SERION ELISA classic Liquordiagnostik ... - virion\serion

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SERION ELISA classic
Liquordiagnostik
Gebrauchsanweisung – Deutsch
(Version 3. 03/05-1)

SERION ELISA classic Liquordiagnostik
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINFÜHRUNG IN DIE LIQUORDIAGNOSTIK
1.1 ANWENDUNGSBEREICH
1.2 BESTIMMUNG DES ALBUMINQUOTIENTEN
1.3 BESTIMMUNG DER QUOTIENTEN FÜR GESAMT-IMMUNGLOBULINE
1.3.1 Messung der Gesamt-IgG-Konzentration und Quotientenberechnung
1.3.2 Messung der Gesamt-IgM-Konzentration und Quotientenberechnung
1.3.3 Messung der Gesamt-IgA-Konzentration und Quotientenberechnung
1.4 LIMES-QUOTIENTEN-BERECHNUNG
2. BESTIMMUNG DER QUOTIENTEN FÜR ERREGERSPEZIFISCHE ANTIKÖRPER
2.1 SERION ELISA classic TESTDURCHFÜHRUNG
2.1.1 Probenverdünnung
2.1.2 Rf-Absorption
2.1.3 Testablauf - Übersicht SERION ELISA classic IgG, IgM, IgA
2.2 AUSWERTUNG
2.2.1 Nichtautomatisierte Auswertung
2.2.2 Automatisierte Testauswertung mit SERION easy base 4PL-Software
2.3 BERECHNUNG DER QUOTIENTEN FÜR ERREGERSPEZIFISCHE ANTIKÖRPER
3. BERECHNUNG DES ANTIKÖRPER-INDEX (AI)
4. INTERPRETATION
5. BERECHNUNGSBEISPIEL
6. LEISTUNGSMERKMALE
6.1 PRÄZISION
7. ANWEISUNGEN FÜR DAS AUSWERTEPROGRAMM (SERION liquor)
1
V 3. 03/05-1

1. EINFÜHRUNG IN DIE LIQUORDIAGNOSTIK
Die Liquordiagnostik ermöglicht den Nachweis und die Differenzierung von entzündlichen
Prozessen im Zentralnervensystem (ZNS). Hierbei muß zwischen Krankheitsbildern
unterschieden werden, deren Ursache die Infektion mit mikrobiellen Erregern darstellt oder
chronisch entzündlichen Prozessen anderer Genese ( z.B. Multiple Sklerose).
Bei vorhandenen neurologischen Symptomen und dem Verdacht auf eine Infektion des ZNS
bzw. einen chronisch entzündlichen Prozesses basiert die erweiterte Liquordiagnostik auf der
Erfassung von intrathekal gebildeten Antikörpern.
Bei einer akuten Infektion des ZNS werden lokal Antikörper gegen den verursachenden
Erreger gebildet, deren Nachweis die Diagnose unterstützt. Versuche, die Erreger direkt aus
dem Liquor cerebrospinalis nachzuweisen, sind entweder erfolglos (z.B. Borrelia burgdorferi)
oder zu zeitaufwendig (Viren). Deshalb erfolgt in den meisten Verdachtsfällen die
Differentialdiagnose ausschließlich mit Hilfe serologischer Methoden.
Chronisch entzündliche Prozesse im ZNS gehen mit einer polyspezifischen intrathekalen
Immunantwort einher. In diesem Fall lassen sich Antikörper gegen mehrere virale Erreger
nachweisen, die aber nicht Ursache der Erkrankung sind.
Eine alleinige Untersuchung des Liquors ist allerdings nicht ausreichend, um eine intrathekale
Antikörpersynthese nachzuweisen, es müssen weitere Faktoren berücksichtigt werden.
Die Passage von Molekülen und Zellen aus dem arteriellen Blut in das Hirnparenchym (Blut-
Hirn-Schranke) und in den Liquorraum (Blut-Liquor-Schranke) ist drastisch behindert
(Permeabilität der Gefäßwände), aber nicht völlig ausgeschlossen. Verschiedene Stoffklassen
(Aminosäuren, Zucker, Proteine) haben sehr unterschiedliche Passagebedingungen. Glukose
gelangt z.B. sehr schnell vom Blut in den Liquor, während Laktat die Schranke praktisch nicht
passiert. Die Permeabilität für Proteine ist durch die molekülgrößenabhängige Diffusion
bestimmt. Die Gesamtproteinkonzentration von Liquor cerebrospinalis beim gesunden
Menschen liegt um den Faktor 10 2 bis 10 4 unterhalb der Proteinkonzentrationen des
korrespondierenden Serums. Durch verschiedene Ursachen können die Proteinkonzentrationen
im Liquor deutlich erhöht sein („Schrankenfunktionsstörung“).
Im Liquor gefundene Antikörper können sowohl aus dem Plasma in den Liquorraum
diffundiert sein als auch aus einer lokalen Synthese entstammen. Eine Aussage über intrathekal
gebildete Antikörper ist nur durch die Bestimmung verschiedener Proteine im Serum und im
Liquor, die Berechnung von Liquor-Serumquotienten für diese Proteine und die daraus
abgeleitete Ermittlung des Antikörper-Index (AI) möglich.
2

Zusammenfassung: Bei der Untersuchung des Patientenmaterials müssen folgende Fragen
abgeklärt werden:
Ist die Konzentration für Plasmaproteine im Liquor erhöht?
Liegt eine intrathekale polyklonale Synthese von Immunglobulinen vor?
Liegt eine intrathekale Synthese von erregerspezifischen Antikörpern vor?
(Berechnung des Anteils aus dem Plasma stammender Antikörper zur Unterscheidung von
den wirklich intrathekal gebildeten Antikörpern)
Aufgrund der komplexen Zusammenhänge der nachfolgend beschriebenen Berechnungen
ist es besonders wichtig, geeignete, möglichst genaue Meßmethoden zu verwenden, um eine
sichere Diagnose zu gewährleisten. Es ist darauf zu achten, daß Blut- und Liquorentnahme
am gleichen Tag stattfinden und die Untersuchungen immer parallel für Serum und Liquor
in der gleichen Meßreihe durchgeführt werden.
Die hier beschriebene Arbeitsanleitung orientiert sich an der von H. Reiber entwickelten
Anleitung zur Liquordiagnostik (ausführliche Beschreibung siehe hierzu auch H. Reiber 1995,
Lab. med. 19: 444-462 und H. Reiber, J. B. Peter 2001, J. Neurol. Sci. 184: 101-122). Auf Wunsch
senden wir Ihnen gerne weiterführende Literatur zur Liquordiagnostik zu.
1.1 Anwendungsbereich
Die Institut Virion\Serion GmbH stellt ein unter Excel laufendes
Auswertungsprogramm SERION liquor, zur Verfügung (siehe hierzu auch
Punkt 7. „Serion liquor Anweisungen“), mit dessen Hilfe Sie problemlos den
Antikörper-Index berechnen können.
Folgende SERION ELISA classic Nachweise wurden für die Liquordiagnostik evaluiert:
SERION ELISA classic- IgG IgM IgA
Masern Virus X
Röteln Virus X
Varicella-Zoster Virus X
Herpes Simplex Virus 1+2 X
Mumps Virus X
Cytomegalovirus X
FSME Virus X X
Borrelia burgdorferi X X
3

1.2 BESTIMMUNG DES ALBUMINQUOTIENTEN
Eine Erhöhung der Plasmaproteinkonzentration im Liquor (frühere Interpretation: Störung der
Blut-Liquor-Schrankenfunktion; neuere Interpretation: Reduktion der
Liquorflußgeschwindigkeit) kann die Diagnose auf Basis des Antikörpernachweises
verfälschen. Deshalb muß eine zuverlässige Liquordiagnostik immer den Anteil an
diffundierten Antikörpern berücksichtigen. Das zur Berechnung herangezogene
Referenzprotein ist Albumin, da dieses Protein ausschließlich außerhalb des Liquorraumes
synthetisiert wird.
Mit einer nephelometrischen Messung (Tests/Meßgeräte kommerziell erhältlich) wird die
Albumin-Konzentration im Serum und im korrespondierenden Liquor gemessen. Man erhält
folgenden Quotienten:
Q Albumin =
Konz. Albumin
Konz. Albumin
In der Bewertung der „Schrankenfunktionsstörung“ ist die Altersabhängigkeit des
Albuminquotienten zu berücksichtigen. Besonders bei Neugeborenen und Säuglingen ist ein
erhöhter Albuminquotient zu beobachten.
4
Liquor
Serum
Lebensalter Q Albumin
Geburt 8 - 28 x 10 -3
1 Monat 5 - 15 x 10 -3
2 Monate 3 - 10 x 10 -3
3 Monate 2 – 5 x 10 -3
4 Monate bis 6 Jahre 0,5 – 3,5 x 10 -3
bis 15 Jahre < 5 x 10 -3
bis 40 Jahre < 6,5 x 10 -3
bis 60 Jahre < 8 x 10 -3

1.3 BESTIMMUNG DES QUOTIENTEN FÜR GESAMT-IMMUNGLOBULINE
Für die Berechnung des Antikörper-Index ist im nächsten Schritt die Bestimmung des Gesamt-
Immunglobulin-Quotienten, der als Bezugsgröße dient (Ausnahme siehe Punkt 4), notwendig.
1.3.1 Messung der Gesamt-IgG-Konzentration und Quotientenberechnung
Die Messung des Gesamt-IgG in Liquor und Serum erfolgt nephelometrisch analog zur
Albumin Konzentrationsbestimmung.
Der Quotient Gesamt-IgG wird wie folgt berechnet:
Q Gesamt - IgG =
Konz. Gesamt - IgG
Konz. Gesamt - IgG
1.3.2 Messung der Gesamt-IgM-Konzentration und Quotientenberechnung
Der einfache nephelometrische Nachweis ist für die Konzentrationsbestimmung von Gesamt-
IgM zu wenig empfindlich. Deshalb wird hier eine Messung mittels Partikel-verstärktem
immun-nephelometrischem Assay empfohlen (kommerziell erhältlicher Nachweis).
Der Quotient für Gesamt-IgM wird wie folgt berechnet:
Q Gesamt - IgM =
Konz. Gesamt - IgM
Konz. Gesamt - IgM
1.3.3 Messung der Gesamt-IgA-Konzentration und Quotientenberechnung
Die Messung des Gesamt-IgA erfolgt analog zur IgM-Konzentrationsbestimmung.
Der Quotient für Gesamt-IgA wird wie folgt berechnet:
Q Gesamt - IgA =
Konz. Gesamt - IgA
Konz. Gesamt - IgA
5
Liquor
Serum
Liquor
Serum
Liquor
Serum

1.4 LIMES-QUOTIENTEN-BERECHNUNG:
Verschiedene chronisch entzündliche Erkrankungen des ZNS können von einer
polyspezifischen intrathekalen Antikörpersynthese begleitet sein. Die Gesamt-Immunglobulinkonzentration
im Liquor ist dann um diesen lokal synthetisierten Anteil erhöht gegenüber der
Konzentration des aus dem Plasma stammenden Anteils. Der Gesamt-Immunglobulinquotient
(Q Gesamt-IgG, Q Gesamt-IgM, Q Gesamt-IgA) fällt entsprechend hoch aus und kann nicht als Bezugsgröße
für die Antikörper-Indexberechnung dienen, da es diesen Wert verfälschen und eine Erregerspezifische
intrathekale Antikörpersynthese u. U. nicht erkannt werden würde.
Um eine solche polyspezifische intrathekale Immunglobulinsynthese zu erkennen, muß der
sogenannte Limes-Quotient (Qlim) zusätzlich berechnet werden. Er stellt den Wert dar, der sich
ohne den zusätzlichen lokal synthetisierten Immunglobulinanteil ergibt. Die Berechnung von
Qlim erfolgt nach einem von H. Reiber empirisch ermittelten Zusammenhang zwischen
Albuminquotienten und Immunglobulinquotienten für den Bereich von normaler Schrankenfunktion
bis zu hochgradig ausgeprägter Schrankenfunktionsstörung.
Da die Grundlage der Berechnungen die Diffusionskonstanten der beteiligten Moleküle
darstellen, muß die Quotientenberechnung für IgG und IgM nach unterschiedlichen Formeln
erfolgen:
IgG:
IgM:
IgA:
Q IgG-lim = 0,93 x
Q IgM-lim = 0,67 x
Q IgA-lim = 0,77 x
2
-6
(Q Albumin) + 6 x 10 - 1,7 x 10-3 2
-6
(Q Albumin) + 120 x 10 - 7,1 x 10-3 2
-6
(Q Albumin) + 23 x 10 - 3,1 x 10-3 Eine polyspezifische intrathekale Ig-Synthese (IgG, IgM bzw. IgA) liegt dann vor,
wenn
Q Gesamt-IgG / Gesamt-IgM / Gesamt IgA > Q IgG-lim / IgM-lim / IgA-lim ist.
6

2. BESTIMMUNG DES QUOTIENTEN FÜR ERREGERSPEZIFISCHE ANTIKÖRPER
2.1 SERION ELISA classic TESTDURCHFÜHRUNG
Die erregerspezifischen Antikörper im Serum und im Liquor werden mit dem jeweiligen
SERION ELISA classic IgG/IgM/IgA nachgewiesen. Bitte folgen Sie der im Kit enthaltenen
Arbeitsanleitung, wobei im Fall der Liquordiagnostik nachfolgende Verdünnungen für Serum
und Liquor gewählt werden sollten.
2.1.1 Probenverdünnung
Aufgrund der hohen Ansprüche an die Exaktheit der Antikörperquantifizierung für den
Bereich der Liquordiagnostik muß der dynamische Bereich streng auf den pseudolinearen
Abschnitt der Standardkurve beschränkt werden (siehe kitspezifische Standardkurve) .
Zusätzlich ist zu empfehlen, OD- Wertepaare, die möglichst dicht beisammen liegen, für die
Berechnung zu verwenden. Bei Einhaltung der empfohlenen Verdünnungen für Liquores und
Seren werden in der Regel - sofern Antikörper nachweisbar sind - OD- Werte erhalten, die in
diesen Bereich fallen.
Bis im Labor genügend Erfahrungen bzgl. Liquordiagnostik vorliegen, sollten, wenn möglich,
Serum- und Liquorproben jeweils in 2 Verdünnungen ausgetestet werden. AI- Berechnungen
können dann in allen Kombinationen erfolgen. Bei gegebener Verdünnungslinearität werden
übereinstimmende AI erhalten. (Bestätigung des Ergebnisses). Fallen einzelne OD- Werte in den
oberen oder unteren abflachenden Bereich der Standardkurve, können allerdings größere
(>30%) Unterschiede der berechneten Werte auftreten; die Verdünnungslinearität ist hier nicht
mehr optimal.
Serumverdünnung:
1 : 400 je 10 µl Patientenserum
zu je 4000 µl Verdünnungspuffer (= 1 + 400)
Liquorverdünnung:
1 : 2 je 100 µl Liquores
zu je 100 µl Verdünnungspuffer (= 1 + 1)
Bei höheren Antikörperkonzentrationen in Seren und Liquores haben sich folgende
Verdünnungen für beide Materialien in zahlreichen Austestungen bewährt:
Serumverdünnung:
1 : 1000 je 10 µl Patientenserum
zu je 1000 µl Verdünnungspuffer (= 1 + 100)
je 20 µl aus der ersten Verdünnung
zu je 180 µl Verdünnungspuffer (1 + 9)
Liquorverdünnung:
1 : 10 je 20 µl Liquores
zu je 180 µl Verdünnungspuffer (= 1 + 9)
7

Die verdünnten Proben sollten sorgfältig gemischt und in Doppelbestimmung im ELISA
gemessen werden.
Anmerkung:
Häufig liegen Liquorproben nicht in ausreichenden Mengen vor, so daß höhere Verdünnungen
gewählt werden müssen. In diesen Fällen sollte auch eine höhere Serumverdünnung gewählt
werden. Eine höhere Verdünnung kann allerdings in manchen Fällen mit einem Verlust an
Sensitivität einhergehen.
2.1.2 Rheumafaktor-Absorption
Bei IgM-Bestimmungen kann für Serum und Liquorproben eine Rheumafaktor (Rf) Absorption
durchgeführt werden. Die nachfolgende Anleitung bezieht sich auf das Produkt SERION Rf-
Absorbens (Best. Nr. Z100 (5 ml) bzw. Z200 (20 ml)).
Durchführung Rf-Absorption für Serum:
1. 10 µl Serumprobe mit 200 µl Rf- Absorbens und 800 µl SERION ELISA classic
Verdünnungspuffer gut mischen (ergibt Serumverdünnung 1:100).
2. 15 Minuten bei Raumtemperatur oder über Nacht bei +2 bis +8 o C inkubieren;
nochmals gut mischen
3. Den zweiten Verdünnungschritt (1:4 bzw. 1:10) mit SERION ELISA classic
Verdünnungspuffer durchführen. Nun 100 µl dieser 1:400 bzw. 1:1000 Serumverdünnung
für den Testansatz im SERION ELISA classic verwenden.
Durchführung Rf-Absorption für Liquores:
1. SERION Rf- Absorbens 1:5 mit SERION ELISA classic Verdünnungspuffer vorverdünnen,
z.B. 100 µl Rf-Absorbens + 400 µl SERION ELISA classic Verdünnungspuffer; den Ansatz
gut mischen.
2. Liquorprobe mit dieser Rf-Absorbens-Vorverdünnung 1:2 oder 1:10 verdünnen, z.B.:
100µl Vorverdünnung + 100 µl Liquores (1:2) oder
180 µl Vorverdünnung + 20 µl Liquores (1:10); den Ansatz gut mischen.
3. 15 Minuten bei Raumtemperatur oder über Nacht bei +2 bis +8 ° C inkubieren; nochmals
gut mischen.
4. 100 µl des Gemisches für einen Testansatz im SERION ELISA classic verwenden.
8

2.1.3 Testablauf - Übersicht SERION ELISA classic IgG/IgM/IgA
(siehe hierzu auch jeweils die im Testkit enthaltene Gebrauchsanweisung)
Probenverdünnung des Patientenmaterials:
Serum: 1:400 / 1:1000
Liquor: 1:2 / 1:10
Vorlage der verdünnten Proben und gebrauchsfertige Kontroll-/Standardseren (100 µl)
INKUBATION 60 Min./ 37°C
feuchte Kammer
WASCHEN
Vorlage der verdünnten Konjugatlösung (100 µl)
INKUBATION 30 Min./ 37°C
feuchte Kammer
WASCHEN
Vorlage der Substratlösung (100 µl)
INKUBATION 30 Min./ 37°C
feuchte Kammer
Zugabe der Stopplösung (100 µl)
EXTINKTIONSMESSUNG BEI 405 nm
9

2.2. Auswertung
Der Testpackung liegen ein Qualitätskontrollzertifikat mit Wertetabelle und eine
Standardkurve bei. Auf dem Qualitätskontrollzertifikat sind der "Sollwert" des
Standardserums, dessen Gültigkeitsbereich sowie die 4 Parameter der Auswerteformel für die
automatisierte Testauswertung angegeben.
Das Ablesen der U/ml Werte aus der Wertetabelle ist für die Liquordiagnostik nicht geeignet.
2.2.1 Nichtautomatisierte Auswertung
Für die Testauswertung liegt eine Standardkurve bei, mittels derer jedem im Testansatz
erhaltenen OD-Wert die entsprechende Antikörperaktivität zugeordnet werden kann.
Der Substratleerwert (blank) muß vor den Auswertungen von allen Meßergebnissen
abgezogen werden.
Testschwankungen, die von Tag zu Tag sowie von Labor zu Labor auftreten (sog. Interassay-
Varianz) werden durch Multiplikation des aktuellen Meßwerts der Patientenprobe mit dem
Korrekturfaktor F ausgeglichen:
F =
OD-Sollwert (des Standardserums)
OD-Tageswert (des Standardserums)
Dieses Verfahren ist notwendig, um das aktuelle Meßniveau des Anwenders an die
chargenspezifische Standardkurve anzugleichen bzw. zu normalisieren.
Zunächst müssen durch Berechnung eines Faktors Tagesschwankungen korrigiert werden:
1. Aus den 2 Extinktionswerten des Standards Mittelwert bilden und prüfen, ob der Wert im
angegebenen Toleranzbereich liegt.
2. Berechnung des Faktors „F“: Der angegebene Sollwert des Standards wird durch den
Mittelwert der Extinktion geteilt:
F = Sollwert Extinktion Standard / Mittelwert Extinktion Standard.
3. Alle Meßwerte der Patientenproben werden mit „F“ multipliziert.
4. Über die korrigierten Meßwerte können anhand der Standardkurve Antikörperaktivitäten
in U/ml abgelesen werden 1) .
2.2.2 Automatische Testauswertung mit SERION easy base 4PL-Software
Durch Eingabe der 4 Parameter und des Sollwertes des Standardserums werden
Antikörperaktivitäten nach Messung der Testplatte durch das Auswerteprogramm errechnet.
Falls ein Wert außerhalb des Gültigkeitsbereiches liegt, können folgende Fehlermeldungen
angezeigt werden:
10

”Standards liegen außerhalb des Toleranzbereiches”; u./o. ”Die Standards liegen über 20 %
auseinander.” In diesen Fällen ist der Testlauf nicht valide und sollte wiederholt werden.
Parameter und Sollwert müssen jeweils nur bei Chargenwechsel geändert werden (Parameter
und Sollwert sind auf der Wertetabelle angegeben). Die korrekte Eingabe dieser
chargenspezifischen Daten kann anhand der dem Standardserum zugeordneten U/ml
überprüft werden. Der erhaltene Mittelwert der Units muß mit dem auf dem
chargenspezifischen Zertifikat angegebenen Unitwert übereinstimmen. Eine Meßwertkorrektur
erfolgt automatisch. Im Ausdruck der Meßergebnisse erscheint:
Probenbezeichnung
OD-Wert
U/ml 1)
Bewertung 2)
1) Die U/ml Werte müssen wie nachfolgend beschrieben noch mit den gewählten
Verdünnungen für Serum und Liquor verrechnet werden!
2) Die hier angegebenen Bewertungen sind für die Liquordiagnostik ohne Bedeutung.
Sie sind nur gültig für Serumproben mit einer 1:100-Verdünnung.
2.3 Berechnung des Quotienten für erregerspezifische Antikörper
Da Serum und Liquor in unterschiedlichen Verdünnungen (z. B. Serum 1:400, Liquor 1:2)
gemessen wurden, müssen die erhaltenen Konzentrationen für Serum und Liquor auf eine
einheitliche Verdünnung bezogen werden (hier 1:100). Deshalb werden die U/ml-Werte des
Serums mit dem Faktor 4 multipliziert, während die U/ml-Werte des Liquors durch den
Faktor 50 dividiert werden. Die für das Serum erhaltenen Unit-Werte können nach der
Umrechnung testspezifisch bewertet werden.
IgG:
IgM:
IgA:
Q spez. IgG =
Q spez. IgM =
Q spez. IgA =
U/ml spez. IgG
U/ml spez. IgG
U/ml spez. IgM
U/ml spez. IgM
U/ml spez. IgA
U/ml spez. IgA
11
Liquor
Serum
Liquor
Serum
Liquor
Serum

3. BERECHNUNG DES ANTIKÖRPER-INDEX (AI)
Zur Identifizierung einer lokalen Synthese von erregerspezifischen Antikörpern im ZNS wird
der erregerspezifische Liquor-Serum Quotient (Q spez.IgG/spez.IgM/spez. IgA) auf den Liquor-Serum-
Quotienten des Gesamt-Ig (Q Gesamt-IgG/Gesamt-IgM/Gesamt-IgA) bezogen:
AI =
Q
Q
spez. IgG / spez. IgM / spez. IgA
Gesamt - IgG / Gesamt - IgM / Gesamt - IgA
Liegt eine polyspezifische intrathekale Gesamt-IgG, Gesamt-IgM bzw. Gesamt-IgA Synthese
vor, wird der erregerspezifische IgG-, IgM- bzw. IgA-Quotient auf den errechneten
Q IgG-lim / IgM-lim / IgA-lim bezogen.
(zur Erinnerung: Eine intrathekale IgG-Synthese liegt dann vor, wenn
Q Gesamt-IgG/Gesamt-IgM / Gesamt-IgA > Q IgG-lim / IgM-lim / IgA-lim ist):
4. INTERPRETATION
Q
AI =
Q
spez. IgG / spez. IgM / spez. IgA
IgG - lim / IgM - lim / IgA - lim
AI > 1,5 pathologische Bildung von erregerspezifischen
Antikörpern im Liquor
AI = 0,7 bis 1,3 Normal-Bereich, keine Synthese erregerspezifischer
Antikörper im Liquor
Anmerkung:
Werden Antikörper im Liquor gemessen, die durch Diffusion aus dem Serum dorthin gelangt
sind, ergibt sich im Idealfall, bei größtmöglicher Meßgenauigkeit, ein AI von 1.
Das Verhältnis der Konzentrationen spezifischer Antikörper und des Gesamtimmunglobulins
ist gleich, da beide gleichermaßen diffundieren. Dies gilt auch, wenn eine
Schrankenfunktionsstörung vorliegt.
Das Verfahren nach Reiber legt die Grenzen für den AI- Normbereich zwischen 0,7 und 1,3 fest
(Fehlerbreite der Messungen) . Werte > 1,5 gelten als pathologisch.
Wird ein AI von 1 bestimmt, ist die Bestimmung optimal durchgeführt worden, sofern auch die
anderen Untersuchungsparameter einen unauffälligen Befund ergeben. (Qualitätsprüfung)
12

5. BERECHNUNGSBEISPIEL
Beispiel:
Männlicher Patient, 32 Jahre alt, Verdacht auf HSV-Enzephalitis
Berechnung des Albuminquotienten
Die Messung ergab Albuminkonzentrationen von 349 mg/l im Liquor und 49,3 g/l im Serum.
Nach der unter Punkt 2 aufgeführten Formel ist
Konz. Albumin Liquor
Q Albumin =
Konz. Albumin Serum
349 mg/l
Q Albumin =
49,3 g/l
Q Albumin = 7,08 x 10 -3
Anmerkung: Nach der unter Punkt 2 angegebenen Tabelle liegt ein Verdacht auf eine leichte
Schrankenstörung vor.
Berechnung des Quotienten für Gesamt-IgG:
Aus der Messung wurden IgG-Konzentrationen im Liquor von 33,1 mg/l und im Serum von
7,48 g/l erhalten. Nach der in Punkt 3 aufgeführten Formel ist
Q Gesamt - IgG =
Q - IgG
Konz. Gesamt - IgG
Konz. Gesamt - IgG
33,1mg/l
7,48 g/l
Liquor
Serum
Gesamt = Q Gesamt-IgG = 4,43 x 10 -3
Berechnung des Limes-Quotienten:
Unter Anwendung der unter Punkt 4 beschriebenen Formel ergibt sich
Q IgG-lim = 0.93 x
Q IgG-lim = 0.93 x
Q IgG-lim = 5,27 x 10 -3
2
-6
(Q Albumin) + 6 x 10 - 1,7 x 10-3 -6
-6
(50,13 x 10 ) + 6 x 10 - 1,7 x 10-3 Da der Q Gesamt-IgG kleiner als der Q IgG-lim ist, wird in der nachfolgenden Berechnung des AI der
Q Gesamt-IgG -Wert als Bezugsgröße genommen.
Berechnung des Quotienten für erregerspezifische Antikörper:
Nach Durchführung der entsprechenden SERION ELISA classic Nachweise (z.B HSV IgG)
werden folgende erregerspezifische Antikörperkonzentrationen in Serum und Liquor erhalten
und mit den Verdünnungsfaktoren verrechnet (siehe hierzu Punkt 5.3):
13

SERION ELISA classic HSV IgG:
Verdünnung (z.B.)
14
Berechnung auf einheitliche
Verdünnung von 1:100:
Liquorkonzentration Liquor 1:2 15,7 U/ml : 50 = 0,314 U/ml
Serumkonzentration Serum 1:400 6,66 U/ml x 4 = 26,64 U/ml
Daraus errechnet sich der Quotient wie folgt:
Q spez. IgG =
U/ml spez. IgG
U/ml spez. IgG
0,314 U/ml
26,64 U/ml
Liquor
Serum
Q spez. IgG = Q spez. IgG = 11,79 x 10 -3
Berechnung des Antikörperindex (AI):
Mit den oben erhaltenen Werten für die verschiedenen Quotienten kann der AI wie folgt
berechnet werden:
Q spez. IgG
AI =
Q Gesamt - IgG
-3
11,79 x 10
AI = -3
4,43 x 10
AI = 2,66
Bewertung des Ergebnis:
Es liegt ein Hinweis auf eine HSV-spezifische intrathekale Antikörpersynthese vor.

6. LEISTUNGSMERKMALE
6.1 PRÄZISION
Präzision von spezifischen Liquor-/ Serum-Antikörperquotienten
Variationskoeffizient (VK) = Standardabweichung
Mittelwert
Variationskoeffizient
(%)
IgG
Interassay-
Impräzision
(n=10)
Intraassay-
Impräzision
(n=10)
15
x 100
Masern Röteln VZV HSV
14,8 7,01 6,30 7,81
9,95 8,00 8,75 7,77
Grundlage der Berechnungen sind Doppelwerte.
Untersuchungsmaterial: gepoolte Seren und Liquores (31-Serum-Liquor-Paare).
7. ANWEISUNGEN FÜR DAS AUSWERTEPROGRAMM (SERION liquor)
Auf MS-Excel basierendes Software-Programm
Auf Anfrage senden wir Ihnen eine Diskette mit der o. g. Software. Für weitere Fragen steht
Ihnen Ihr zuständiger Außendienstmitarbeiter gerne zur Verfügung.
7.1 Starten des Programms:
Starten Sie das Programm unter MS-Excel. Legen Sie die Diskette ins Laufwerk A. Wählen Sie
unter „Datei öffnen“ das Laufwerk A und laden Sie die Datei „LiquorVers15-D.xls.“ Nun
erscheint das patientenspezifische Datenblatt auf Ihrem Bildschirm.
7.2 Patientendaten und Meßergebnisse:
Tragen Sie zunächst alle verfügbaren Patientendaten in die hierfür vorgesehenen, grau
unterlegten Felder ein:
Labornummer
Patientenname
Alter des Patienten
Analysedatum

Tragen Sie nun die in den Messungen erhaltenen Ergebnisse aus Serum und Liquor, sowie die
bei der Analyse der erregerspezifischen Antikörper gewählten Verdünnungen, in die hierfür
vorgesehenen, grau unterlegten Felder ein. Bitte beachten Sie die richtige Zeichensetzung bei
der Eingabe der Dezimalwerte (richtig: 3,45 / falsch: 3.45):
Albuminkonzentrationen*
Gesamt-Immunglobulinkonzentrationen (Gesamt-IgG und/oder -IgM)*
Konzentrationen der spezifischen Antikörper (IgG und/oder IgM)
sowie die gewählten Verdünnungen für Serum und Liquor **
(z.B. Liquor 1:2, Serum 1:400)
Anmerkungen:
* Beachten Sie die verlangten Einheiten für Liquor von mg/l und Serum von g/l ! Sollten
sich bei Ihren Messungen andere Einheiten ergeben, muß eine Umrechnung erfolgen!
** Sollten zum Nachweis der erregerspezifischen Antikörper verschiedene Verdünnungen
für den jeweiligen Erregernachweis gewählt werden (z.B. Masern IgG 1:400 Serumverdünnung,
Borrelia IgG 1:200 Serumverdünnung), dann kann die Berechnung nicht
auf einem gemeinsamen Datenblatt erfolgen. Bei unterschiedlichen Verdünnungen
müssen extra Datenblätter angelegt werden.
7.3 Berechnung der Quotienten und des AI:
Die Berechnung der Quotienten wird von dem Programm selbst durchgeführt, sobald alle
erforderlichen Daten hierzu eingegeben sind. In der Spalte „AI-Werte“ erscheint der errechnete
Antikörperindex.
7.4 Speichern der Daten:
Bitte speichern Sie das patientenspezifische Datenblatt unter einem individuellen Dateinamen
(Menü: „Datei – speichern unter“).
16