 1:3200 positiv
NMEC Mensch O1:K1:H7 4+ negativ 1:1600 positiv
NMEC Mensch O1:K1:H7 1+ negativ 1:1600 positiv
NMEC Mensch O1:K1:H- 2+ negativ 1:1600 positiv
Serologische und molekulare Überprüfung aviärer und
humaner E. coli O 2-Stämme
Serologische
Pathovar
Wirt
Serotyp
Überprüfung
Objektträgeragglutination
mit SIFIN Testserum
Anti-Coli O 2
Gruber-Widal-
Reaktion (Bestätigungstest)
mit SIFIN
Gruber-Widal-Testserum
Anti-Coli O 2
Titer
(MTP)
molekulare
Überprüfung
PCR-
Nachweis
O 2-spezifisches
Gen rfbO 2
RT RT-Kontrolle
(18-26°C) (NaCl)
APEC Geflügel O2 4+ negativ 1:1600 positiv
APEC Geflügel O2 4+ V 1:800 negativ
APEC Geflügel O2 4+ negativ 1:1600 positiv
APEC Geflügel O2 (4+) A (A) negativ
APEC Geflügel O2 4+ negativ 1:1600 negativ
APEC Geflügel O2 4+ negativ 1:1600 positiv
APEC Geflügel O2 4+ negativ 1:800 positiv
APEC Geflügel O2 4+ negativ 1:1600 positiv
APEC Geflügel O2 4+ V 1:1600 negativ
APEC Legehenne O2:H4 3+ negativ negativ positiv
APEC
Mastelterntier
O2:K1H9 4+ negativ 1:3200 positiv
APEC
Mastelterntier
O2:H6 4+ negativ 1:1600 positiv
APEC Pute O2:K1:H7 4+ negativ 1:3200 positiv
APEC Legehenne O2:K1 4+ negativ 1:3200 negativ
APEC Pute O2:K1:H7 4+ negativ 1:1600 negativ
APEC Pute O2:H5 4+ negativ 1:1600 negativ
UPEC Mensch O2:K1:H6 4+ negativ 1:1600 negativ
APEC Legehenne O2:K1:H4 4+ negativ 1:1600 positiv
UPEC Mensch O2:H6 4+ V 1:1600 negativ
APEC Legehenne O2:H4 1+ negativ 1:1600 positiv
APEC Mensch O2:H1 4+ negativ 1:1600 nicht getestet
APEC Legehenne O2 negativ negativ negativ positiv
APEC Legehenne O2 3+ negativ 1:3200 positiv
Auswertung der Objektträgeragglutination: Auswertung der Gruber-Widal-Reaktion in Mikrotiterplatten (MTP):
4+: sehr stark positive Reaktion positiv: Agglutinat in Form eines Häutchens
3+: stark positive Reaktion negativ: knopfartiges Absetzen des Antigens am Boden der MTP
2+: positive Reaktion (zungenförmiges Auslaufen beim Hochhalten der MTP)
1+: schwach positive Reaktion Titer: Verdünnungsstufe, in der sich noch eine deutlich sichtbare
Agglutination zeigt
negativ: homogene, milchig trübe Flüssigkeit
ohne Agglutinat
Auswertung PCR:
Kontrolle (3,5 % NaCl) negativ: kein spezifisches PCR-Fragment
negativ: homogene, milchig trübe Flüssigkeit
V: teilweise trübe, schlierige Flüssigkeit
A: Autoagglutination: Stamm „rauh“,
keine serologische Bewertung möglich