Toxoplasma V18-deu NEU - virion\serion

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Institut Virion\Serion GmbH 

Институт Вирион\Серион ООО 

Friedrich-Bergius-Ring 19 

Кольцевая ул. Фридриха Бергиюса 19 

D - 97076 Würzburg, Germany 

D - 97076 Вюрцбург, Германия 

Telefon/Телефон: +49 (0) 9 31 / 30 45 0 

Fax/Факс: +49 (0) 9 31 / 30 45 100 

E-Mail/Эл. почта: dialog@virion-serion.de 

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KAL110-1 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 

YOUR 

GLOBAL 

PARTNER 

IN 

DIAGNOSTICS 

SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgG/IgM 

0197 

Gebrauchsanweisung - Deutsch 

Instructions - English 

Mode d´emploi - Français 

Istruzioni per l´uso - Italiano 

Инструкция по применению – русский язык 

(Version/Versione/версия 18.11/12-1)

Aktualisierungen 

Bitte beachten Sie die Änderungen im Vergleich zur Vorversion. 

Versionsnummer: V 18.11/12-1 

Vorhergehende Version: V 17.11/08-1 

Änderung in Kapitel: 5, 7.2.1 


INHALTSVERZEICHNIS 

1 ANWENDUNGSBEREICH 

2 DIAGNOSTISCHE BEDEUTUNG 

3 TESTPRINZIP SERION ELISA classic 

4 INHALT UND ZUSAMMENSETZUNG 

5 ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE MATERIALIEN 

6 LAGERUNG UND HALTBARKEIT 

7 DURCHFÜHRUNG DES SERION ELISA classic 

7.1 Allgemeine Hinweise 

7.2 Probenvorbereitung und Lagerung 

7.3 Reagenzienvorbereitung 

7.4 Übersicht - Testablauf 

7.5 Manuelle Testdurchführung 

7.6 Automatische Testdurchführung 

7.7 Positivkontrolle / Richtigkeitskontrolle 

7.8 Aviditätsbestimmung 

7.9 Neonataldiagnostik 

8 TESTAUSWERTUNG 

8.1 Ein-Punkt-Quantifizierung nach der 4PL-Methode 

8.2 Testgültigkeitskriterien 

8.3 Auswertung SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 

8.4 Quantifizierungsgrenzen 

8.5 Grenzwertbereiche 

8.6 Interpretation der Ergebnisse 

8.7 Referenzbereiche gesunder Probanden 

9 LEISTUNGSMERKMALE 

9.1 Sensitivität und Spezifität 

9.2 Präzision 

10 SICHERHEITSMASSNAHMEN 

10.1 Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen 

10.2 Entsorgung 

11 LITERATUR 

vorliegende Version: V 18.11/12-1 

Vorversion: V 17.11/08-1 

DE 

FR EN 

RU IT

Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/U pdate/U pdate: Toxoplasma @ 9\mod_1312896808207_6.doc @ 36147 @ 

Pos: 2 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Einl eitung " Enzymimmunoassay" @ 4\mod_1255336385816_6.doc @ 21164 @ 


Enzymimmunoassay zur Bestimmung von humanen Antikörpern 

deutsch 2 

für die in vitro-Diagnostik 

Pos: 3 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Bestell nummern/Toxoplasma: Bestellnummer n @ 0\mod_1188812439090_6.doc @ 9299 @ 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG Best.-Nr.: ESR110G 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM Best.-Nr.: ESR110M 

Pos: 4 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift " Anwendungsber eich" @ 0\mod_1177351044007_6.doc @ 168 @ 1 

1 ANWENDUNGSBEREICH 

Pos: 5 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Anwendungsber eich/T oxoplasma: Anwendungsber eich @ 7\mod_1258450048395_6.doc @ 25845 @ 

Die SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG bzw. IgM sind qualitative und 

quantitative Immunoassays für den Nachweis von humanen Antikörpern in Serum oder 

Plasma gegen den Parasiten Toxoplasma gondii. Der Nachweis von IgG Antikörpern dient 

zur Bestimmung des Immunstatus. In Verbindung mit dem SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii Aviditätsreagenz (Bestell-Nr.: B110AVID) kann eine Bestimmung der 

Avidität der IgG Antikörper durchgeführt werden. Der IgM Nachweis wird bei der Erfassung 

akuter Infektionen als initialer Test eingesetzt. Da IgM Antikörper oft über sehr lange 

Zeiträume persistieren, sind bei positivem Ergebnis weitere serologische 

Prüfungsverfahren, wie z. B. der Aviditätstest, erforderlich. Der SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgM ist auch für das Neugeborenen-Screening geeignet unter 

Verwendung üblicher, mit Blutproben getränkter und getrockneter Filterpapiere. 

Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_6.doc @ 219 @ 1 

2 DIAGNOSTISCHE BEDEUTUNG 

Pos: 7 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Di agnostische Bedeutung/T oxopl asma: Di agnostische Bedeutung @ 7\mod_1258450090472_6.doc @ 25861 @ 

Toxoplasma gondii ist ein eukaryotischer Einzeller der Gruppe der Sporozoen. Die obligat 

intrazellulären Parasiten sind weltweit verbreitet. Typisch für die Sporozoen ist der 

Wechsel zwischen sexueller - diese findet ausschließlich im Endwirt, der Katze, statt - und 

asexueller Vermehrung. 

Nach der oralen Aufnahme der Parasiten, z. B. durch den Verzehr von kontaminierten 

Nahrungsmitteln, penetrieren die Toxoplasmen die Darmwand und gelangen in das 

reticuloendotheliale System. Mit Hilfe dieser hämatogenen Verbreitung ist Toxoplasma 

gondii in der Lage, eine Vielzahl von Geweben und Organen zu infizieren. 

Die Durchseuchung in der Bevölkerung mit dem weltweit verbreiteten Parasiten ist 

altersabhängig. Umweltfaktoren und Lebensgewohnheiten beeinflussen den Grad der 

Durchseuchung erheblich. Im Durchschnitt steigt die Seroprävalenz um etwa 10 % je 

Lebensjahrzehnt. So sind ca. 50 % der Menschen im Alter von 50 Jahren seropositiv. 

Etwa die Hälfte der Toxoplasma Infektionen verlaufen klinisch inapparent. Bei den übrigen 

Toxoplasmosen treten oftmals lediglich unspezifische Symptome auf, die sich nach einer 

Inkubationszeit von ein bis drei Wochen in leichtem Fieber, Mattigkeit, Stirnkopfschmerzen 

sowie Muskel- und Gelenkschmerzen äußern. Ein geringer Prozentsatz der Infizierten 

entwickelt Fieber bis 39 °C sowie zervikale und auch generalisierte Lymphknotenschwellungen. 

Komplikationen in Form von Myokarditis, Meningitis oder Pneumonie treten 

bei 1 % der infizierten Kinder bzw. jungen Erwachsenen auf. Nach Überwindung der 

aktiven Phase der Infektion verbleiben die Toxoplasmen in den infizierten Geweben in

Zysten eingeschlossen zurück. In der Regel wird diese latente Infektion beim 

immunkompetenten Wirt nicht reaktiviert. Wahrscheinlich wird durch die ständige Präsenz 

der korrespondierenden Antigene eine lebenslange Immunität induziert, die zuverlässig 

vor weiteren Infektionen schützt. 

Im Rahmen der Mutterschaftsvorsorge spielt das „Screening“ von Schwangerenseren zur 

Abklärung des Immunstatus eine große Rolle. Eine Infektion während der 

Schwangerschaft kann zu jedem Zeitpunkt zu einer transplazentaren Übertragung der 

Toxoplasmen führen, jedoch ist das Risiko für eine pränatale Übertragung nicht gleich 

hoch bzw. sind die möglichen Folgen der Infektion für das Neugeborene unterschiedlich 

ausgeprägt: 

1. Trimenon 17 % (meistens Abort, seltener schwere Schäden des Neugeborenen) 

2. Trimenon 24 % (mittlere bis schwere Schäden des Neugeborenen) 

3. Trimenon 64 % (nur leichte Schäden bzw. Spätschäden) 

Die Gefahr einer transplazentaren Übertragung der Parasiten besteht ausschließlich bei 

seronegativen Müttern, die eine Primärinfektion durchleben. In der Bundesrepublik 

Deutschland wird von einer durchschnittlichen jährlichen Inzidenz von zwei bis sieben 

infizierten Neugeborenen auf 1000 Lebendgeburten ausgegangen. 

Da nach einer Infektion sehr häufig Toxoplasma IgM Antikörper über Monate bis Jahre 

persistieren können, bedeutet in der Mehrzahl der Fälle der Nachweis von 

erregerspezifischen IgM Antikörpern nicht, dass eine aktive, für die Schwangerschaft 

relevante Toxoplasma-Infektion vorliegt. Bei Seren mit Toxoplasma IgM Antikörpern 

ermöglicht die Aviditätsbestimmung eine weitgehende Eingrenzung von frischen 

Primärinfektionen, da hochavide Toxoplasma IgG Antikörper einen länger zurückliegenden 

Infektionszeitpunkt voraussetzen. 

Während 1 bis 3 % der infizierten Neugeborenen unmittelbar nach der Geburt klinische 

Manifestationen aufweisen, treten bei etwa 80 % der subklinisch infizierten Neugeborenen 

teilweise schwere Spätschäden auf. Für die Diagnose asymptomatisch Infizierter kann der 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM als Suchtest im Rahmen des 

Neugeborenen Screening eingesetzt werden. Die Testung erfolgt dabei unter Verwendung 

der gebräuchlichen Filterpapiere mit eingetrockneten Blutproben (siehe spezielle 

Arbeitsanleitung für SERION ELISA classic Toxoplasma gondii neonatal). Der Nachweis 

von erregerspezifischen IgM Antikörpern bei Neugeborenen korreliert mit einer 

intrauterinen bzw. akuten Infektion des Kindes durch den betreffenden Erreger, da 

mütterliche IgM Antikörper aufgrund ihrer Größe von der Diffusion durch die Plazenta 

ausgeschlossen sind. Bei Toxoplasma gondii kann eine rechtzeitige Therapie infizierter 

Neugeborener Spätschäden weitgehend verhindern. 

Eine Toxoplasma-Infektion bis zu zwei Wochen vor Schwangerschaftsbeginn bewirkt eine 

sichere Immunität. Bei Planung einer Schwangerschaft ist es sinnvoll, eine serologische 

Untersuchung schon vor Schwangerschaftsbeginn durchzuführen. 

Wird unmittelbar nach dem Erkennen einer mütterlichen Primärinfektion therapiert, kann 

das Infektionsrisiko für den Fetus um 75 % verringert werden. 


DE

Nach natürlicher oder iatrogener Immunsuppression können latente Infektionen aktiviert 

werden. Große Bedeutung hat die Toxoplasma-Enzephalitis bei AIDS Patienten, da diese 

Erkrankung häufig die alleinige Todesursache bei dieser Patientengruppe darstellt. 

Pos: 8 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/T estprinzip/Testpri nzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_6.doc @ 21207 @ 1 

3 TESTPRINZIP SERION ELISA classic 

Der ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) ist ein immunologisches Verfahren, 

das sich insbesondere in der Infektionsserologie zur Erfassung von Antikörpern bewährt 

hat. Die Nachweisreaktion basiert auf der spezifischen Interaktion von Antikörpern und 

Antigenen. Zu diesem Zweck wurden die Teststreifen der Mikrotiterplatten des SERION 

ELISA classic mit spezifischen Antigenen von Infektionserregern zur Bindung der in der 

Patientenprobe vorhandenen Antikörper beschichtet. Weitere, mit Alkalischer 

Phosphatase markierte Sekundärantikörper detektieren die so gebildeten Immunkomplexe. 

Das Enzym katalysiert eine Reaktion, in deren Verlauf das farblose Substrat 

p-Nitrophenylphosphat in das farbige Produkt p-Nitrophenol umgewandelt wird. Die 

Signalstärke des Reaktionsprodukts ist proportional zur Antikörperkonzentration in der 

Probe und wird photometrisch erfasst. 

Pos: 9 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für mehr ere D okumente/Inhal t und Z usammensetzung/Inhal t und Z usammensetzung ( alle außer Bor,EBV,Hanta,Par vo, Coxi ella) @ 4\mod_1255342923549_6.doc @ 21223 @ 1 

deutsch 4

4 INHALT UND ZUSAMMENSETZUNG 

Testkomponenten Stück / 

Volumen 

Brechbare Mikrotiterstreifen mit je acht antigenbeschichteten Einzelkavitäten 

(insg. 96) MTP , 

1 Testrahmen. 

Das Beschichtungsmaterial ist inaktiviert. 

Standardserum (gebrauchsfertig) STD , 

Humanserum in proteinhaltigem Phosphatpuffer; 

negativ getestet für anti-HIV-Ak, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen) 

und anti-HCV-Ak; 

Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid; 

Farbstoff: Amaranth O. 

Negatives Kontrollserum (gebrauchsfertig) NEG , 

Humanserum in proteinhaltigem Phosphatpuffer; 

negativ getestet für anti-HIV-Ak, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen) 

und anti-HCV-Ak; 


Farbstoff: Lissamin-Grün V. 

Anti-Human IgA, IgG oder IgM Konjugat (gebrauchsfertig) APC , 

Gegen humanes IgG, IgA oder IgM gerichteter, polyklonaler Antikörper, 

konjugiert mit Alkalischer Phosphatase, stabilisiert in proteinhaltiger Lösung; 

Konservierungsmittel: 0,01 % Methylisothiazolon und 0,01 % Bromnitrodioxan. 

Waschlösungskonzentrat (ausreichend für 1000 ml) WASH , 

Natriumchlorid Lösung mit Tween 20 und 30 mM Tris/HCl, pH 7,4; 

Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid. 

Verdünnungspuffer DILB , 

Proteinhaltiger Phosphatpuffer mit Tween 20; 


Farbstoff: 0,01 g/l Bromphenolblau. 

Stopplösung STOP , 

1,2 N Natronlauge. 

Substrat (gebrauchsfertig) pNPP , 

Para-Nitrophenylphosphat in lösungsmittelfreiem Puffer; 

Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid. 

(Eine leichte Gelbfärbung des ungeöffneten Substrats ist möglich. 

Hieraus ergibt sich keine Qualitätsminderung!) 

Qualitätskontrollzertifikat mit Standardkurve und Wertetabelle INFO , 

(Quantifizierung der Antikörper in IU/ml bzw. U/ml). 

Pos: 10 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/Z usätzlich benötigte M aterialien/T 200 Zusätzlich benötigte M aterialien (für T oxo, M aser n, M umps, CM V, HSV, VZ V, R öteln) @ 5\mod_1255348778895_6.doc @ 21447 @ 1 


12 Stück 

2 x 2 ml 

2 ml 

13 ml 

33,3 ml 

2 x 50 ml 

15 ml 

13 ml 

2 Seiten 

DE

5 ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE MATERIALIEN 

- Übliche Laborausrüstung 

- Für den IgM Nachweis: SERION Rf-Absorbens (Best. Nr. Z200 (20 ml)) 

- Spektralphotometer für Mikrotiterplatten mit Filter, Wellenlänge 405 nm, 

empfohlene Referenzwellenlänge im Bereich von 620 nm - 690 nm (z. B. 650 nm) 

- Inkubator 37 °C 

- feuchte Kammer 

- Aqua dest. 

- Click-Clips (Best.-Nr. VT120) 

Pos: 11 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Lag erung und Hal tbar kei t/Lager ung und Haltbar keit @ 4\mod_1255343176800_6.doc @ 21239 @ 1 


6 LAGERUNG UND HALTBARKEIT 

Reagenz Lagerung Haltbarkeit 

Mikrotiterstreifen 

(mit Antigen 

beschichtet) 

Kontrollseren / 

Standardseren 

ungeöffnet 

nach Anbruch bei 2 – 8 °C in Gegenwart von 

Trockenmittel und wieder verschlossen gelagert 

Die unbenutzten Kavitäten sollen trocken und 

luftdicht im verschlossenen Aluminiumbeutel 

gelagert werden. 

nach Anbruch bei 2 – 8 °C 

Konjugat Gebrauchsfertige Lösung bei 2 – 8 °C 

Verdünnungspuffer ungeöffnet 

Kontaminationen sind u. a. durch den Gebrauch 

steriler Pipettenspitzen unbedingt zu vermeiden. 

nach Anbruch bei 2 – 8 °C 

Eingetrübte Lösungen bitte verwerfen. 

Waschlösung Konzentrat nach Anbruch bei 2 – 8 °C 

Gebrauchsverdünnung bei 2 – 8 °C 


Gebrauchsverdünnung bei Raumtemperatur 

Behälter für Gebrauchsverdünnung regelmäßig 

reinigen! Eingetrübte Lösungen bitte verwerfen. 

Substrat gebrauchsfertige Lösung bei 2 – 8 °C, 

lichtgeschützt gelagert 

Kontaminationen sind u. a. durch den Gebrauch 

steriler Pipettenspitzen unbedingt zu vermeiden. 

Bei stärkerer Gelbfärbung (Extinktion gegen 

Aqua dest. > 0,25 OD) bitte verwerfen. 

bis Verfallsdatum; 

Mindesthaltbarkeit: 

4 Wochen; 

Haltbarkeit bei 

sachgerechter 

Lagerung: bis zum 

Verfallsdatum 


24 Monate ab 

Herstellungsdatum 


28 Monate ab 



36 Monate ab 


24 Monate 


2 Wochen; 

1 Woche 


36 Monate ab 


Stopplösung nach Öffnung bei Raumtemperatur bis Verfallsdatum 

Pos: 12 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA 

classic/Testdurchführung/Überschrift: Durchführung @ 0\mod_1184679699953_6.doc @ 

2472 @ 1 

DE

7 DURCHFÜHRUNG DES SERION ELISA classic 

Pos: 13 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Allgemeine Hi nweise ELISA cl assic @ 4\mod_1255343318159_6.doc @ 21255 @ 2 

7.1 Allgemeine Hinweise 

Für die sachgemäße Anwendung der SERION ELISA classic sind ausschließlich die 

SERION ELISA classic Komponenten zu verwenden. Letztere können nicht durch 

Reagenzien anderer Hersteller ersetzt werden. Die Standard- und Kontrollseren der 

SERION ELISA classic sind chargenspezifisch für jeden Testkit optimal eingestellt und 

können nicht in anderen Chargen eingesetzt werden. Verdünnungspuffer, Waschlösung, 

Substratlösung und Stopplösung können mit allen SERION ELISA classic chargen- und 

kitunabhängig angewendet werden. 

Für jede Immunglobulinklasse gibt es drei verschiedene Konjugatkonzentrationen: 

NIEDRIG-, MITTEL- und HOCH-KONZENTRIERT. Die Einstufung der Konjugate erfolgt 

durch folgende Kennzeichnung auf dem Etikett: 

z.B. IgG + niedrig-konzentriertes IgG Konjugat 

IgG ++ mittel-konzentriertes IgG Konjugat 

IgG +++ hoch-konzentriertes IgG Konjugat 

Um die hohe Qualität unserer SERION ELISA classic zu gewährleisten, ist in seltenen 

Fällen der Einsatz von Sonderkonjugaten notwendig. Diese haben eine Sondercharge und 

sind nicht mit Symbol "+" gekennzeichnet. Sonderkonjugate sind nicht gegen andere 

Konjugate austauschbar. 

Bitte beachten Sie immer die Beschriftung der Etiketten! 

Unter Voraussetzung einer sachgerechten Lagerung sind alle Komponenten des SERION 

ELISA classic ungeöffnet bis zum angegebenen Verfallsdatum (siehe Etikett) verwendbar. 

Die Reagenzien sollen nicht über das Verfallsdatum hinaus benutzt werden. 

Die unsachgemäße Verdünnung der Reagenzien kann zum Verlust an 

Nachweisempfindlichkeit führen. 

Die Testreagenzien sollen während der Lagerung und Inkubation vor hellem Licht 

geschützt werden. Nach Gebrauch sind die Komponenten gut zu verschließen, um deren 

Austrocknung und Kontamination zu vermeiden. 

Der Verschlussbeutel für die Kavitäten der Mikrotiterplatte soll nur an der Schweißnaht 

aufgeschnitten werden, um ein Wiederverschließen zu gewährleisten. Bei Beschädigung 

sowie nach unsachgemäßem Verschließen des Verschlussbeutels zur Aufbewahrung der 

nicht benutzten Kavitäten sollen die Mikrotiterstreifen nicht mehr verwendet werden. 

Um Kontamination zu vermeiden, sollten immer aseptische Techniken zur Entnahme von 

Reagenzienaliquots angewendet werden. Zur Vermeidung verfälschter Ergebnisse darf die 

Pipettenspitze bei der Konjugatpipettierung keinesfalls den oberen Rand der Kavitäten 

berühren und benetzen. Beim Verschließen der Fläschchen ist darauf zu achten, wieder 

den entsprechenden, zur Flasche gehörenden Deckel einzusetzen. 


Die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse ist u. a. von der sorgfältigen Mischung der 

angesetzten Reagenzien abhängig. Aus diesem Grund sollen die Behältnisse von 

Kontrollseren und Konjugaten vor Entnahme gut geschüttelt werden. Auch die 

Probenverdünnungen sollen vor dem ersten Pipettierschritt mit einem Monomixer (z. B. 

Vortex) gut durchmischt werden. 

Weiterhin ist auf eine sorgfältige Pipettierung und die Einhaltung der vorgegebenen 

Inkubationszeiten und -temperaturen zu achten. Große Zeitdifferenzen zwischen der 

Pipettierung der ersten und der letzten Kavität bei der Zugabe von Proben- und 

Kontrollseren, Konjugat und Substrat führen zu unterschiedlichen Inkubationszeiten, 

welche die Präzision und Reproduzierbarkeit der Messwerte beeinflussen können. 

Nur die strikte Einhaltung der Arbeitsvorschrift gewährleistet korrekte Ergebnisse. 

Der SERION ELISA classic kann nur ausgewertet werden, wenn die chargenspezifischen 

Validitätswerte des im Kit enthaltenen Qualitätskontrollzertifikates erfüllt wurden. 

Korrektes Waschen verhindert Testunspezifitäten. Aus diesem Grund sollten die 

Gebrauchsanleitungen der verwendeten Waschgeräte befolgt werden. Wichtig sind die 

gleichmäßige Befüllung der Kavitäten der Flachbodenplatten mit Waschlösung und deren 

vollständige Entfernung, um unkontrollierbare Verdünnungseffekte auszuschließen. 

Schaumbildung ist in jedem Fall zu vermeiden! 

Die Beschriftung der Mikrotiterstreifen mit Kürzeln von Erreger und Antikörperklasse sollte 

nicht zerkratzt werden, um ein Verwechseln zu vermeiden. 

Pos: 14 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenvor ber. und Lager ung (für ALLE Err eger auß er Borreli a, CM V, FSM E, H SV,Masern,Mumps,R öteln,VZ V) @ 8\mod_1263998040982_6.doc @ 28428 @ 2 

7.2 Probenvorbereitung und Lagerung 

Lipämische, hämolytische sowie ikterische Proben (Serum oder Plasma) sollten nur unter 

Vorbehalt eingesetzt werden. Bakteriell kontaminierte Proben sollten nicht verwendet 

werden. Geeignete Untersuchungsmaterialien sind nach Standardlabortechniken 

gewonnene Seren oder Plasmen (EDTA, Citrat, Heparin). Die Proben dürfen nicht 

thermisch inaktiviert werden. 

classic/Testdurchführung/Kapitelüberschrift 0\mod_1184679414434_6.doc Pos: 15 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 2312 classic/Gültig @ 3 Probenverdünnung für alle Dokumente/ELISA 

@ 

7.2.1 Probenverdünnung 

Vor Testbeginn die Proben (V1) in Verdünnungspuffer (V2) verdünnen: 

Pos: 16 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/Toxoplasma: Probenver dünnung, T eil 1 @ 7\mod_1258450218172_6.doc @ 25877 @ 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG 

V1 + V2 = 1+100 je 10 µl Patientenserum 


zu je 1000 µl Verdünnungspuffer 

Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_6.doc @ 21287 @ 

Nach jeder Verdünnung und vor dem Pipettierschritt sollten die Proben mit einem 

Monomixer (z. B. Vortex) gut durchmischt werden, um eine homogene Lösung 

herzustellen. 

Pos: 18 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/Toxoplasma: Probenver dünnung, T eil 2 Überschrift @ 0\mod_1188812811112_6.doc @ 9359 @ 

DE

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM 

Pos: 19 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenver dünnung: nur für CM V, H SV, M asern, Mumps, Rötel n, T oxo und VZ V @ 0\mod_1190029473235_6.doc @ 10629 @ 

Rheumafaktor-Interferenz 

Rheumafaktor-Antikörper sind vorwiegend Autoantikörper der IgM Klasse, die bevorzugt 

an IgG Immunkomplexe binden. Der spezifische Nachweis von IgM Antikörpern kann 

durch diese Rheumafaktoren zu falsch-positiven Ergebnissen führen. Ferner besteht die 

Möglichkeit, dass bindungsschwächere erregerspezifische IgM Antikörper durch 

bindungsstärkere IgG Antikörper verdrängt werden. Ein IgM Nachweis kann dann falschnegativ 

ausfallen. Aus diesem Grund ist es erforderlich, die Proben für die IgM 

Bestimmung mit Rheumafaktor-Absorbens vorzubehandeln. (SERION Rf-Absorbens, 

Best.-Nr. Z200 (20 ml/100 Bestimmungen)). Die Rf-Absorption erfolgt durch Inkubation der 

Patientenprobe im Rf-Verdünnungspuffer über 15 Minuten bei Raumtemperatur oder über 

Nacht bei 4° C. Die Anwendung ist in einer speziellen Arbeitsanleitung beschrieben. 


Zunächst erfolgt eine 1+4 Verdünnung von Rheumafaktor-Absorbens (V1) mit 

Verdünnungspuffer (V2). 

V1 + V2 = V3 (1 + 4) je 200 µl Rf-Absorbens 


zu je 800 µl Verdünnungspuffer 

Nun werden die Patientenproben (V4) in diesem Rf-Verdünnungspuffer (V3) verdünnt: 

V4 + V3 = 1 +100 je 10 µl Patientenprobe 

zu je 1000 µl Rf-Verdünnungspuffer 


Nach jeder Verdünnung und vor dem Pipettierschritt sollten die Proben mit einem 

Monomixer (z. B. Vortex) gut durchmischt werden, um eine homogene Lösung 

herzustellen. 

Pos: 22 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenlager ung @ 4\mod_1255343526141_6.doc @ 21271 @ 3 

7.2.2 Probenlagerung 

Die Patientenproben sollten nicht länger als 7 Tage bei 2 – 8 °C aufbewahrt werden. Eine 

längere Lagerung der Proben ist bei ≤ -20 °C möglich. Mehrmaliges Auftauen und 

Wiedereinfrieren soll vermieden werden. Verdünnte Proben können bei 2 – 8 °C eine 

Woche aufbewahrt werden. 

Pos: 23 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 1 @ 4\mod_1255343795606_6.doc @ 21303 @ 233

7.3 Reagenzienvorbereitung 

Alle Testreagenzien müssen vor dem Testansatz auf Raumtemperatur erwärmt 

werden. 

7.3.1 Mikrotiterstreifen 

Die Teststreifen bzw. Kavitäten sind zusammen mit einem Trockenmittel verpackt. 

Nicht benötigte Teststreifen bzw. Kavitäten sollten wieder mit dem Trockenmittel im 

Aluminiumbeutel luftdicht eingeschlossen werden. 

7.3.2 Kontrollseren / Standardseren 

Kontroll- und Standardseren sind gebrauchsfertig und müssen nicht verdünnt 

werden. Bei jedem Testlauf müssen unabhängig von der Anzahl der eingesetzten 

Teststreifen Kontrollseren in Einfach-, Standardseren in Doppelbestimmung 

mitgeführt werden. 

Pos: 24 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/R eagenzienvorbereitung: Rf- Absorbens (für T este mit IgM-Nachweis) @ 0\mod_1184741119299_6.doc @ 2868 @ 

Kontrollseren nicht mit Rheumafaktor-Absorbens behandeln! 

Pos: 25 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 2 @ 4\mod_1255343884183_6.doc @ 21319 @ 33333 

7.3.3 Anti-Human IgA, IgG bzw. IgM AP-Konjugat (gebrauchsfertig) 

Konjugate sind innerhalb der jeweiligen Konjugatkonzentration und 

Immunglobulinklasse austauschbar. Kontaminationen der gebrauchsfertigen 

Konjugate sind u. a. durch den Gebrauch steriler Pipettenspitzen unbedingt zu 

vermeiden. 

7.3.4 Waschlösung 

Das Waschlösungskonzentrat (V1) ist im Verhältnis 1:30 mit Aqua dest. auf ein 

Endvolumen (V2) zu verdünnen. 

Beispiel: 

Waschlösungskonzentrat (V1) Endvolumen (V2) 


33,3 ml 1000 ml 

1,0 ml 30 ml 

7.3.5 Verdünnungspuffer für Proben (gebrauchsfertig) 

7.3.6 Substrat (gebrauchsfertig) 

Kontaminationen der gebrauchsfertigen Substratlösung sind u. a. durch den 

Gebrauch steriler Pipettenspitzen unbedingt zu vermeiden. 

7.3.7 Stopplösung (gebrauchsfertig) 


classic/Testdurchführung/Testablauf/Überschrift Testablauf @ 

0\mod_1180955922843_6.doc @ 732 @ 2 

DE

7.4 Übersicht - Testablauf 

Pos: 27 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/T establauf/Toxoplasma: Testablauf @ 7\mod_1258450336747_6.doc @ 25909 @ 




quantitativ 

Für den IgM Nachweis mit den Proben eine Rf-Absorption durchführen, siehe Punkt 7.2.1.; 

Inkubation 15 Minuten bei Raumtemperatur oder über Nacht bei 4°C. 

Pos: 28 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/T establ auf @ 4\mod_1255347017982_6.doc @ 21335 @ 

Probenverdünnung 1 

(Patientenproben) 

1+100 

Zugabe der verdünnten Proben und der 

gebrauchsfertigen Kontroll-/ Standardseren (100 µl) 

 

INKUBATION 60 Min./ 37 °C 

feuchte Kammer 

 

WASCHEN (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Zugabe der Konjugatlösung APC (100 µl) 

 



 

WASCHEN (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Zugabe der Substratlösung pNPP (100 µl) 

 



 

Zugabe der Stopplösung STOP (100 µl) 

 

EXTINKTIONSMESSUNG bei 405 nm 

1 Sonderverdünnungspuffer bei folgenden SERION ELISA classic: 

Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG, Parvovirus B19 IgM sowie Hantavirus Puumala IgG, IgM. 

Pos: 29 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/M anuelle Testdurchführ ung (für ALLE Erreg er auß er C oxiella) @ 5\mod_1255349441824_6.doc @ 21510 @ 2 

²Bei manueller Abarbeitung: 

Platte nach dem Waschvorgang auf Papiertüchern gründlich ausklopfen.

7.5 Manuelle Testdurchführung 

1. Erforderliche Anzahl Kavitäten in den Testrahmen einsetzen und Protokollblatt 

anlegen. 

2. Je 100 µl der verdünnten Proben bzw. der gebrauchsfertigen Kontrollen in die 

benötigten Kavitäten der Teststreifen pipettieren. Eine Kavität für den 

Substratleerwert freilassen, z. B.: 

IgG/IgM quantitativ 

Antigen-Kavitäten 

Kavität A1 Substratleerwert 

Kavität B1 Negative Kontrolle 

Kavität C1 Standardserum 

Kavität D1 Standardserum 

Kavität E1 Patient 1.... 

3. Probeninkubation für 60 Minuten (+/- 5 Min) bei 37 °C (+/- 1 °C) in der feuchten 

Kammer. 

4. Am Ende der Inkubationszeit die Kavitäten waschen (mit Waschgerät oder 

manuell): 

- Inkubationsflüssigkeit aus den Kavitäten absaugen oder ausschütten 

- in jede Kavität 300 µl Waschlösung füllen 

- Waschlösung absaugen oder ausschütten 

- Vorgang 3 x wiederholen (also insgesamt 4 x waschen) 

- die Platte auf Papiertüchern ausklopfen 

5. Konjugatzugabe 

100 µl des gebrauchsfertigen IgG/IgM Konjugates in die entsprechenden Kavitäten 

pipettieren (ohne Substratleerwert). 

6. Konjugatinkubation für 30 Minuten (+/- 1 Min)* bei 37 °C (+/- 1 °C) in der feuchten 

Kammer. 

7. Am Ende der Inkubationszeit die Kavitäten waschen (wie oben). 

8. Substratzugabe 

Je 100 µl gebrauchsfertige Substratlösung in alle Kavitäten (auch Substratleerwert) 

pipettieren. 

9. Substratinkubation für 30 Minuten (+/- 1 Min)* bei 37 °C (+/- 1 °C) in der feuchten 

Kammer. 

10. Stoppen der Reaktion 

Je 100 µl Stopplösung in alle Kavitäten pipettieren, Mikrotiterplatte zum Mischen 

leicht schütteln. 

11. Extinktionsmessung 

Innerhalb 60 Minuten bei 405 nm gegen den Substratleerwert messen, 

Referenzwellenlänge im Bereich zwischen 620 nm und 690 nm (z. B. 650 nm). 

_____________________ 

* Bitte beachten Sie, dass unter speziellen Arbeitsbedingungen laborinterne Anpassungen 

der Inkubationszeiten notwendig sein können. 


DE

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_6.doc @ 21541 @ 2 

7.6 Automatische Testdurchführung 

Die SERION ELISA sind validiert für die Anwendung auf Immunomat TM sowie auf DYNEX 

DSX ® und DS2 ® und geeignet für die Anwendung auf baugleichen Automaten. Die 

automatische Prozessierung erfolgt analog zur manuellen Bearbeitung. Bitte beachten Sie, 

dass unter speziellen Arbeitsbedingungen laborinterne Anpassungen der Substratinkubationszeiten 

notwendig sein können. 

Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Positi vkontroll e / Richtigkeitskontroll e @ 8\mod_1260286311409_6.doc @ 27528 @ 2 

7.7 Positivkontrolle / Richtigkeitskontrolle 

Zur periodischen Überprüfung der Untersuchungsmethode im Rahmen des laborinternen 

Qualitätsmanagements empfehlen wir die Anwendung unserer SERION ELISA control. 

Die Positivkontrollen dienen als Richtigkeitskontrollen sowie zur Überprüfung der Präzision 

der angewandten Methode. Der Gebrauch ist in einer separaten Arbeitsanleitung 

beschrieben. 

Pos: 32 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Avi ditätsbestimmung (für CM V, Rötel n, T oxopl asma) @ 8\mod_1260287019398_6.doc @ 27558 @ 2 

7.8 Aviditätsbestimmung 

Der SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG ist in Kombination mit dem 

korrespondierenden Aviditätsreagenz zur Aviditätsbestimmung von erregerspezifischen 

IgG Antikörpern geeignet. Die Aviditätsbestimmung dient zur Unterstützung bei der 

Differenzierung zwischen akuten und zurückliegenden Infektionen insbesondere im 

Rahmen der Untersuchungen während der Schwangerschaft. Die Testdurchführung ist in 

einer speziellen Arbeitsanleitung beschrieben. Eine Excel-basierte Auswertehilfe 

unterstützt die Berechnung der SERION Aviditätsindizes. 

Pos: 33 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/N eonataldi agnosti k (für CM V, Rötel n, T oxopl asma) @ 8\mod_1260287082350_6.doc @ 27573 @ 2 

7.9 Neonataldiagnostik 

Der SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM wurde auch für den Nachweis von 

erregerspezifischen IgM Antikörpern in getrockneten Blutproben von Neugeborenen 

validiert. Ein Neugeborenen-Screening kann mit den üblichen Dried Blood Spots (DBS) 

unter Verwendung von Filterpapierblättchen mit einem Durchmesser von 1/8 inch bzw. 

3,2 mm erfolgen, die mit Fersenblut von Neugeborenen getränkt wurden. Die 

Testdurchführung ist in einer speziellen Arbeitsanleitung beschrieben. 

Pos: 34 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: TESTAU SWER TUNG + Erreg er @ 1\mod_1197038305478_6.doc @ 11384 @ 1 


8 TESTAUSWERTUNG 


Pos: 35 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Ei n-Punkt-Quantifizi erung @ 4\mod_1255348099107_6.doc @ 21399 @ 2 

8.1 Ein-Punkt-Quantifizierung nach der 4PL-Methode 

Die größtmögliche Genauigkeit der Zuordnung von Messsignalen zu quantitativen Werten 

bieten nichtlineare Funktionen, die sigmoidale Kurven direkt, ohne jede weitere 

Transformation, der OD-Skala anpassen. Die Konzentrationsbestimmung der Antikörper 

im SERION ELISA classic erfolgt nach dem “4-Parameter logistic-log-Modell“ (4PL), 

dessen mathematische Funktion durch folgende Formel beschrieben wird: 

OD = A + 

1 + e 


D - A 

B(C - ln Konz.) 

Die Parameter A, B, C und D geben den Kurvenverlauf exakt wieder und definieren 

1. die untere Asymptote Parameter A 

2. die Steigung der Kurve im Wendepunkt Parameter B 

3. den Wendepunkt der Kurve Parameter C 

4. die obere Asymptote Parameter D 

Die Institut Virion\Serion GmbH (Würzburg) ermittelt für jede Kitcharge die Standardkurven 

in mehrfachen Testläufen unter Einhaltung optimaler Bedingungen. Auf diese Weise 

entfällt die kosten- und zeitintensive Konstruktion der Standardkurve durch den Anwender. 

Zur Auswertung der Testläufe wird jedem SERION ELISA classic ein chargenspezifisches 

Qualitätskontrollzertifikat mit Standardkurve und Wertetabelle beigelegt. Die Software 

SERION evaluate sowie die Excel-basierte Auswertehilfe SERION activity werden auf 

Anfrage gerne zur Verfügung gestellt. 

Zum Ausgleich von Testschwankungen und um die Qualität des Testlaufes zu überprüfen, 

wird das so genannte Standardserum mitgeführt. Diesem Standardserum werden in der 

Qualitätsendkontrolle ein Sollwert sowie ein Gültigkeitsbereich zugeordnet, innerhalb 

dessen Grenzen eine sichere und zuverlässige Bewertung der Testergebnisse garantiert 

wird. 

Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Testgültig kei tskriterien @ 4\mod_1255348317229_6.doc @ 21431 @ 2 

DE

8.2 Testgültigkeitskriterien 

- Der Substratleerwert sollte einen OD-Wert < 0,25 aufweisen. 

- Die negative Kontrolle muss in der Testauswertung als negativ bewertet werden. 

- Bei quantitativen SERION ELISA classic muss der OD-Mittelwert des 

Standardserums nach Abzug des Substratleerwertes innerhalb des 

Gültigkeitsbereiches liegen, welcher auf dem chargenspezifischen 

Qualitätskontrollzertifikat angegeben ist. 

- Die OD-Werte des Standardserums dürfen nicht mehr als 20 % differieren. 

Sind diese Kriterien nicht erfüllt, ist der Testlauf ungültig und muss wiederholt werden. 

Pos: 37 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Auswertung: Ü berschrift @ 0\mod_1180968661538_6.doc @ 968 @ 2 

8.3 Auswertung SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 

Pos: 38 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/T oxopl asma/T oxopl asma: Auswertung @ 7\mod_1258450389511_6.doc @ 25925 @ 

Die Angabe der Antikörperaktivität in IU/ml (Internationale Units/ml) bezieht sich auf den 

zweiten Internationalen Standard für Toxoplasma gondii (1980) mit 2000 IU pro Ampulle 

für den SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG. Für die Quantifizierung des 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM wurde der dritte Internationale Standard 

für Toxoplasma gondii (1994) zugrunde gelegt, bei dem auch ein Gehalt für IgM Antikörper 

definiert ist (3000 U/Ampulle). Dieser internationale Standard wurde jedoch bisher nicht 

anerkannt bzw. akzeptiert, da eine allgemeine Standardisierung bei der Bestimmung von 

IgM Antikörpern noch nicht realisiert werden konnte. Die Testergebnisse beim SERION 

ELISA classic Toxoplasma gondii IgM werden deshalb mit U/ml bewertet. 

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Nichtautomatisierte Auswertung @ 4\mod_1255348011764_6.doc @ 21383 @ 3 

8.3.1 Nichtautomatisierte Auswertung 

Zur Auswertung der Testläufe wird jedem SERION ELISA classic ein chargenspezifisches 

Qualitätskontrollzertifikat mit Standardkurve und Wertetabelle beigelegt. Der 

Substratleerwert (blank) muss vor den Auswertungen von allen Messergebnissen 

abgezogen werden. 

Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Testauswertung: M ethode 1 (für all e T ests auß er T etanus & Di phtherie) @ 5\mod_1255349684243_6.doc @ 21526 @ 

Methode 1: Qualitative Auswertung 

Zur Festlegung des cut-off Bereiches in OD multipliziert man den Mittelwert der 

gemessenen OD des Standardserums mit dem angegebenen Zahlenwert auf dem 

Qualitätskontrollzertifikat (siehe Formeln für spezielle Auswertesysteme), z. B.: 

OD = 0,502 x MW(STD) bei oberer cut-off Grenze 

OD = 0,352 x MW(STD) bei unterer cut-off Grenze 

Wird beispielsweise ein Extinktionmittelwert des Standardserums von OD 0,64 gemessen, 

ergibt sich ein cut-off Bereich von OD 0,225 bis 0,321. 


Methode 2: 

Pos: 41 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Methode 2 (für alle T ests) @ 4\mod_1255348201981_6.doc @ 21415 @ 

Stufenlose Bestimmung der Antikörperaktivitäten mittels Standardkurve: 

Testschwankungen, die von Tag zu Tag sowie von Labor zu Labor auftreten können, so 

genannte Interassay-Varianzen, werden durch Multiplikation des aktuellen Messwerts der 

Patientenproben mit dem Korrekturfaktor F ausgeglichen: 

F = 

OD-Sollwert (des Standardserums) 


OD-Tageswert (des Standardserums) 

Dieses Verfahren ist notwendig, um das aktuelle Testniveau des Anwenders an die 

chargenspezifische Standardkurve anzugleichen bzw. zu normalisieren. Auf diese Weise 

werden Tagesschwankungen korrigiert. 

1. Mittelwert aus den beiden Extinktionswerten des Standardserums bilden und 

prüfen, ob der ermittelte Wert im angegebenen Gültigkeitsbereich liegt. 

2. Berechnung des Faktors F: Der angegebene Sollwert des Standards wird durch den 

Mittelwert der Extinktion des Standardserums geteilt: 

F = Sollwert Extinktion Standardserum / Mittelwert Extinktion Standardserum. 

3. Alle Messwerte der Patientenproben werden mit F multipliziert. 

4. Über die korrigierten Messwerte können anhand der Standardkurve 

Antikörperaktivitäten in IU/ml bzw. U/ml abgelesen werden. 

Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_6.doc @ 21351 @ 3 

DE

8.3.2 Automatische Testauswertung mit der Software SERION evaluate 

Durch Eingabe der vier Parameter und des Sollwertes des Standardserums werden 

Antikörperaktivitäten nach Prozessierung und Messung des SERION ELISA classic durch 

das Auswerteprogramm SERION evaluate errechnet. 

Falls ein Wert außerhalb des Gültigkeitsbereiches liegt, werden folgende 

Fehlermeldungen in englischer Sprache angezeigt: 

„Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” bzw. 

„Standard values differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.” 

In diesen Fällen ist der Testlauf ungültig und muss wiederholt werden. 

Die vier Kurvenparameter und der Sollwert müssen nur bei Chargenwechsel geändert 

werden (Parameter und Sollwert sind auf der Wertetabelle angegeben). Die korrekte 

Eingabe dieser chargenspezifischen Daten kann anhand der dem Standardserum 

zugeordneten Aktivität (in IU/ml bzw. U/ml) überprüft werden. Der erhaltene Mittelwert der 

Antikörperaktivität muss mit der auf dem chargenspezifischen Qualitätskontrollzertifikat 

angegebenen Bewertung übereinstimmen. Eine Messwertkorrektur erfolgt automatisch. Im 

Ausdruck der Messergebnisse erscheint: 

Pos: 43 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Quantifi zierungsgrenzen @ 6\mod_1258098664276_6.doc @ 24398 @ 2 

8.4 Quantifizierungsgrenzen 


Probenbezeichnung 

OD-Wert 

IU/ml bzw. U/ml 

Bewertung 

Die Quantifizierungsgrenzen sind auf dem Kontrollzertifikat des SERION ELISA classic 

angegeben. Im Rahmen der Leistungsbewertungsstudie wurde die Verdünnungslinearität 

über diesen Bereich nachgewiesen. Sollten Patientenproben Messwerte oberhalb dieses 

Bereichs erzielen, können die Proben in einer höheren Verdünnung analysiert werden. Die 

erhaltenen Antikörperkonzentrationen sind dann mit dem zusätzlichen Verdünnungsfaktor 

zu multiplizieren. 

Pos: 44 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Grenzwertber eich ( für T este mehrerer Ig-Klassen) @ 9\mod_1276070736543_6.doc @ 32153 @ 2 

8.5 Grenzwertbereiche 

Die Grenzwertbereiche der SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM sind auf 

den Qualitätskontrollzertifikaten angegeben und kennzeichnen die Bereiche grenzwertiger 

Messergebnisse. Die Bewertung einer Patientenprobe unterhalb des Grenzwertbereichs 

charakterisiert ein negatives Testergebnis; die Bewertung einer Patientenprobe oberhalb 

des Grenzwertbereichs wird als positives Testergebnis interpretiert. Im Falle eines 

grenzwertigen Ergebnisses ist keine sichere Bewertung der Patientenprobe möglich. In 

einem solchen Fall sollte der Test parallel mit einer, im Abstand von ein bis zwei Wochen 

entnommenen, neuen Serumprobe (Serumpaar) wiederholt werden. 

Pos: 45 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/T oxopl asma/T oxopl asma: Gr enzwertbereich - Z usatz @ 9\mod_1312357599387_6.doc @ 36018 @

Der SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM sollte mit dem angegebenen 

Grenzwertbereich von 300 – 350 U/ml angewendet werden, kann aber auch mit einem 

alternativen, höheren Grenzwertbereich von 450 – 540 U/ml bewertet werden, welcher die 

Erfassung von persistierenden IgM Antikörpern mit niedriger Aktivität weitgehend 

vermeidet. Für die Verwendung eines höheren Grenzwertbereiches spricht, dass schon 

wenige Tage nach der Infektion IgM Antikörper gegen Toxoplasma gondii nachweisbar 

sein können, deren Aktivität schnell ansteigt. Darüber hinaus werden bei sehr vielen 

Patienten persistierende, IgM Antikörper mit niedriger Aktivität beobachtet. Die 

Wahrscheinlichkeit, dass bei einem Serum mit niedrigem IgM Antikörpergehalt bei 

Verwendung eines höheren Grenzwertbereiches eine akute oder bereits abklingende, 

wenige Wochen zurückliegende Infektion vorliegt, ist daher nicht übermäßig hoch, kann 

jedoch auch nicht ausgeschlossen werden. Durch die weniger sensitive 

Grenzwerteinstellung verlängert sich außerdem der Zeitraum zwischen einer Toxoplasma 

gondii Infektion und der Möglichkeit zur Detektion erster IgM Antikörper, so dass sehr 

frische Infektionen unter Umständen nicht erkannt werden. Die Anwendung des 

niedrigeren Grenzwertes von 300 bis 350 U/ml ist daher zu bevorzugen (Lappalainen und 

Hedman, 2004). Daraus ergeben sich zwangsläufig mehr positive IgM Resultate, die 

anschließend durch weitere Untersuchungen wie z. B. durch die Bestimmung der IgG 

Antikörperavidität, als akute oder zurückliegende Infektion abgeklärt werden müssen. 

Pos: 46 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Interpretation der Ergebnisse @ 0\mod_1190013774869_6.doc @ 9938 @ 2 

8.6 Interpretation der Ergebnisse 

Pos: 47 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/T oxopl asma/T oxopl asma: Interpr etation der Ergebnisse @ 7\mod_1258450401416_6.doc @ 25957 @ 

Für die serologische Untersuchung von Schwangeren wird eine Stufendiagnostik 

empfohlen (Robert Koch Institut). Als Suchtest kann der SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgG eingesetzt werden. Ein negatives Ergebnis im SERION ELISA 

classic Toxoplasma gondii IgG (

ei 30 dieser 266 Schwangeren korrelierte der Nachweis der IgM Antikörper mit einer 

Primoinfektion. Toxoplasma IgM Antikörper können über mehrere Jahre persistieren. 

Weiterhin ist zu beachten, dass durch eine polyklonale Stimulierung (z. B. durch Epstein 

Barr Virus) ebenfalls positive Toxoplasma IgM Befunde resultieren können, die nicht 

Ausdruck einer frischen Infektion sind. 

Im Rahmen der Schwangerschaftsvorsorge bietet sich hier die Aviditätstestung der IgG 

Antikörper an. Da sie leicht durchführbar ist, sollten alle Schwangerenseren getestet 

werden, bei denen sich Toxoplasma IgM Antikörper nachweisen lassen, auch solche mit 

niedrigem Gehalt. Die Sicherheit, keine Primoinfektion zu übersehen, wird damit erhöht. 

Im Ablauf der Immunreaktion kommt es im Allgemeinen zur zeitabhängigen deutlichen 

Zunahme der durchschnittlichen Antikörperaffinität (Affinitätsreifung). Hochavide IgG 

Antikörper belegen deshalb einen länger zurückliegenden Infektionszeitpunkt. Kurz 

zurückliegende Primärinfektionen zeichnen sich dagegen durch das Auftreten von IgG 

Antikörpern mit niedriger Avidität aus. 

Die Ergebnisse sollten entsprechend der folgenden Tabelle (Robert Koch Institut) beurteilt 

werden: 

IgG IgM IgG-AVIDITÄT WAHRSCHEINLICHES ERGEBNIS 

POSITIV NEGATIV ---------- INAKTIVE, LATENTE INFEKTION 

POSITIV POSITIV HOCH ABKLINGENDE ODER 

LATENTE (INAKTIVE) INFEKTION 

POSITIV POSITIV GERING AKUTE INFEKTION MÖGLICH, DESHALB SIND 

WEITERE ABKLÄRUNGSVERFAHREN BZW. 

VERLAUFSKONTROLLEN ERFORDERLICH 

Pos: 48 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Refer enzbereiche gesunder Pr obanden @ 8\mod_1258644290978_6.doc @ 26748 @ 2 

8.7 Referenzbereiche gesunder Probanden 

Pos: 49 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/T oxopl asma/T oxopl asma: R eferenzbereich g esunder Probanden @ 8\mod_1259154344404_6.doc @ 27333 @ 

Die Untersuchung von Seren unselektierter Blutspender aus dem süddeutschen Raum mit 

den SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG ergab folgende Verteilung: Von 50 

untersuchten Blutspenderseren wurden 31 (62 %) mit dem SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgG positiv bewertet, 19 Seren (38 %) lieferten einen negativen 

Befund. Diese Verteilungen decken sich mit den Literaturangaben, denen zufolge die 

Seroprävalenz in der Bevölkerung in Abhängigkeit von den Ernährungsgewohnheiten und 

dem Alter in einem sehr weiten Bereich liegen kann. Die Altersverteilung der Blutspender 

und deren Ernährungsgewohnheiten sind nicht bekannt. 

Pos: 50 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Leistungsmer kmale @ 0\mod_1184676089844_6.doc @ 2101 @ 1 


9 LEISTUNGSMERKMALE 

Pos: classic/Leistungsmerkmale/Kapitelüberschrift: 0\mod_1190013251494_6.doc 51 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 9923 classic/Gültig @ 2 Sensitivität für alle Dokumente/ELISA 

und Spezifität @ 

9.1 Sensitivität und Spezifität 

Pos: 52 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/T oxopl asma/T oxopl asma: Sensiti vität und Spezifität @ 7\mod_1258451069945_6.doc @ 25989 @ 

Zur Berechnung der Leistungskenndaten wurden in einer externen Studie am SERION 

ELISA classic Toxoplasma gondii IgG 450 Seren von Patienten bzw. gesunden Personen 

im Vergleich zu einem indirekten Immunfluoreszenztest untersucht. Dabei ergaben sich 

eine Sensitivität von 98,2 % und eine Spezifität von 99,4 %. 

Eine interne Studie am SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG mit 1000 Seren von 

Schwangeren, bei der als Referenztest ebenfalls ein indirekter Immunfluoreszenztest und - 

im Fall von diskrepanten Ergebnissen - der Sabin-Feldman-Test eingesetzt wurden, ergab 

eine Sensitivität von 97,8 % und eine Spezifität von 99,8 %. 

In einer externen Studie am SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM wurden 

insgesamt 256 Seren, darunter 104 positive, zur Bestimmung der Sensitivität und 

Spezifität im Vergleich zu zwei kommerziell erhältlichen IgM ELISA geprüft (Firma A und 

Firma B). Die positiven IgM Seren wurden mit dem Toxoplasma IgM Test der Firma A 

selektiert. 

Bei Anwendung eines Grenzwertbereichs von 450 bis 540 U/ml wurden 19 positive Seren 

nicht erfasst, darunter sieben, die möglicherweise von frischen Erstinfektionen stammten. 

Bei dieser Auswertung wies der SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM im 

Vergleich zum Toxoplasma IgM Test der Firma B eine höhere Sensitivität auf. Dieser 

Toxoplasma IgM Test der Firma B stufte von den 104 positiven Seren 28 negativ ein. 

Mit dem Grenzwertbereich von 450 bis 540 U/ml ergab sich beim SERION ELISA 

gegenüber dem Toxoplasma IgM Test der Firma A eine Spezifität von 98,6 %. 

Bei Anwendung eines Grenzwertbereichs von 300 bis 350 U/ml wurden 11 positive Seren 

nicht erkannt. Der klinische Hintergrund und weitere Untersuchungen ergab nur bei zwei 

dieser Patienten eine mögliche akute Erstinfektion, die anderen neun Resultate wurden 

als persistierende oder unspezifische IgM Antikörper charakterisiert. In Bezug auf 

diagnostisch relevante Erstinfektionen errechnet sich eine Sensitivität von 97,8 %. Die 

Spezifität gegenüber dem Test der Firma A wurde mit 95,7 % bestimmt. 

Vom Autor der externen Studie wurde die höchste Effizienz des SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgM für den Grenzwert von 300 bis 350 U/ml ermittelt. 

In einer internen Leistungsbewertungsstudie am SERION ELISA classic Toxoplasma 

gondii IgM wurde ein Serumpanel aus 86 Seren, darunter 29 positive, zur Bestimmung der 

Sensitivität im Vergleich zu zwei kommerziell erhältlichen IgM ELISA geprüft (Firma C und 

Firma B). Die positiven IgM Seren wurden mit dem Toxoplasma IgM der Firma C 

selektiert. Bei Anwendung des Grenzwertbereichs von 450 bis 540 U/ml wurden fünf 

positive Seren nicht erkannt, was einer Sensitivität gegenüber dem Toxoplasma IgM Test 

der Firma C von 82,8 % entspricht. Gegenüber dem gleichzeitig geprüften Toxoplasma 

IgM Test der Firma B ergab sich eine Sensitivität von 100 %. Zur Bestimmung der 

Spezifität wurden 372 Seren von Schwangeren und Blutspendern untersucht. Dabei ergab 


DE

sich beim Grenzwertbereich von 450 bis 540 U/ml eine Spezifität von 98,9 % bezogen auf 

den Toxoplasma IgM Test der Firma B. 

Leistungsmerkmale (externe Studien) Sensitivität Spezifität 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG 98,2 % 99,4 % 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM 97,8 % 95,7 % 

Bei der Berechnung wurden die grenzwertig eingestuften Seren nicht berücksichtigt. 

Der SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG ist für die Bestimmung der 

Immunitätslage bei Schwangeren geeignet. 

Bis zu einer Konzentration von 10 mg Hämoglobin/ml Serum war keine Beeinträchtigung 

der Testergebnisse zu beobachten. 

Die Untersuchung eines Serumpanels mit Antikörperaktivitäten gegen potentiell 

kreuzreaktive Parameter (Seren mit Autoantikörpern und Rheumafaktoren, EBV- und 

Syphilis-Infektion) erbrachte keinen Hinweis auf falsch positive Ergebnisse aufgrund von 

Kreuzreaktionen. 

Eine Infektion mit Epstein Barr Virus kann zu einer polyklonalen Stimulierung und damit zu 

falsch-positiven Toxoplasma IgM Befunden führen. Weiterhin ist zu beachten, dass 

Toxoplasma gondii IgM Antikörper über mehrere Monate und Jahre persistieren können. 

Pos: 53 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Präzisi on @ 0\mod_1184676568397_6.doc @ 2116 @ 2 


9.2 Präzision 

Pos: 54 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/T oxopl asma/T oxopl asma: Pr äzisi on @ 7\mod_1258451059977_6.doc @ 25973 @ 

Die intraserielle Präzision wurde mit unterschiedlich reaktiven Seren im Mehrfachansatz 

(n = 20) innerhalb einer antigenbeschichteten Platte ermittelt. Für die Bestimmung der 

interseriellen Präzision wurden Serumproben mit unterschiedlicher Reaktivität, in 10 

unabhängig voneinander durchgeführten Ansätzen, an 5 verschiedenen Tagen, geprüft. 

Standardabweichung 

Variationskoeffizient (VK %) = x 100 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG: 

Probe 

Mittlere 

Extinktion (OD) 

Intraassay 

(VK %) 


Mittelwert 

Mittlere 


Interassay 

(VK %) 

schwach pos. 0,559 8,3 0,535 14,4 

positiv 0,834 8,0 0,777 10,0 

stark positiv 1,653 5,6 1,500 12,8 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM: 

Probe 

Mittlere 


Intraassay 

(VK %) 

Mittlere 


Interassay 

(VK %) 

schwach pos. 0,302 5,1 0,202 9,9 

positiv 0,938 4,8 0,936 6,5 

stark positiv 1,146 5,3 1,142 5,8 

Pos: 55 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_6.doc @ 21189 @ 122 

DE

10 SICHERHEITSMASSNAHMEN 

10.1 Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen 

Der SERION ELISA classic ist nur für die Anwendung durch Fachpersonal vorgesehen, 

welches die Arbeitstechniken einwandfrei beherrscht. 

Für die Handhabung der Testreagenzien und der Patientenproben gelten die anerkannten 

Laborregeln: 

- Die Testpackung enthält Verdünnungen humaner Seren. Obwohl alle eingesetzten 

Seren negativ auf anti-HIV-Ak, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen) und anti- 

HCV-Ak getestet wurden, müssen sie als potentiell infektiös betrachtet werden. 

- Nicht mit dem Mund pipettieren. 

- In Bereichen, in denen mit Testreagenzien oder mit Patientenproben gearbeitet wird, 

nicht essen, trinken oder rauchen. 

- Beim Umgang mit Testreagenzien und Patientenproben direkten Kontakt durch das 

Tragen von Laborkittel, Einweghandschuhen und Schutzbrille vermeiden. Hände 

anschließend gründlich reinigen. 

- Die Patientenproben und alle potentiell infektiösen Materialien sind nach der Testdurchführung 

zu dekontaminieren. 

- Die Reagenzien sind unzugänglich für Kinder aufzubewahren. 

- Stopplösung: 

10.2 Entsorgung 

Ätzend (C); R34: verursacht Verätzungen, 

Schutzbrille, Handschuhe und Laborkittel sind zu tragen. 

Bitte beachten Sie die jeweils geltenden gesetzlichen Vorschriften! 

Pos: 56 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Liter atur/Kapitelüberschrift: Liter atur @ 0\mod_1190013903728_6.doc @ 9954 @ 1 


11 LITERATUR 

Pos: 57 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Literatur /Toxoplasma: Literatur @ 9\mod_1312358151911_0.doc @ 36051 @ 

[1] Balsari, A. et al. (1980) ELISA for Toxoplasma antibody detection: a comparison 

with other serodiagnostic tests. J. Clin. Pathol. 33, 640. 

[2] Blatz, R. (2005) Gutachten zum SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM 

(quant.). Institut für Medizinische Mikrobiologie und Infektionsepidemiologie der 

Universität Leipzig. 

[3] Boniolo, A. et al. (1980) ELISA for Toxoplasma antibodies. In: „Immunoenzymatic 

assay techniques“, Malvano, R. ed., Nijhoff, M., Publ. 

[4] Hlobil, H. et al. (1992) Epidemiologie, Prophylaxe und Therapie bei Toxoplasma- 

Infektionen in der Schwangerschaft - eine kurze Übersicht. Klin. Lab., 687-93. 

[5] Janitschke, K. (1999) Pränatale Übertragung der Toxoplasmen von der Mutter auf 

das Kind Bundesgesundheitsblatt-Gesundheitsforschung-Gesundheitsschutz 42, 

548-52. 

[6] Janitschke, K. (1989) Toxoplasmose: Diagnostik im Rahmen der 

Mutterschaftsvorsorge. Diagnose&Labor 39, 24. 

[7] Jenum, P.A. et al. (1998) Incidence of Toxoplasma gondii infection in 35 940 

pregnant women in Norway and pregnancy outcome for infected women. J. Clin. 

Microbiol. 36, 2900. 

[8] Lappalainen, M. Hedman, K. (2004) Serodiagnosis of toxoplasmosis. The impact of 

measurement of IgG avidity. Ann Ist Super Sanita 40, 81-8. 

[9] Prince, H.E. et al. (2001) Simplified assay for measuring Toxoplasma gondii 

immunoglobulin G avidity. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 8, 904. 

[10] Robert-Koch-Institut (2007) Toxoplasmose – neue Fassung des RKI-Ratgebers 

Infektionskrankheiten – Merkblätter für Ärzte. Epidemiologisches Bulletin 42, 390-4. 

[11] Robert-Koch-Institut (2009) Toxoplasmose. RKI-Ratgeber Infektionskrankheiten – 

Merkblätter für Ärzte. 

[12] Van Loon, A. M. et al. (1980) Enzyme-linked immunosorbent assay for quantitation 

of Toxoplasma antibodies in human sera. J. Clin. Pathol. 33, 635. 

[13] Walls, K.W. et al. (1977) Use of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) 

and its microadaption for the serodiagnosis of toxoplasmosis. J. Clin. Microbiol. 5, 

273. 

[14] Welch, P.C. et al. (1980) Serologic diagnosis of acute lymphadenophatic 

toxoplasmosis. J. Inf. Dis. 142, 256. 


DE

Updates 

Please pay attention to the differences in comparison to the previous version. 

Current version Nr.: V 18.11/12-1 

Previous version: V 17.11/08-1 

Update in section: 5, 7.2.1 


CONTENTS 

1 INTENDED USE 

2 DIAGNOSTIC RELEVANCE 

3 TEST PRINCIPLE SERION ELISA classic 

4 KIT COMPONENTS 

5 MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

6 STORAGE AND STABILITY 

7 TEST PROCEDURE SERION ELISA classic 

7.1 Evidence of Deterioration 

7.2 Sample Preparation and Storage 

7.3 Preparation of Kit Reagents 

7.4 Overview - Test Procedure 

7.5 Manual Test Procedure 

7.6 Automated Test Procedure 

7.7 Positive Control / Accuracy Control 

7.8 Avidity Determination 

7.9 Neonatal Diagnostics 

8 TEST EVALUATION 

8.1 Single-Point Quantification with the 4PL Method 

8.2 Criteria of Validity 

8.3 Calculation SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 

8.4 Limits of Quantification 

8.5 Borderline Ranges 

8.6 Interpretation of Results 

8.7 Reference Range of healthy Individuals 

9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 

9.1 Sensitivity and Specificity 

9.2 Reproducibility 

10 SAFETY MEASURES 

10.1 Statements of Warning 

10.2 Disposal 

11 REFERENCES 

current version No.: V 18.11/12-1 

previous version: V 17.11/08-1 

EN 

EL EN 

CS PT

Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/U pdate/U pdate: Toxoplasma @ 9\mod_1312896808207_18.doc @ 36146 @ Pos: classic/Allgemeine @ 4\mod_1255336385816_18.doc 2 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ classic/Einleitung classic/Gültig 21165 @ für "Enzymimmunoassay" 

alle Dokumente/ELISA 


Enzyme-immunoassay for determination of human antibodies 

for in vitro diagnostic use 

Dokument/Bestellnummern/Toxoplasma: 0\mod_1188812439090_18.doc Pos: 3 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 9301 classic/Gültig @ Bestellnummern für nur ein @ 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG Order Nr.: ESR110G 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM Order Nr.: ESR110M 

Pos: classic/Allgemeine 0\mod_1177351044007_18.doc 4 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ 170 classic/Kapitelüberschrift classic/Gültig @ 1 für alle Dokumente/ELISA 

"Anwendungsbereich" @ 

1 INTENDED USE 


SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG and IgM tests are quantitative and 

qualitative immunoassays for the detection of human antibodies in serum or plasma 

directed against Toxoplasma gondii. The assays are recommended to determine the 

immune status and to differentiate acute from recent infections. The SERION ELISA 

classic Toxoplasma gondii IgM test is the initial assay for the detection of acute infections. 

IgM antibodies directed against Toxoplasma gondii might persist over a long time period. 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG test in combination with SERION ELISA 

classic Toxoplasma gondii avidity reagent (Order No.: B110AVID) allows the determination 

of IgG antibody avidity for the differentiation of acute from recent infections. SERION 

ELISA classic Toxoplasma gondii IgM test is suitable for newborn screening with dried 

blood spots (DBS). 


2 DIAGNOSTIC RELEVANCE 


Toxoplasma gondii, a eukaryote belonging to the group of Sporozoa is an obligatory 

intracellular parasite with a worldwide distribution. Typical for Sporozoa is the “flip-flop” 

between sexual (which only takes place in cats, the final host) and asexual reproduction. 

After oral uptake of parasites e.g. in contaminated food, the organism penetrates the gut 

and enters the reticuloendothelial system. Due to this blood borne dissemination 

Toxoplasma gondii is able to infect many different organs and tissues within the host. 

The prevalence of infection with Toxoplasma gondii in the normal population is closely 

correlated with age. Environmental and lifestyle also play an important role and may 

significantly influence the seroprevalence which, on average, increases by around 10 % 

per decade of life so that by 50 years of age some 50 % of the population has been 

exposed to Toxoplasma. 

About 50 % of infections with Toxoplasma gondii are inapparent while the remainder 

exhibit - after an incubation period of one to three weeks - only unspecific symptoms such 

as low fever, exhaustion, headache as well as muscle and joint pain. A minority of patients 

suffers from fever (up to 39 °C) and swelling of cervical lymph nodes. In 1 % of infected 

children and young adults complications such as myocarditis, meningitis or pneumonia are 

may present. 

After recovery, Toxoplasma gondii cells persist in infected tissues by forming cysts which 

are resistant to the attacks of the immune system. In immunocompetent individuals the 

latent infection does not reactivate, probably as a result of permanent stimulation of the 

english 2

host’s immune system by the presence of Toxoplasma antigens, a life-long immunity is 

induced. 

Screening for Toxoplasma infections during pregnancy, as part of the general 

precautionary investigations, is of vital importance. An infection at any stage during 

pregnancy may result in the transplacental transmission of the parasite to the fetus 

although the timing of such a transfer does have an effect on the clinical outcome for the 

fetus. 

1. Trimester 17 % (most often aborted, seldom severe damage to the unborn) 

2. Trimester 24 % (moderate or severe damage to the fetus ) 

3. Trimester 64 % (mild damage or damage appears later in life) 

The risk of an infection of the unborn child via transplacental transmission is limited to 

seronegative women who acquire a primary infection during pregnancy. In Germany the 

reported frequency is two to seven infected newborns per 1000 viable births. 

Since Toxoplasma IgM antibodies can persist for months or years after infection, the 

detection of pathogen-specific IgM antibodies during pregnancy is not a definitive 

indication of an active Toxoplasma infection. In sera where IgM is present, avidity testing 

allows the differentiation between a primary infection and a past infection as IgG 

antibodies with high avidity are evidence of past infection. 

While, immediately after birth, only 1 to 3 % of infected newborns show clinical signs of 

damage due to toxoplasmosis, up to 80 % of subclinically infected children will suffer from 

late damage and severe clinical manifestations. The SERION ELISA classic Toxoplasma 

gondii IgM is a useful tool for the screening of asymptomatically infected newborns. The 

test is carried out by using common filter paper with dried blood samples (see specific 

instructions for SERION ELISA classic Toxoplasma gondii neonatal). The detection of 

specific IgM antibodies in newborns correlates with an intrauterine or acute infection of the 

child since the diffusion of maternal antibodies through the placenta can be excluded due 

to the size of the antibodies. In the case of a Toxoplasmosa gondii infection early therapy 

of infected newborns can prevent much of the resultant damages. 

An infection with Toxoplasma gondii up to two weeks before the start of pregnancy 

provides protective immunity. It is advisable to determine the immune status when 

planning a pregnancy. 

When maternal primary infection is detected and subsequently eradicated by 

chemotherapy, the risk for transmission to the fetus is decreased by about 75 %. 

Reactivation of latent infections may follow natural or iatrogenic immune suppression. After 

suppression of the immune system, activation of latent infections has been observed. In 

AIDS patients, Toxoplasma encephalitis is of significant importance as the cause of death. 


english 3 

EN 

EL EN 

CS PT

3 TEST PRINCIPLE SERION ELISA classic 

The ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) is an immunoassay, which is 

particularly suited to the determination of antibodies in the field of infectious serology. The 

reaction is based on the specific interaction of antibodies with their corresponding antigen. 

The test strips of the SERION ELISA classic microtiter plate are coated with specific 

antigens of the pathogen of interest. If antibodies in the patient´s serum sample are 

present, they bind to the fixed antigen. A secondary antibody, which has been conjugated 

with the enzyme alkaline phosphatase, detects and binds to the immune complex. The 

colourless substrate p-nitrophenylphosphate is then converted into the coloured product 

p-nitrophenol. The signal intensity of this reaction product is proportional to the 

concentration of the analyte in the sample and is measured photometrically. 

Pos: 9 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für mehrere Dokumente/Inhalt und 

Zusammensetzung/Inhalt und Zusammensetzung (alle außer Bor,EBV,Hanta,Parvo, 

Coxiella) @ 4\mod_1255342923549_18.doc @ 21224 @ 1 

english 4

4 KIT COMPONENTS 

Test Components Pieces / 

Volume 

Break apart microtiter test strips each with eight antigen coated single wells, 

(altogether 96) MTP , 

1 frame. 

The coating material is inactivated. 

Standard serum (ready-to-use) STD , 

Human serum in protein containing phosphate buffer; 

negative for anti-HIV Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus surface antigen) and anti-HCV Ab; 

preservative: < 0.1 % sodium azide; 

colouring: Amaranth O. 

Negative control serum (ready-to-use) NEG , 

Human serum in protein containing phosphate buffer; 

negative for anti-HIV Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus surface antigen) and anti-HCV Ab; 


colouring: Lissamin Green V. 

Anti-human IgA, IgG or IgM conjugate (ready-to-use) APC , 

Anti-human IgA, IgG or IgM polyclonal antibody, 

conjugated to alkaline phosphatase, stabilised with protein stabilisation solution; 

preservative: 0.01 % methylisothiazolone, 0.01 % bromnitrodioxane. 

Washing solution concentrate (sufficient for 1000 ml) WASH , 

Sodium chloride solution with Tween 20 and 30 mM Tris/HCl, pH 7,4; 

preservative: < 0.1 % sodium azide. 

Dilution buffer DILB , 

Protein containing phosphate buffer with Tween 20; 


colouring: 0.01 g/l Bromphenol blue. 

Stopping solution STOP , 

1.2 N sodium hydroxide. 

Substrate (ready-to-use) pNPP , 

Para-nitrophenylphosphate in solvent free buffer; 

preservative: < 0.1 % sodium azide 

(Substrate in unopened bottle may have a slightly yellow coloring, which does not 

reduce the quality of the product!) 

Quality control certificate with standard curve and evaluation table INFO , 

(quantification of antibodies in IU/ml or U/ml). 


english 5 

12 pieces 

2 x 2 ml 

2 ml 

13 ml 

33,3 ml 

2 x 50 ml 

15 ml 

13 ml 

2 pages 

EN 

EL EN 

CS PT

5 MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

- common laboratory equipment 

- for the IgM detection: SERION Rf-Absorbent, order no. Z200 (20 ml) 

- photometer for microtitre plates with filter, wavelength 405 nm, 

recommended reference wavelength 620 nm - 690 nm (e.g. 650 nm) 

- incubator 37 °C 

- moist chamber 

- distilled water 

- Click-Clips (order no. VT120) 


classic/Lagerung und Haltbarkeit/Lagerung und Haltbarkeit @ 

4\mod_1255343176800_18.doc @ 21240 @ 1 

english 6

6 STORAGE AND STABILITY 

Reagent Storage Stability 

Microtiter strips 

(coated with antigen) 

Control sera / 

Standard sera 

unopened 

after opening at 2 – 8 °C in closed aluminum bag with 

desiccant 

Strips which are not used must be stored dry in the 

closed aluminum bag. 

english 7 

see expiry date; 

minimum shelf-life: 

four weeks; 

shelf-life in case of 

proper use and 

storage until expiry 

date 

after opening at 2 – 8 °C see expiry date; 

Conjugate ready-to-use solution at 2 – 8 °C 

Dilution buffer Unopened 

Avoid contamination e.g. by using sterile tips. 

after opening at 2 – 8 °C 

Discard cloudy solutions. 

Washing solution Concentrate after opening at 2 – 8 °C 

working dilution at 2 – 8 °C 

working dilution at room temperature 

Bottles used for the working dilution should be 

cleaned regularly. Discard cloudy solutions. 

Substrate ready-to-use solution at 2 – 8 °C, 

stored protected from light 

Avoid contamination e.g. by using sterile tips. 

Discard if solution turns yellow (extinction against 

aqua dest. > 0.25 OD). 

24 months as of 

production 



production 



production; 

24 months 


2 weeks; 

1 week 



production 

Stopping solution After opening at room temperature see expiry date 

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Überschrift: Durchführ ung @ 0\mod_1184679699953_18.doc @ 2473 @ 1 

EN 

EL EN 

CS PT

7 TEST PROCEDURE SERION ELISA classic 


7.1 Evidence of Deterioration 

Only use SERION ELISA classic reagents when using SERION ELISA classic 

immunoassays. The components must not be exchanged for reagents of other 

manufacturers. Standard and control sera of SERION ELISA classic immunoassays are 

defined exclusively for the test kit to be used and must not be used in other lots. Dilution 

buffer, washing solution, substrate and stop solution can be used for all SERION ELISA 

classic immunoassays irrespective of the lot and the test. 

There are three different conjugate concentrations for each immunoglobulin class: LOW, 

MEDIUM, HIGH. The classification is written on each label as follows: 

e.g. IgG + low concentrated IgG conjugate 

IgG ++ medium concentrated IgG conjugate 

IgG +++ high concentrated IgG conjugate 

In rare cases the use of special conjugate is necessary to guarantee consistent quality of 

our products. Special conjugates are produced in a separate lot and do not carry the “+” 

sign and are not exchangeable with other conjugates. 

Please pay close attention to information on labels! 

Unopened, all components of the SERION ELISA classic tests may, if stored accordingly, 

be used up to the expiry dates given on the labels. Reagents may not be used after date of 

expiry. 

Dilution or alteration of the reagents may result in a loss of sensitivity. 

Avoid exposure of reagents to strong light during storage and incubation. Reagents must 

be tightly closed after use to avoid evaporation and contamination. 

To open the aluminum bag of the microtiter plate please cut off the top of the marked side 

only, in order to guarantee proper reclosing. Do not use the strips if the aluminum bag is 

damaged or if the bag with remaining strips and desiccant was not properly reclosed. 

Use aseptic techniques when removing aliquots from the reagent tubes to avoid 

contamination. To avoid false positive results ensure not to contact or splash the top-walls 

of wells while pipetting conjugate. Take care not to mix the caps of the bottles and/or vials. 

Reproducibility of test results is dependent on thorough mixing of the reagents. Agitate the 

flasks containing control sera before use and also all samples after dilution (e.g. by using a 

vortex mixer). 

Be sure to pipette carefully and comply with the given incubation times and temperatures. 

Significant time differences between pipetting the first and last well of the microtiter plate 

english 8

when dispensing samples and control sera, conjugate or substrate can result in different 

pre-incubation times, which may influence the precision and reproducibility of the results. 

Optimum results can only be achieved if the instructions are strictly followed. 

The SERION ELISA classic immunoassay is only valid if the lot-specific validation criteria 

on the quality control certificate are fulfilled. 

Adequate washing avoids test unspecificities. Therefore, the washing procedure should be 

carried out carefully. All of the flat bottom wells should be filled with equal volumes of 

washing buffer. At the end of the procedure ensure that the wells are free of all washing 

buffer in order to avoid uncontrolled dilution effects. Avoid foaming! 

Take care not to damage the inscription (pathogen / antibody class) on the microtiter test 

strips during washing and aspiration to avoid confusion. 


7.2 Sample Preparation and Storage 

Lipaemic, hemolytic or icteric samples (serum or plasma) should only be tested with 

caution. Obviously contaminated samples should not be tested. Serum or plasma (EDTA, 

citrate, heparin) collected according to standard laboratory methods are suitable samples. 

Samples must not be thermally inactivated. 

Pos: 15 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Kapi tel überschrift Probenverdünnung @ 0\mod_1184679414434_18.doc @ 2313 @ 3 

7.2.1 Dilution of Samples 

Before running the test, patient samples (V1) must be diluted in dilution buffer (V2) as 

follows: 



V1 + V2 = 1+100 add 10 µl patient’s sample 

english 9 

each to 1000 µl dilution buffer 


After dilution and before pipetting into the microtiter plate the samples must be mixed 

thoroughly to prepare a homogenous solution. 


EN 

EL EN 

CS PT



Interference with rheumatoid factors 

Rheumatoid factors are autoantibodies mainly of the IgM class, which preferably bind to 

IgG immune complexes. The presence of non-specific IgM antibodies (rheumatoid factors) 

can lead to false-positive results in the IgM assay. Furthermore, the possibility exists, that 

weak-binding pathogen-specific IgM antibodies may be displaced by stronger-binding IgG 

antibodies leading to a false negative IgM result. Therefore it is necessary to pretreat 

samples with rheumatoid factor-absorbens prior to IgM detection (SERION RF-Absorbent, 

Order Nr.: Z200 (20 ml/100 tests)). Rf-absorption is performed by incubation of the 

patient’s sample in Rf-dilution buffer for 15 minutes at room temperature or over night at 

4 °C. The test procedure is described in a separate instruction manual. 


Before running the test, rheumatoid factor-absorbent (V1) must be diluted 1+4 in dilution 

buffer (V2). 

V1 + V2 = V3 (1 + 4) add 200 µl Rf-absorbent 

english 10 

each to 800 µl dilution buffer 

Patient’s samples (V4) must be diluted in this Rf-dilution buffer (V3): 

V4 + V3 = 1 +100 add 10 µl patient`s sample 

each to 1000 µl Rf-dilution buffer 


After dilution and before pipetting into the microtiter plate the samples must be mixed 

thoroughly to prepare a homogenous solution. 


7.2.2 Sample Storage 

The patient’s samples should not be stored for more than 7 days at 2 – 8 °C. Extended 

storage is possible at ≤ -20 °C. Avoid repeated freezing and thawing of samples. Diluted 

samples can be stored at 2 – 8 °C for one week. 


classic/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung, Teil 1 @ 

4\mod_1255343795606_18.doc @ 21304 @ 233

7.3 Preparation of Kit Reagents 

Bring all reagents to room temperature before testing. 

7.3.1 Microtiter Test Strips 

The microtiter test strips in frames are packed with a desiccant in an aluminum bag. 

Take unrequired cavities out of the frame and put them back into the aluminum bag. 

Close bag carefully to ensure airtight conditions. 

7.3.2 Control Sera / Standard Sera 

Control and standard sera are ready-to-use and must not be diluted any further. For 

each test run - independent of the number of microtiter test strips to be used - 

control and standard sera must be included. The standard sera should be set up in 

duplicate. 


Do not treat control sera with Rf-absorbent. 


7.3.3 Anti-human IgA, IgG or IgM AP-Conjugate (ready-to-use) 

Conjugates with the same concentration and of the same immunoglobulin class are 

interchangeable. Avoid contamination of ready-to-use conjugates e. g. by using 

sterile tips. 

7.3.4 Washing Solution 

Dilute washing buffer concentrate (V1) 1:30 with aqua dest. to a final volume of V2. 

Example: 

english 11 

Buffer concentrate (V1) Final volume (V2) 

33,3 ml 1000 ml 

1,0 ml 30 ml 

7.3.5 Dilution Buffer for Samples (ready-to-use) 

7.3.6 Substrate (ready-to-use) 

Avoid contamination of the ready-to-use substrate solution e. g. by using sterile tips. 

7.3.7 Stopping Solution (ready-to-use) 

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/Ü berschrift Testablauf @ 0\mod_1180955922843_18.doc @ 733 @ 2 

EN 

EL EN 

CS PT

7.4 Overview - Test Procedure 



english 12 



quantitative 

In case of IgM detection absorption of rheumatoid factor, see No. 7.2.1; 

Incubation 15 minutes at room temperature or over night at 4°C 

sample dilution 1 

(patient´s samples) 

1+100 

Pipette diluted samples and ready-to-use control / 

standard sera into the microtest wells (100 µl) 

 

INCUBATION 60 Min./ 37 °C 

moist chamber 

 

WASH (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Pipette conjugate solution APC (100 µl) 

 


moist chamber 

 

WASH (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Pipette substrate solution pNPP (100 µl) 

 


moist chamber 

 

Pipette stopping solution STOP (100 µl) 

 

READ EXTINCTION at 405 nm 

1 Special dilution buffers for the following SERION ELISA classic tests: 

Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG, Parvovirus B19 IgM and Hantavirus Puumala IgG, IgM 

2 For manual use: 

tap plate at the end of the wash procedure on paper towel.


7.5 Manual Test Procedure 

1. Place the required number of cavities in the frame and prepare a protocol sheet. 

2. Add each 100 µl of diluted sample or ready-to-use controls into the appropriate 

wells of microtiter test strips. Spare one well for substrate blank, e.g.: 

IgG/IgM quantitative 

well no. 

well A1 Substrate blank 

well B1 Negative Control 

well C1 Standard serum 

well D1 Standard serum 

well E1 Patient 1.... 

3. Sample incubation for 60 minutes (+/- 5 min) at 37 °C (+/- 1°C) in moist chamber 

4. After incubation wash all wells with washing solution (by automated washer or 

manually): 

- aspirate or shake out the incubation solution 

- fill each well with 300 µl washing solution 

- aspirate or shake out the washing buffer 

- repeat the washing procedure 3 times (altogether 4 times!) 

- dry by tapping the microtiter plate on a paper towel 

5. Addition of conjugate 

Add 100 µl of the ready-to-use IgG/IgM conjugate to the appropriate wells (except 

substrate blank) 

6. Conjugate incubation for 30 minutes (+/- 1 min)* at 37 °C (+/- 1 °C) in moist 

chamber. 

7. After incubation wash all wells with washing solution (see above) 

8. Addition of substrate 

Add 100 µl of ready-to-use substrate solution to each well (including well for 

substrate blank!) 

9. Substrate incubation for 30 minutes (+/- 1 min)* at 37 °C (+/- 1 °C) in moist 

chamber. 

10. Stopping of the reaction 

Add 100 µl stopping solution to each well, shake microtiter plate gently to mix. 

11. Read extinction 

Read optical desity (OD) within 60 minutes at 405 nm against substrate blank, 

reference wave length between 620 nm and 690 nm (e.g. 650 nm). 

_____________________ 

* Please note, that under special working-conditions internal laboratory adaptations of the 

incubation times may be necessary. 


english 13 

EN 

EL EN 

CS PT

7.6 Automated Test Procedure 

SERION ELISA are suited for processing on automats and evaluated for use with 

Immunomat TM as well as with DYNEX DSX ® and DS2 ® . The automated processing is 

performed analogous to manual use. Please note, that under special working-conditions 

internal laboratory adaptations of the incubation times may be necessary. 


7.7 Positive Control / Accuracy Control 

For the periodic verification of the test method, in order to fulfil the requirements of 

laboratory internal quality management systems, we recommend using SERION ELISA 

controls to determine precision and accuracy of SERION ELISA classic test runs. The use 

of SERION ELISA controls is described in specific instruction manuals. 


7.8 Avidity Determination 

The SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG test enables, in combination with the 

corresponding SERION ELISA classic Avidity Reagent, the avidity of pathogen specific 

IgG antibodies to be determined. The avidity determination is recommended to aid the 

differentiation between acute primary and previous infections particularly in serological 

investigation during pregnancy. The test procedure is described in a separate instruction 

manual. The Excel-based evaluation software tool SERION avidity supports the calculation 

of SERION avidity indices. 


7.9 Neonatal Diagnostics 

The SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM test has been evaluated for the 

detection of human pathogen specific IgM antibodies in neonatal blood samples. A 

newborn screening can be performed with the regular dried neonatal heel blood spots 

(DBS) on filter papers with a diameter of 1/8 inch (3.2 mm). The test procedure is 

described in a separate instruction manual. 


english 14

8 TEST EVALUATION 



8.1 Single-Point Quantification with the 4PL Method 

Optimised assignment of extinction signals to quantitative values is guaranteed by using 

non-linear functions, which adjust a sigmoide curve without any further transformation to 

OD-values. Determination of antibody concentrations with the SERION ELISA classic is 

carried out by the 4 parameter logistic-log-model (4 PL) which is ideal for exact curvefitting. 

It is based on the formula: 

OD = A + 

1 + e 

english 15 

D - A 

B(C - ln Conc.) 

The parameters A, B, C, and D are representative for the exact shape of the curve: 

1. lower asymptote parameter A 

2. slope of the curve parameter B 

3. turning point parameter C 

4. upper asymptote parameter D 

For each lot the standard curve is evaluated by Institut Virion\Serion GmbH (Würzburg, 

Germany) in repeated test runs under optimal conditions. Time consuming and cost 

intensive construction of the standard curve by the user is not necessary. 

For evaluation of antibody concentrations a lot specific standard curve as well as a lot 

specific evaluation table is included with each SERION ELISA classic test kit. The 

evaluation software SERION evaluate as well as the Microsoft ® Excel-based software tool 

SERION activity are available on request. 

To compensate for normal test variations and also for test run control a standard serum is 

used in each individual test run. For this control serum a reference value with a validity 

range is determined by the quality control of the producer. Within this range a correct 

quantification of antibody concentration is ensured. 


EN 

EL EN 

CS PT

8.2 Criteria of Validity 

- The substrate blank must be < 0.25 OD. 

- The negative control must produce a negative test result. 

- By use of quantitative SERION ELISA classic tests the mean OD-value (after 

subtraction of the substrate blank!) of the standard serum must be within the validity 

range, which is given on the lot specific quality control certificate. 

- The variation of OD-values of the standard serum may not be higher than 20 %. 

If these criteria are not met, the test is not valid and must be repeated. 


8.3 Calculation SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 


The determination of antibody activity in IU/ml (International Units/ml) for the SERION 

ELISA classic Toxoplasma gondii IgG test is referenced to the second International 

Standard for Toxoplasma gondii (1980) with 2000 IU per vial. The quantification of the 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM is based on the third International 

Standard for Toxoplasma gondii (1994), which has a declared IgM antibody content of 

3000 U per vial). This international standard has not, so far, been generally accepted since 

it has not been possible to set a general standard for the determination of IgM antibodies 

until now. Therefore the test results of the SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM 

test are given in U/ml. 


8.3.1 Non-automated Evaluation 

For the SERION ELISA classic test evaluation a lot-specific quality control certificate with 

standard curve and an evaluation table is included in the test kit so that the obtained OD 

values may be assigned to the corresponding antibody activities. The substrate blank must 

be substracted from all OD values prior to evaluation. 


s 

Method 1: Qualitative Evaluation 

To fix the cut-off ranges multiply the mean value of the measured standard OD with the 

numerical data of the quality control certificate (see special case formulas), e.g.: 

OD = 0.502 x MW(STD) with upper cut-off 

OD = 0.352 x MW(STD) with lower cut-off 

If the measured mean absorbance value of the standard serum is 0.64 OD, the range of 

the cut-off is in between 0.225-0.321 OD. 

english 16

Method 2: 


Continuous Determination of Antibody Activities using the Standard Curve 

So called interassay variations (day to day deviations and laboratory to laboratory 

deviations) are compensated by multiplication of the current measured value obtained with 

a patient’s sample with the correction factor F. This factor is calculated as follows: 

F = 

english 17 

OD-reference value (of standard serum) 

OD-current value (of standard serum) 

The procedure is necessary to adjust the current test level of the user with the lot-specific 

standard curve. First, daily deviations have to be corrected by calculating the correction 

factor F. 

1. The mean of the two OD-values of the standard serum has to be calculated and 

checked that it is within the given validity range. 

2. Calculation of the factor F: the given reference value is divided by the mean of the 

extinction of the standard serum: 

F = reference value extinction STD serum / mean value extinction STD serum. 

3. All measured values of patient’s samples are multiplied by F. 

4. Antibody activities in IU/ml or U/ml can be determined from the standard curve with 

the corrected values. 


EN 

EL EN 

CS PT

8.3.2 Automatic Test Evaluation with Software SERION evaluate 

After input of the four parameters and the reference value of the standard serum, antibody 

activities are calculated online from processed and measured SERION ELISA classic test 

runs by the evaluation software SERION evaluate. 

If the optical density of the standard is out of the validity range, the following message will 

appear. 

„Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” or 

„Standard values differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.” 

In these cases the test run is invalid and should be repeated. 

Parameters and reference value need to be changed only if there is a change of lot 

(evaluation table shows parameters and reference values). Correct input of the lot specific 

data can be checked on the basis of the standard serum activity (in IU/ml or U/ml) 

assigned to the standard serum. The calculated mean value of the units has to correspond 

to the unit value indicated on the lot specific certificate. There is an automatic correction of 

the measured values. In the standard version the printout displays the following: 


8.4 Limits of Quantification 

Sample code 

OD-value 

IU/ml or U/ml 

Evaluation 

The limits of quantification are specified on the quality control certificate of the SERION 

ELISA classic test. The linearity of dilution within this range has been demonstrated in 

comprehensive evaluation studies. In case a patient sample shows a test result above the 

upper limit of quantification, the sample may be tested at a higher dilution. The thereby 

determined antibody activity must be multiplied by the additional dilution factor. 


8.5 Borderline Ranges 

The borderline ranges of the SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM tests are 

specified on the quality control certificates and indicate the range for borderline test 

results. Values obtained, when testing a patient’s sample, which fall below this range 

indicate a negative test result; values above the borderline range are interpreted positive. 

In cases where the results are within the borderline range a definitive interpretation of the 

result is not possible. In such cases, the test should be repeated in parallel with a follow-up 

sample taken one to two weeks later (serum pair). 

Pos: 45 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/T oxopl asma/T oxopl asma: Gr enzwertbereich - Z usatz @ 9\mod_1312357599387_18.doc @ 36020 @ 

We recommend to use the SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM test with the 

indicated borderline range of 300 – 350 U/ml. Nevertheless, the assay can be evaluated 

with an alternative higher threshold of 450 – 540 U/ml in order to exclude the detection of 

persisting IgM antibodies with low activity. In fact, Toxoplasma gondii IgM antibodies rise, 

shortly after infection, to high levels. This would justify a higher borderline range from 450 

to 540 U/ml. Furthermore, infected patients often show a distinct level of IgM antibodies 

over a long time period. The high borderline interval minimizes the number of detected 

english 18

positive sera with persistent IgM antibodies and reduces the incidence of irrelevant 

positive events. However, the use of the lower borderline range from 300 to 350 U/ml in 

order to reduce the probability of missing a primary infection is to be preferred. 

(Lappalainen, M. and Hedman, K., 2004). As a consequence, more positive Toxoplasma 

gondii IgM results will be detected, which then have to be clarified and categorized as 

acute or previous infection by subsequent analysis, e.g. IgG avidity determination. 


8.6 Interpretation of Results 


The Robert Koch Institute recommends serological stage-diagnostics for pregnant women. 

SERION ELISA classic Toxoplasma IgG can be used as a screening test. Negative results with 

SERION ELISA classic Toxoplasma IgG (

8.7 Reference Range of healthy Individuals 


Testing of random blood donor sera, collected in the region of southern Germany, with the 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG test resulted in the following distribution. 

From 50 sera tested, 31 (62 %) were positive and 19 (38 %) tested negative. This result is 

in agreement with the published literature which reports that the seroprevalence in the 

general population, depending upon eating habits and age, is highly variable. The age 

distribution and eating habits of the blood donors participating in this trial are not known. 


9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift: Sensiti vität und Spezi fität @ 0\mod_1190013251494_18.doc @ 9925 @ 2 

9.1 Sensitivity and Specificity 


To determine the performance characteristics of the SERION ELISA classic Toxoplasma 

gondii IgG test, an external comparison study, utilizing sera from 450 patients and healthy 

individuals, was performed in parallel with an indirect immunofluorescence test. The 

results indicate a sensitivity of 98.2 % and specificity of 99.4 %. 

An internal study was also carried out using sera from 1000 pregnant women. An indirect 

immunofluorescence test was also used as the reference test and discrepant results were 

further tested in the Sabin-Feldman-Test to determine their true status. The results 

indicate a sensitivity of 97.8 % and specificity of 99.8 %. 

An external study, to determine the sensitivity and specificity of the SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgM test, utilizing a total of 256 sera, of which 104 were positive, was 

carried out using two commercially available IgM tests as comparison ( from company A 

and company B). The positive IgM sera were selected using the Toxoplasma IgM test from 

company A. 

The use of a borderline region between 450 and 540 U/ml resulted in 19 positive sera not 

returning a positive result, seven of which were potentially from acute infections. In this 

evaluation the SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM test demonstrated a higher 

sensitivity than the test from company B which had returned negative test results for 28 of 

the 104 positive. 

Using the 450 and 540 U/ml borderline region the SERION ELISA classic test when 

compared to that from company A returned a specificity of 98.6 %. 

Using a borderline region between 300 and 350 U/ml resulted in eleven positive sera not 

being recognized. Taking the results of further testing and the patients’ clinical background 

into account, only two of these discrepant sera were from possibly primary infections and 

the remaining 9 were the result of persisting IgM or unspecific IgM. In relation to 

diagnostically relevant primary infections a sensitivity of 97.8 % was calculated. A 

specificity of 95.7 % was determined in comparison to the ELISA from company A. 

The author of the external study determined the highest efficiency of the SERION ELISA 

classic Toxoplasma gondii IgM test to be attained when using the 300 to 350 U/ml 

borderline region. 

english 20

In an internal performance study to determine the sensitivity of the Toxoplasma gondii IgM 

a serum panel of 86 sera (29 of which were positive for IgM) was tested in the SERION 

test and a further 2 commercially available IgM ELISA tests (company C and company B). 

the positive IgM sera were selected using the test from company C. 

Using a borderline region from 450 to 540 U/ml, five positive sera were not recognized so 

giving a sensitivity compared to the test from company C of 82.8 %. Compared to the test 

from company B the SERION test recorded 100% sensitivity. 

To determine the specificity 372 sera from pregnant women and blood donors were 

investigated. Using the same borderline region from 450 to 540 U/ml a specificity of 

98.9 % compared to the test from company B was attained. 

Performance Characteristics (external studies) Sensitivity Specificity 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG 98.2 % 99.4 % 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM 97.8 % 95.7 % 

Borderline results were not included in the calculations. 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG test is suitable for the determination of 

immune status in pregnant women. 

Hemoglobin levels of up to 10 mg/ml in serum had no effect on the results obtained. 

Investigation of a serum panel with antibody activities against potentially cross-reacting 

parameters (sera with auto-antibodies, rheumatoid factor, EBV and syphilis sera) did not 

reveal any evidence of false positive results due to cross-reactions. 

Infection with Epstein-Barr-Virus may lead to a polyclonal stimulation of antibody 

production and so lead to false positive Toxoplasma gondii IgM antibody results. In 

addition it should be noted that Toxoplasma gondii igM antibodies may persist for months 

or even years after an infection has resolved. 


english 21 

EN 

EL EN 

CS PT

9.2 Reproducibility 


Intraassay reproducibility was determined by testing sera of different reactivities 20 times 

in one test run. Interassay reproducibility was determined by testing sera of different 

reactivities 10 times in 10 independent assays performed on 5 different days. 

english 22 

Standard deviation 

Coefficient of Variation (CV %) = x 100 


Sample 

Mean Value 

(OD) 

Intraassay 

(CV %) 

Mean value 

Mean Value 

(OD) 

Interassay 

(CV %) 

weak positive 0.559 8.3 0.535 14.4 

positive 0.834 8.0 0.777 10.0 

strong positive 1.653 5.6 1.500 12.8 


Sample 

Mean Value 

(OD) 

Intraassay 

(CV %) 

Mean Value 

(OD) 

Interassay 

(CV %) 

weak positive 0.302 5.1 0.202 9.9 

positive 0.938 4.8 0.936 6.5 

strong positive 1.146 5.3 1.142 5.8 

Pos: 55 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_18.doc @ 21190 @ 122

10 SAFETY MEASURES 

10.1 Statements of Warning 

The SERION ELISA classic is designed for use by qualified personnel who are familiar 

with good laboratory practice. 

All kit reagents and human specimens should be handled carefully, using established good 

laboratory practice. 

- This kit contains human blood components. Although all control- and cut-off sera 

have been tested and found negative for anti-HIV-ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virussurface 

Antigen) and anti-HCV-ab, they should be considered potentially infectious. 

- Do not pipette by mouth. 

- Do not smoke, eat or drink in areas in which specimens or kit reagents are handled. 

- Wear disposable gloves, laboratory coat and safety glasses while handling kit 

reagents or specimens. Wash hands thoroughly afterwards. 

- Patient’s material and other potentially infectious material should be 

decontaminated after the test run. 

- Reagents should be stored safely and be unaccessible to unauthorized access e.g. 

children. 

- Stopping solution: corrosive (C); causes acid burn (R34) 

Use safety glasses, gloves and laboratory coat while handling! 

10.2 Disposal 

Please observe the relevant statutory requirements! 


english 23 

EN 

EL EN 

CS PT

11 REFERENCES 













548-52. 


















273. 



=== Ende der Liste für T extmar ke Inhalt === 

english 24

Mises à jour 

Veuillez prendre note des différences par rapport à la version précédente. 

Numéro de la version actuelle : V 18.11/12-1 

Version précédente : V 17.11/08-1 

Mise à jour dans la section : 5, 7.2.1 


SOMMAIRE 

1 UTILISATION PRÉVUE 

2 PERTINENCE DU DIAGNOSTIC 

3 PRINCIPE DU TEST SERION ELISA classic 

4 COMPOSANTS DE LA TROUSSE 

5 PRODUITS NÉCESSAIRES MAIS NON FOURNIS 

6 STOCKAGE ET STABILITÉ 

7 PRINCIPLE DU TEST SERION ELISA classic 

7.1 Signe de détérioration 

7.2 Préparation et stockage de l'échantillon 

7.3 Préparation des réactifs de la trousse 

7.4 Aperçu général - Procédure de test 

7.5 Procédure de test manuelle 

7.6 Procédure de test automatisée 

7.7 Contrôle positif / Contrôle de la précision 

7.8 Détermination de l'avidité 

7.9 Diagnostique néonatal 

8 ÉVALUATION DU TEST 

8.1 Quantification en un point selon la méthode 4PL 

8.2 Critères de validité 

8.3 Calcul SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 

8.4 Limites de la quantification 

8.5 Fourchettes limites 

8.6 Interprétation des résultats 

8.7 Fourchette de références des personnes en bonne santé 

9 CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE 

9.1 Sensibilité et Spécificité 

9.2 Reproductibilité 

10 MESURES DE SÉCURITÉ 

10.1 Mises en garde 

10.2 Élimination 

11 RÉFÉRENCES 

Version actuelle nr.: V 18.11/12-1 

version précédente: V 17.11/08-1 

FR




Test immuno-enzymatique pour la détection des anticorps humains 

pour le diagnostic in vitro 


SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG N o de commande: ESR110G 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM N o de commande: ESR110M 

Pos: classic/Allgemeine 0\mod_1177351044007_23.doc 4 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ classic/Kapitelüberschrift 171 classic/Gültig @ 1 für alle Dokumente/ELISA 


1 UTILISATION PRÉVUE 


Les tests SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG et IgM sont des tests immunoenzymatiques 

quantitatifs et qualitatifs utilisés pour la détection des anticorps humains 

dans le sérum ou le plasma dirigés contre le toxoplasme. Les tests sont recommandés 

pour déterminer le statut immunitaire et pour différencier les infections aiguës des 

infections récentes. Le SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM est le test de 

référence permettant de la détection des infections aiguës. Les anticorps IgM dirigés 

contre le Toxoplasme peuvent persister sur une longue période de temps. Le test SERION 

ELISA classic Toxoplasma gondii IgG en association avec le réactif d'avidité SERION 

ELISA classic Toxoplasma gondii (No. de commande: B109AVID) permettent la 

détermination des anticorps IgG d'avidité pour la différentiation des formes aiguës des 

infections récentes. Le test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM est adaptét 

pour le dépistage chez le nouveau-né sur des gouttes de sang séchées. 


2 PERTINENCE DU DIAGNOSTIC 


Toxoplasma gondii, un eucaryote appartenant au groupe des sporozoaires, est un parasite 

intracellulaire obligatoire qu'on retrouve dans le monde entier. Typiquement, pour un 

protozoaire, il y a alternance entre une reproduction sexuée (qui se produit chez les chats, 

l'hôte final) et la reproduction asexuée. 

Après ingestion des parasites par la voie orale, par ex., dans la nourriture contaminée, 

l'organisme pénètre dans l'intestin et entre dans le système réticulo-endothélial. Grâce à 

cette dissémination à travers la circulation sanguine, le Toxoplasme est capable d'infecter 

plusieurs organes différents dans l'hôte. 

La prévalence de l'infection au toxoplasme dans la population normale est étroitement 

corrélée avec l'âge. L'environnement et le style de vie jouent également un rôle important 

et peuvent influencer de façon importante la séroprévalence qui, en moyenne, augmente 

d'environ 10 % par décennie de vie, de sorte qu'en 50 ans, environ 50 % de la population 

est exposé au toxoplasme. 

Environ 50 % des infections au toxoplasme sont asymptomatiques alors que pour les 

autres, après une période d'incubation de 1 à 3 semaines, seuls des symptômes non 

spécifiques tels qu'une faible fièvre, l'exhaustion, maux de tête, mais également des 

douleurs musculaires et articulaires apparaissent. Une minorité de patients souffrent de 

fièvre (jusqu'à 39 °C) et tuméfaction des nodules lymphatiques cervicales. Chez environ 

1 % des enfants et des jeunes adultes infectés des complications telles que la myocardite, 

la méningite ou la pneumonie peuvent se manifester. 

français 2

Après rétablissement, les cellules de toxoplasme persistent dans les tissus infectés en 

formant des kystes qui sont résistants aux attaques du système immunitaire. Ches les 

personnes immunocompétentes, l'infection latente ne se réactive pas, probablement à 

cause d'une stimulation permanente du système immunitaire de l'hôte par la présence 

d'antigènes contre le toxoplasme; une immunité permanente est ainsi induite. 

Le dépistage des infections au toxoplasme au cours de la grossesse, dans le cadre des 

analyses générales, est d'une importance capitale. Une infection à n'importe quel stade au 

cours de la grossesse peut entraîner une transmission transplacentaire du parasite vers le 

foetus, même si le moment de ce transfert a un effet sur le résultat clinique pour le foetus. 

1. Semestre 17 % (la plupart du temps conduit à une fausse couche, rarement de lésion grave 

au foetus) 

2. Semestre 24 % (lésion modérée ou grave au foetus) 

3. Semestre 64 % (lésion bénigne ou lésions qui apparaissent plus tard au cours de la vie) 

Le risque d'infection du foetus par transmission à travers le placenta est limité aux femmes 

séronégatives qui acquièrent une infection primaire au cours de la grossesse. En 

Allemagne, la fréquence rapportée est de 2 à 7 nouveaux-nés infectés par 1000 

naissances viables. 

Étant donné que les anticorps IgM du toxoplasme peuvent persister pendant plusieurs 

mois ou années après l'infection, la détection des anticorps IgM spécifiques au pathogène 

au cours de la grossesse n'est pas une indication définitive d'une infection au toxoplasme 

active. Dans les sérums où les IgM sont présents, le test d'avidité permet la différenciation 

entre une infection primaire et une infection passée, étant donné que les anticorps IgG, 

avec une avidité élevée, sont la preuve d'une infection passée. 

Alors que, juste après la naissance, seulement 1 à 3 % des nouveaux-nés infectés 

démontrent des signes cliniques de lésions dues au toxoplasme, jusqu'à 80 % d'enfants 

infectés, sans signes cliniques, souffriront de lésions tardives et de manifestations 

cliniques graves. Le test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM est un outil utile 

pour le dépistage des nouveaux-nés infectés et asymptomatiques. Le test est effectué à 

l'aide d'un papier filtre commun avec des échantillons de sang séchés (voir les instructions 

spécifiques pour le SERION ELISA classic Toxoplasma gondii néonatal). La détection des 

anticorps IgM spécifiques chez les nouveaux-nés corrèle avec une infection aiguë ou intrautérine 

de l'enfant étant donné que la diffusion des anticorps maternels à travers le 

placenta peut être exclue à cause de la taille des anticorps. En cas d'une infection au 

toxoplasme, une thérapie précoce chez les nouveaux-nés peut prévenir une bonne partie 

des lésions résultantes. 

Une infection au toxoplasme, jusqu'à 2 semaines avant le début de la grossesse, procure 

une immunité protectrice. Il est conseillé de déterminer le statut immunitaire avant de 

planifier une grossesse. 

Lorsque l'infection maternelle primaire est détectée et ensuite éradiquée par 

chimiothérapie, le risque de transmission au foetus est diminué d'environ 75 %. 

français 3 

FR

Après une immuno-suppression naturelle ou iatrogène, des infections latentes peuvent 

être activées. Après suppression du système immunitaire, l'activation des infections 

latentes a été observée. Chez les patients atteints du SIDA, l'encéphalite due au 

toxoplasme est une cause de décès importante. 


3 PRINCIPE DU TEST SERION ELISA classic 

Le test ELISA (test utilisant un immunoadsorbant lié à une enzyme) est un test 

immunologique qui convient particulièrement à la détermination d'anticorps dans le 

domaine de la sérologie infectieuse. La réaction est basée sur l'interaction spécifique 

d‘anticorps avec les antigènes correspondants. Les puits de la microplaque de dosage des 

coffrets SERION ELISA classic sont coatés avec l’antigène spécifique du pathogène 

concerné. Si les anticorps contenus dans l'échantillon de sérum du patient sont présents, 

ils se lient à l'antigène fixé. Un anticorps secondaire, qui a été préalablement conjugué 

avec l'enzyme phosphatase alcaline, détecte le complexe immun et s'y lie. Le substrat 

incolore p-nitrophénylphosphate est ensuite transformé en un produit coloré, le pnitrophénol. 

L'intensité du signal de ce produit de réaction est proportionnelle à la 

concentration de l'analyte dans l'échantillon et elle est mesurée par une méthode 

photométrique. 


Zusammensetzung/Inhalt und Zusammensetzung (alle außer Bor,EBV,Hanta,Parvo, Coxiella) @ 

4\mod_1255342923549_23.doc @ 21225 @ 1 

français 4

4 COMPOSANTS DE LA TROUSSE 

Composants pour le test Pièces / 

Volume 

Barrettes de huit puits unitaires coatés avec un antigéne (au total 96) MTP , 

1 cadre. 

Le produit de coating est inactivé. 

Sérum standard (prêt à l'emploi) STD , 

Protéine sérique humaine contenant du tampon phosphate; 

négatif pour l'Ac anti-VIH, HBs-Ag (antigène de surface du virus de l'hépatite B) et l'Ac 

anti-VHC; 

agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium; 

colorant : Amaranth O. 

Sérum pour le contrôle négatif (prêt à l'emploi) NEG , 

Protéine sérique humaine contenant du tampon phosphate; 

négatif pour l'Ac anti-VIH, HBs-Ag (antigène de surface du virus de l'hépatite B) et l'Ac 

anti-VHC; 


colorant : Vert de lissamine V. 

Conjugué anti IgA, anti IgG ou anti IgM humain (prêt à l'emploi) APC , 

IgA Anti-humain, IgG ou anticorps polyclonal IgM, 

conjugué à la phosphatase alcaline, stabilisé avec une solution contenant des 

protéines; 

agent de conservation : 0,01 % méthylisothiazolone, 0,01 % bromnitrodioxane. 

Concentré de solution de lavage (en quantité suffisante pour 1000 ml) WASH , 

Solution de chlorure de sodium avec Tween 20 et 30 mM Tris/HCl, pH 7,4; 

agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium. 

Tampon de dilution DILB , 

Protéine contenant du tampon phosphate avec Tween 20; 


colorant : 0,01 g/l bleu de bromophénol. 

Solution d'arrêt STOP , 

Hydroxyde de sodium 1,2 N. 

Substrat (prêt à l'emploi) pNPP , 

Para-nitrophénylphosphate dans un solvant ne contenant pas de tampon; 

agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium 

(Le substrat, dans le flacon non ouvert, peut avoir une coloration légèrement jaunâtre, 

qui ne réduit pas la qualité du produit!) 

Certificat de contrôle de la qualité avec courbe d'étalonnage et tableau 

d'évaluation INFO , 

(quantification des anticorps en IU/ml ou U/ml). 

français 5 

12 pièces 

2 x 2 ml 

2 ml 

13 ml 

33,3 ml 

2 x 50 ml 

15 ml 

13 ml 

2 pages 

Pos: 10 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für mehrere Dokumente/Zusätzlich benötigte 

Materialien/T200 Zusätzlich benötigte Materialien (für Toxo, Masern, Mumps, CMV, HSV, VZV, 

Röteln) @ 5\mod_1255348778895_23.doc @ 21449 @ 1 

FR

5 PRODUITS NÉCESSAIRES MAIS NON FOURNIS 

- équipement général de laboratoire 

- pour la détection d'IgM : SERION Rf-Absorbent, n o de commande Z200 (20 ml) 

- photomètre pour plaques de microtitration avec filtre, longueur d'onde 405 nm, 

longueur d'onde de référence recommandée 620 nm à 690 nm (par ex. 650 nm) 

- incubateur à 37 °C 

- chambre humide 

- eau distillée 

- Agrafes (n o de commande VT120) 

Pos: 11 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA classic/Lagerung und 

Haltbarkeit/Lagerung und Haltbarkeit @ 4\mod_1255343176800_23.doc @ 21241 @ 1 

français 6

6 STOCKAGE ET STABILITÉ 

Réactif Stockage Stabilité 

Barrettes de 

microtitration (coatées 

avec un antigène) 

Sérum de contrôle / 

Sérum standard 

Avant ouverture 

après ouverture, entre 2 °C et 8 °C dans sachet en 

aluminium fermé avec déshydratant 

Les barrettes non utilisées doivent être stockées dans 

un endroit sec, dans des sachets en aluminium 

fermés. 

français 7 

voir la date 

d'expiration; 

durée minimale de 

stockage : quatre 

semaines; 

durée de stockage en 

cas d'utilisation selon 

les consignes et 

stockage jusqu'à la 

date d'expiration 

après ouverture entre 2 °C et 8 °C voir la date 

d'expiration; 

Conjugué solution prête à l'emploi entre 2 °C et 8 °C 

Tampon de dilution Avant ouverture 

Évitez les contaminations, par ex., en utilisant des 

barrettes stériles. 

Après ouverture entre 2 °C et 8 °C 

Jetez les solutions troubles. 

Solution de lavage Concentrée, après ouverture entre 2 °C et 8 °C 

Diluée , entre 2 °C et 8 °C 

Diluée à température ambiante 

Les flacons utilisés pour effectuer la dilution 

d'utilisation doivent être régulièrement nettoyées. 

Jetez les solutions troubles. 

Substrat solution prête à l'emploi entre 2 °C et 8 °C, 

stockez à l'abri de la lumière 

Évitez les contaminations, par ex., en utilisant des 

barrettes stériles. 

Jetez la solution si elle devient jaunâtre (Différence 

de DO comparée à l’eau distillée : > 0,25 DO). 

24 mois à partir de la 

date de fabrication 

voir la date 

d'expiration; 



voir la date 

d'expiration; 


date de fabrication; 

24 mois 

voir la date 

d'expiration; 

2 semaines 

1 semaine 

voir la date 

d'expiration; 



Solution d'arrêt Après ouverture à température ambiante voir la date d'expiration 

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Überschrift: Durchführ ung @ 0\mod_1184679699953_23.doc @ 2474 @ 1 

FR

7 PRINCIPLE DU TEST SERION ELISA classic 


7.1 Signe de détérioration 

Seuls les réactifs SERION ELISA classic doivent être utilisés avec les coffrets SERION 

ELISA classic. Les composants ne doivent pas être échangés avec des réactifs provenant 

d'autres fabricants. Le sérum standard etle sérum contrôle des tests SERION ELISA 

classic sont définis exclusivement pour la trousse les contenant et ne doivent pas être 

utilisés avec d'autres lots. Le tampon de dilution, la solution de lavage, le substrat et la 

solution d'arrêt sont communs aux réactifs SERION ELISA classic indépendamment du lot 

ou l'analyse. 

Il existe trois concentrations de conjugués pour chaque classe d'immunoglobuline : 

FAIBLE, MOYENNE, ÉLEVÉE Cette classification est indiquée sur chaque étiquette de la 

façon suivante : 

ex., IgG + conjugué IgG à faible concentration 

IgG ++ conjugué IgG à concentration moyenne 

IgG +++ conjugué IgG à concentration élevée 

Dans de rares cas, l'utilisation d'un conjugué spécial est nécessaire pour garantir la même 

qualité pour tous nos produits. Les conjugués spéciaux sont préparés dans des lots 

distincts et ne portent pas le signe « + » et ne sont pas interchangeables avec les autres 

conjugués. 

Veuillez faire très attention aux informations figurant sur les étiquettes! 

S'ils sont toujours emballés et stockés selon les consignes, tous les composants du test 

SERION ELISA classic peuvent être utilisés jusqu'à la date d'expiration indiquée sur les 

étiquettes. Les réactifs ne doivent pas être utilisés après la date d'expiration. 

La dilution et la modification des réactifs peuvent entraîner une perte de sensibilité. 

Évitez d'exposer les réactifs à une lumière trop forte lors du stockage et l'incubation. Les 

réactifs doivent être bien fermés après utilisation pour éviter l'évaporation et la 

contamination. 

Pour ouvrir le sachet en aluminium de la plaque de microtitration, veuillez découper le haut 

du sachet à l'endroit indiqué, pour que vous puissiez fermer le sachet correctement après 

utilisation. Il ne faut pas utiliser les barrettes si le sachet en aluminium est endommagé ou 

si le sachet, contenant le reste des barrettes et le dessicant, n'a pas été correctement 

refermé. 

Prélevez le plus stérilement possible dans les tubes de réactif afin d'éviter toute 

contamination. Afin d'éviter les faux positifs, il faut s'assurer de ne pas toucher les parois 

supérieures des puits ou de les éclabousser lors du pipetage du conjugué. Il faut faire 

attention de ne pas mélanger les bouchons des bouteilles et/ou des flacons. 

français 8

Pour assurer la reproductibilité des résultats des tests, il faut bien mélanger les réactifs. 

Agitez les flacons contenant les sérums de contrôle avant de les utiliser, mais également 

tous les échantillons après dilution (par ex., à l'aide d'un mélangeur vortex). 

Assurez-vous de pipeter soigneusement et respectez les durées et températures 

d'incubation. S'il existe une différence de temps importante entre le pipetage du premier et 

du dernier puits de la plaque de microtitration, lors de la distribution des échantillons et 

des sérums de contrôle, du conjugué ou du substrat, on peut avoir des durées de pré 

incubation différentes qui influenceront la précision et la reproductibilité des résultats. 

Des résultats optimaux ne seront obtenus que si les consignes sont scrupuleusement 

respectées. 

Le test SERION ELISA classic n'est valable que si les critères de validation, spécifiques 

au lot en question, et figurant sur le certificat de contrôle de la qualité sont respectés. 

Un nombre suffisant de lavages permet d'éviter les résultats non spécifiques. Il est donc 

recommandé de soigneusement effectuer la procédure de lavage. Tous les puits à fond 

plat doivent être remplis avec un volume égal de tampon de lavage. À la fin de la 

procédure, assurez-vous que les puits ne contiennent plus de tampon de lavage afin 

d'éviter les effets de dilutions incontrôlées. Évitez de faire des bulles! 

Prenez soin de ne pas endommager l'inscription (pathogène/classe d'anticorps) figurant 

sur la plaque de microtitration au cours des étapes de lavage et d'aspiration afin d'éviter 

les confusions. 


7.2 Préparation et stockage de l'échantillon 

Les échantillons lipémique, hémolytique ou ictérique (sérum ou plasma) doivent être 

analysés avec réserve seulement. Les échantillons qui sont à l'évidence contaminés ne 

doivent pas être analysés. Le sérum ou le plasma (EDTA, citrate, héparine) recueillis 

selon les procédés standard de laboratoire sont des échantillons convenables. Les 

échantillons ne doivent pas être inactivés thermiquement. 


7.2.1 Dilution des échantillons 

Avant d'effectuer le test, les échantillons patient (V1) doivent être dilués dans le tampon de 

dilution (V2) comme suit : 



V1 + V2 = 1+100 ajouter 10 µl d'échantillon patient 

chacun à 1000 µl de tampon de dilution 


Après dilution et avant le pipetage dans la plaque de microtitration, les échantillons doivent 

être bien mélangés pour obtenir une solution homogène. 


français 9 

FR



Interférence avec les facteurs rhumatoïdes 

Les facteurs rhumatoïdes sont des auto-anticorps appartenant principalement à la classe 

des IgM, qui se lient préférentiellement aux complexes immunitaires IgG. La présence des 

anticorps IgM non spécifiques (facteurs rhumatoïdes) peut entraîner des faux-positifs lors 

des tests IgM. En outre, la possibilité existe que des anticorps IgM à faible pouvoir de 

liaison et spécifiques à un pathogène donné peuvent être déplacés par des anticorps IgG 

qui se lient plus fortement. Ceci nous donne des faux-négatifs pour les résultats d'IgM. Il 

est donc nécessaire de pré-traiter les échantillons avec des absorbants de facteurs 

rhumatoïdes avant la détection des IgM (SERION RF-Absorbent, n o de commande : Z200 

(20 ml/100 tests)). L'absorption Rf est effectuée par incubation avec l'échantillon du patient 

dans le tampon de dilution Rf pendant 15 minutes, à température ambiante, ou pendant 

toute une nuit à 4 °C. La procédure du test est décrite dans un autre mode d'emploi. 


Avant d'effectuer le test, l'absorbant du facteur rhumatoïde (V1) doit être dilué, 1+4, dans 

le tampon de dilution (V2). 

V1 + V2 = V3 (1 + 4) ajouter 200 µl Rf-absorbent 

français 10 

chacun à 800 µl de tampon de dilution 

Échantillon patient (V4) doit être dilué dans ce tampon de dilution Rf (V3) : 

V4 + V3 = 1 + 100 ajouter 10 µl échantillon de patient 

chacun à 1000 µl Rf-tampon de dilution 


Après dilution et avant le pipetage dans la plaque de microtitration, les échantillons doivent 

être bien mélangés pour obtenir une solution homogène. 


7.2.2 Stockage de l'échantillon 

Les échantillons des patients ne doivent pas être stockés pendant plus de 7 jours entre 2 

et 8 °C. Un stockage plus long peut se faire à ≤ -20 °C. Évitez les cycles de 

congélation/décongélation répétés. Les échantillons dilués peuvent être stockés entre 2 et 

8 °C pendant une semaine. 


classic/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung, Teil 1 @ 4\mod_1255343795606_23.doc @ 

21305 @ 233

7.3 Préparation des réactifs de la trousse 

Tous les réactifs doivent être à température ambiante avant leur utilisation. 

7.3.1 Barrettes de tests 

Les barrettes sont emballées dans un sachet en aluminium avec un produit 

dessicant. Enlevez seulement les puits dont vous avez besoin de la plaque et 

replacez le reste dans le sachet en aluminium. Refermez soigneusement le sachet 

pour qu'il soit étanche à l'air. 

7.3.2 Sérum de contrôle / Sérum standard 

Le sérum de contrôle et le sérum standard sont prêts à l'emploi et ne doivent pas 

être dilués. Pour chaque cycle de tests, indépendamment du nombre de barrettes 

devant être utilisées, les sérums de contrôle et standard doivent être mis dans la 

plaque. Le sérum standard doit être mis en double. 


Il ne faut pas traiter le sérum de contrôle avec l'absorbant Rf. 


7.3.3 IgA anti-humain, IgG ou conjugué IgM (prêt à l'emploi) 

Les conjugués ayant la même concentration et la même classe d'immunoglobuline 

sont interchangeables. Il fait éviter de contaminer les conjugués prêt à l'emploi, par 

ex., en utilisant des embouts stériles. 

7.3.4 Solution de lavage 

Diluez le concentré de tampon de lavage (V1) 1:30 avec de l'eau distillée jusqu'à un 

volume final de V2. 

Exemple : 

français 11 

Concentré de tampon (V1) Volume final (V2) 

33,3 ml 1000 ml 

1,0 ml 30 ml 

7.3.5 Tampon de dilution pour les échantillons (prêt à l'emploi) 

7.3.6 Substrat (prêt à l'emploi) 

Il fait éviter de contaminer la solution de substrat prêt à l'emploi, par ex., en utilisant 

des embouts stériles. 

7.3.7 Solution d'arrêt (prête à l'emploi) 

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/Ü berschrift Testablauf @ 0\mod_1180955922843_23.doc @ 734 @ 2 

FR

7.4 Aperçu général - Procédure de test 



français 12 



quantitatif 

Dans le cas de détection d'IgM de facteur rhumatoïde, voir No. 7.2.1; 

Incubation de 15 minutes à température ambiante ou toute une nuit à 4°C 

dilution d'échantillon 1 

(échantillon de patient) 

1+100 

Déposez les échantillons dilués et les sérums contrôle/ 

standard prêts à l'emploi dans les puits (100 µl) 

 

INCUBATION 60 min à 37 °C 

chambre humide 

 

LAVAGE (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Déposez le conjugué APC (100 µl) 

 



 

LAVAGE (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Déposez le substrat pNPP (100 µl) 

 



 

Déposez la solution d'arrêt STOP (100 µl) 

 

LECTURE D'EXTINCTION à 405 nm 

1 Les tampons spéciaux pour les tests SERION ELISA classic suivants : 

Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG, Parvovirus B19 IgM et Hantavirus Puumala IgG, IgM 


2 Pour une utilisation manuelle : 

tapez la plaque, à la fin de la procédure de lavage, sur un papier absorbant.

7.5 Procédure de test manuelle 

1. Placez le nombre de puits dont vous avez besoin dans le cadre et préparez une 

feuille de protocole. 

2. Déposez 100 µl d'échantillon dilué ou de contrôles prêts à l'emploi dans les 

puits appropriés. Laissez un puits pour le blanc du substrat, par ex., 

IgG/IgM quantitatif 

n o de puits 

puits A1 Blanc du substrat 

puits B1 Contrôle négatif 

puits C1 Sérum standard 

puits D1 Sérum standard 

puits E1 Patient 1.... 

3. Incubation de l'échantillon pendant 60 minutes (+/- 5 min) à 37 °C (+/- 1°C) dans 

une chambre humide 

4. Après incubation lavez tous les puits avec une solution de lavage (avec un laveur 

automatisé ou manuellement) : 

- aspirez ou enlevez la solution d'incubation en retournant la plaque 

- remplissez chaque puits avec 300 µl de solution de lavage 

- aspirez ou enlevez le tampon de lavage en retournant la plaque 

- répétez la procédure de lavage 3 fois (4 fois en tout!) 

- séchez la plaque de microtitration en la tapant sur un papier absorbant 

5. Ajout du conjugué 

Ajoutez 100 µl de conjugué IgG/IgM prêt à l'emploi aux puits appropriés (sauf le 

blanc du substrat) 

6. Incubation du conjugué pendant 30 minutes (+/- 1 min)* à 37 °C (+/- 1 °C) dans 

une chambre humide. 

7. Après incubation, lavez tous les puits avec la solution de lavage (voir plus haut) 

8. Ajout du substrat 

Ajoutez 100 µl de solution de substrat prête à l'emploi à chaque puits (y compris le 

puits pour le blanc de substrat!) 

9. Incubation du substrat pendant 30 minutes (+/- 1 min)* à 37 °C (+/- 1 °C) dans 

une chambre humide. 

10. Arrêt de la réaction 

Ajoutez 100 µl de solution d'arrêt à chaque puits, secouez doucement la plaque de 

microtitration pour mélanger. 

11. Lecture d'extinction 

Lisez la densité optique (DO) dans les 60 minutes à 405 nm par rapport à un blanc 

de substrat, longueur de référence entre 620 nm et 690 nm (ex. 650 nm). 

_____________________ 

* Veuillez noter que dans des conditions de manipulation particulières, il peut s'avérer 

nécessaire d'adapter les temps d'incubation selon le laboratoire. 


français 13 

FR

7.6 Procédure de test automatisée 

SERION ELISA est compatible avec un traitement sur automate et a été évalué quant à 

son utilisation avec Immunomat TM mais également avec DYNEX DSX ® et DS2 ® . Le 

traitement automatique est effectué de façon analogue à l'utilisation manuelle. Veuillez 

noter que dans des conditions de manipulation particulières, il peut s'avérer nécessaire 

d'adapter les temps d'incubation selon le laboratoire. 


7.7 Contrôle positif / Contrôle de la précision 

Pour la vérification périodique du procédé de test, pour satisfaire aux exigences des 

systèmes de gestion de la qualité internes des laboratoires, nous recommandons 

l'utilisation des SERION ELISA controls afin de déterminer la précision et la fiabilité des 

cycles de test du SERION ELISA classic. L'utilisation des SERION ELISA controls est 

décrite dans les modes d'emploi spécifiques. 


7.8 Détermination de l'avidité 

Le test IgG SERION ELISA classic Toxoplasma gondii permet, avec le réactif d'avidité 

SERION ELISA classic correspondant, de déterminer l'avidité des anticorps IgG par 

rapport à un pathogène donné. La détermination de l'avidité est recommandée pour aider 

à la différentiation entre une infection primaire aiguë et des infections précédentes, 

particulièrement lors des investigations sérologiques au cours de la grossesse. La 

procédure du test est décrite dans un autre mode d'emploi. L'outil logiciel d'évaluation, 

basé sur Excel, SERION avidity permet de calculer les indices d'avidité de SERION. 


7.9 Diagnostique néonatal 

Le test IgM de SERION ELISA classic Toxoplasma gondii a été évalué pour la détection 

des anticorps IgM spécifiques pour les pathogènes humains dans les échantillons 

sanguins néonatal. Un dépistage du nouveau-né peut être effectué avec la goutte de sang 

sèche prélevée au niveau du talon (DBS) sur du papier filtre ayant un de diamètre de 

3,2 mm (1/8 pouce). La procédure du test est décrite dans un autre mode d'emploi. 


français 14

8 ÉVALUATION DU TEST 



8.1 Quantification en un point selon la méthode 4PL 

La transformation optimisée des signaux d'extinction en valeurs quantitatives est assurée 

par les fonctions non linéaires, qui permettent d'ajuster une courbe sigmoïde sans autre 

transformation des valeurs de DO. La détermination des concentrations d'anticorps avec le 

SERION ELISA classic est effectuée par le modèle logistique logarithmique à 4 

paramètres (4 PL) qui est idéal pour l'ajustement de courbe. Il est basé sur la formule : 

DO = A + 

1 + e 

français 15 

D - A 


Les paramètres A, B, C et D sont représentatifs de la forme exacte de la courbe : 

1. asymptote inférieure paramètre A 

2. gradient de la courbe paramètre B 

3. point d'inflexion paramètre C 

4. asymptote supérieure paramètre D 

Pour chaque lot, la courbe de référence est évaluée par l'Institut Virion\Serion GmbH 

(Würzburg, Allemagne) dans des cycles d'analyses dans des conditions optimales. On 

épargne ainsi à l'utilisateur le temps qu'il aurait consacré à tracer cette courbe ainsi que 

les coûts qui y sont liées. 

En ce qui concerne l'évaluation des concentrations d'anticorps, une courbe spécifique au 

lot ainsi qu'un tableau d'évaluation spécifique au lot sont fournis avec la trousse de test 

SERION ELISA classic. Le logiciel d'évaluation SERION evaluate et l'outil logiciel basé sur 

Microsoft ® Excel SERION activity sont disponibles sur demande. 

Afin de compenser les variations normales du test mais également pour le contrôle du 

test, un sérum de référence est utilisé dans chaque cycle de test. Pour ce sérum de 

contrôle, une valeur de référence avec une fourchette de validité est déterminée par le 

contrôle de la qualité du fabricant. Dans ces limites, une bonne quantification de la 

concentration des anticorps est assurée. 


FR

8.2 Critères de validité 

- Le blanc du substrat doit avoir une DO < 0,25. 

- Le contrôle négatif doit donner un résultat de test négatif. 

- Avec l'utilisation des tests SERION ELISA classic la valeur de DO moyenne (après 

soustraction du blanc du substrat !) du sérum standard doit être dans les limites de 

la fourchette de validité, qui est indiqué sur le certificat de contrôle de la qualité 

spécifique au lot. 

- La variation des valeurs de DO du sérum standard ne doit pas dépasser 20 %. 

En cas de non respect de ces critères, le test n'est pas valide et doit être refait. 


8.3 Calcul SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 


La détermination de l'activité de l'anticorps exprimée en UI/ml (Unités Internationales/ml) 

pour le test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG est référencée à la 2 ème norme 

internationale sur le toxoplasme (1980) avec 2000 UI par flacon. La quantification du test 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM est basé sur la 3 ème norme internationale 

sur le toxoplasme (1994), qui a déclaré une concentration d'anticorps IgM de 3000 U par 

flacon. Cette norme internationale n'a pas été, jusqu'à présent, accepté par tous étant 

donné qu'il n'a pas été possible de définir une norme générale pour la détermination des 

anticorps IgM, jusqu'à présent. Ainsi, les résultats des tests SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgM sont exprimés en U/ml. 


8.3.1 Évaluation non automatique 

Pour l'évaluation du test SERION ELISA classic, un certificat de contrôle spécifique à un 

lot donné, avec une courbe de référence et un tableau d'évaluation sont fournis avec la 

trousse, de sorte que les valeurs de DO obtenues peuvent être attribuées aux activités 

d'anticorps correspondantes. Le blanc du substrat doit être soustrait des valeurs de DO 

avant l'évaluation. 


s 

Méthode 1 : Évaluation qualitative 

Pour établir les fourchettes de seuil, multipliez la valeur moyenne des DO du standard 

mesurées par les données numériques du certificat de contrôle de la qualité (voir les 

formules des cas spéciaux), par ex. : 

OD = 0,502 x PM(STD) avec limite supérieure 

OD = 0,352 x PM(STD) avec limite inférieure 

Si la valeur d'absorbance moyenne mesurée du sérum standard est DO 0,64, la fourchette 

du seuil est de 0,225 à 0,321 DO. 

français 16

Méthode 2 : 


Détermination en continu des activités d'anticorps avec l'aide de la courbe de référence 

Les variations entre les tests (déviations de jour en jour et déviations entre laboratoires) 

sont compensées par multiplication de la valeur mesurée obtenue pour un échantillon de 

patient par le facteur de correction F. Ce facteur est calculé comme suit : 

F = 

français 17 

valeur de référence de DO (du sérum standard) 

valeur réelle de DO (du sérum standard) 

Cette procédure est nécessaire pour ajuster le niveau réel du test de l'utilisateur avec la 

courbe de référence spécifique au lot. Premièrement, les déviations journalières doivent 

être corrigées en calculant le facteur de correction F. 

1. La moyenne des deux valeurs de DO du sérum standard doit être calculée et il faut 

vérifier que cette valeur est dans les limites de la fourchette de validité. 

2. Calcul du facteur F : la valeur de référence donnée est divisée par la moyenne de 

l'extinction du sérum standard : 

F = valeur de référence d'extinction du sérum STD / valeur moyenne d'extinction du 

sérum STD. 

3. Toutes les valeurs mesurées pour les échantillons du patient sont multipliées par F. 

4. Les activités des anticorps en UI/ml ou U/ml peuvent être déterminées à partir de la 

courbe de référence, avec des valeurs corrigées. 


FR

8.3.2 Évaluation automatique du test avec le logiciel SERION evaluate 

Après saisie des quatre paramètres et de la valeur de référence du sérum standard, les 

activités des anticorps sont calculées en ligne à partir des séries de tests de SERION 

ELISA classic, traités et mesurés, par le logiciel d'évaluation SERION evaluate. 

Si la densité optique du standard est hors des limites de validité, le message suivant 

apparaîtra. 

„Valeurs de référence hors limite pour les groupes suivants : Groupe 1-24.” ou 

„Valeur de référence diffère de plus de 20 % dans les groupes suivants : Groupe 1-24.” 

Dans ces cas, la série de tests n'est pas valide et doit être refait. 

Les paramètres et la valeur de référence doivent être modifiés seulement s'il y a un 

changement de lot (le tableau d'évaluation contient les paramètres et les valeurs de 

référence). La vérification de la saisie correcte des données spécifiques au lot est basée 

sur la vérification de l'activité du sérum standard (en UI/ml ou U/ml). La valeur moyenne 

calculée des unités doit correspondre à la valeur unitaire indiquée sur le certificat 

spécifique au lot. Une correction automatique des valeurs mesurées est effectuée. Dans la 

version standard, les affichages à la sortie de l'imprimante sont les suivants : 


8.4 Limites de la quantification 

français 18 

Code d'échantillon 

Valeur de DO 

UI/ml ou U/ml 

Évaluation 

Les limites de quantification sont mentionnées sur le certificat de contrôle de la qualité du 

test SERION ELISA classic. La linéarité de la dilution dans les limites de cette fourchette a 

été démontrée lors des études d'évaluation complètes. Dans le cas où l'échantillon du 

patient donne un résultat au dessus de la limite supérieure de quantification, l'échantillon 

peut être testé à une dilution plus élevée. L'activité de l'anticorps ainsi déterminée doit être 

multipliée par un facteur de dilution additionnel. 


8.5 Fourchettes limites 

Les limites des fourchettes du test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 

sont mentionnées sur le certificat de contrôle de la qualité et indique la fourchette pour les 

résultats limites des tests. Les valeurs obtenues, lors de l'analyse de l'échantillon du 

patient, qui sont en dessous de cette fourchette indiquent un résultat de test négatif; les 

valeurs qui sont au dessus sont interprétées comme des résultats positifs. Dans les cas où 

les résultats sont des la fourchette limite, une interprétation définitive du résultat n'est pas 

possible. Dans de tels cas, le test doit être refait en parallèle avec un échantillon prélevé 

une ou deux semaines plus tard (paire de sérum). 


Nous recommandons l’utilisation du test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM 

avec la fourchette de limite indiquée de 300 – 350 U/ml. Cependant, le test peut être 

évaluer avec un autre seuil plus élevé de 450 – 540 U/ml afin d’exclure la détection des 

anticorps IgM persistant à faible activité. En fait, les anticorps de Toxoplasma gondii IgM 

sont produits, très peu de temps après l’infection, à des niveaux élevés. Ceci justifierait 

une fourchette limite plus élevée de 450 à 540 U/ml. En outre, les patients infectés 

démontrent un niveau d’anticorps IgM distinct sur une longue période de temps. 

L’intervalle de limite élevée minimise le nombre de sérum positif détecté avec des 

anticorps IgM persistants et réduit l’incidence des événements positifs non pertinents. 

Cependant, l’utilisation de la fourchette de limite inférieure de 300 à 350 U/ml afin de 

réduire la probabilité de passer à côté d’une infection primaire, est préférée. (Lappalainen, 

M. and Hedman, K., 2004). Par conséquent, plus de résultats positifs pour Toxoplasma 

gondii IgM seront détectés, et ceux-ci devront ensuite être clarifiés et classés comme 

infection aiguë ou précédente par des analyses ultérieures, ex., détermination de l’avidité 

IgG. 


8.6 Interprétation des résultats 


L'institut Robert Koch recommande un diagnostic du stade sérologique pour les femmes 

enceintes. 

Le test SERION ELISA classic Toxoplasma IgG peut être utilisé comme un test de 

dépistage. Les résultats négatifs avec le test SERION ELISA classic Toxoplasma IgG (

Au cours de la réponse immunitaire à l'infection, l'avidité des anticorps produits augmente 

en fonction du temps (maturation de l'affinité) de sorte que les anticorps avec une avidité 

élevée sont les signes d'une infection passée. Une infection primaire récente, par contre, 

est caractérisée par des anticorps de faible affinité. 

Les résultats doivent être interprétés selon le tableau ci dessous (Institut Robert Koch) 

IgG IgM AVIDITÉ-IgG RÉSULTAT PROBABLE 

POSITIF NÉGATIF ---------- INFECTION INACTIVE, LATENTE 

POSITIF POSITIF ÉLEVÉ 

POSITIF POSITIF FAIBLE 


8.7 Fourchette de références des personnes en bonne santé 


Des tests sur des échantillons de sérum aléatoires provenant de donneurs de sang, 

prélevés dans la région du sud de l'Allemagne, avec le test SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgG nous donne la distribution suivante. Sur 50 sérums testés, 31 

(62 %) étaient positifs et 19 (38 %) étaient négatifs. Le résultat est en accord avec les 

données publiées dans les articles scientifiques qui rapportent que la séroprévalence dans 

la population générale, en fonction des habitudes alimentaires et l'âge, est très variable. 

La distribution selon l'âge et les habitudes alimentaires des donneurs de sang participant à 

cette étude n'est pas connue. 


9 CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE 


9.1 Sensibilité et Spécificité 


Afin de déterminer les caractéristiques de performance du test SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgG, une étude de comparaison externe, utilisant des sérums 

provenant de 450 patients et des personnes saines, a été effectuée en même temps qu'un 

test d'immunofluorescence indirect. Les résultats indiquent une sensibilité de 98,2 % et 

une spécificité de 99,4 %. 

Une étude interne a également été effectuée avec des sérums provenant de 1000 femmes 

enceintes. Un test d'immunofluorescence indirect a également été utilisé comme référence 

et les résultats non concordants ont été également testés avec le test Sabin-Feldman afin 

de déterminer le vrai statut. Les résultats indiquent une sensibilité de 97,8 % et une 

spécificité de 99,8 %. 

français 20 

INFECTION EN DÉCROISSANCE OU LATENTE 

(INACTIVE) 

INFECTION AIGUË POSSIBLE, IL FAUT DONC 

D'AUTRES MÉTHODES DE CLARIFICATION 

OU UNE SURVEILLANCE CLINIQUE

Une étude externe, pour déterminer la sensibilité et la spécificité du test SERION ELISA 

classic Toxoplasma gondii IgM, avec un total de 256 sérums, parmi lesquels 104 étaient 

positifs, a été effectué avec deux tests IgM de comparaison disponibles dans le commerce 

(de la compagnie A et la compagnie B). Les sérums positifs pour l'IgM ont été sélectionnés 

avec le test IgM toxoplasme de la compagnie A. 

L'utilisation d'une fourchette limite entre 450 et 540 U/ml nous donne 19 sérums positifs 

qui ne donnent pas de résultats positifs, 7 d'entre eux provenant potentiellement 

d'infections aiguës. Lors de cette évaluation, le test SERION ELISA classic Toxoplasma 

gondii IgM a démontré une affinité plus élevée que le test provenant de la compagnie B 

qui a donné des résultats de test négatifs pour 28 des 104 sérums positifs. 

En utilisant une fourchette limite entre 450 et 540 U/ml, le test SERION ELISA classic en 

comparaison avec celui de la compagnie A, on obtient une spécificité de 98,6 %. 

Avec une région limite entre 300 et 350 U/ml, on obtient 11 sérums positifs qui ne sont pas 

reconnus. En prenant en compte les résultats d'autres tests et les antécédents cliniques 

des patients, seulement 2 de ces sérums discordants, provenant probablement 

d'infections primaires, et les 9 restants, étaient le résultat des IgM persistant ou d'IgM non 

spécifiques. En relation avec les infections primaires pertinentes pour le diagnostic, une 

sensibilité de 97,8 % a été calculée. Une spécificité de 95,7 % a été déterminée en 

comparaison à l'ELISA provenant de la compagnie A. 

L'auteur de l'étude externe a déterminé que l'efficacité la plus élevée du test SERION 

ELISA classic Toxoplasma gondii IgM est obtenue lorsqu'une fourchette de limite de 300 à 

350 U/ml est utilisée. 

Lors d'une étude interne portant sur la détermination de la sensibilité des IgM de 

toxoplasme, un panel de 86 sérums (29 étant positifs pour l'IgM) a été testé dans le test 

SERION et deux autres test ELISA IgM disponibles dans le commerce (compagnie C et 

compagnie B). Les sérums positifs pour l'IgM ont été choisis avec le test de la compagnie 

C. 

En utilisant une fourchette de limite entre 450 et 540 U/ml, 5 sérums positifs n'ont pas été 

reconnus donnant ainsi une sensibilité, en comparaison au test de la compagnie C, de 

82,8 %. En comparaison avec le test de la compagnie B, le test SERION nous donne une 

sensibilité de 100 %. 

Afin de déterminer la spécificité, 372 sérums provenant de femmes enceintes et des 

donneurs de sang ont été étudiés. En utilisant la même fourchette de limite entre 450 et 

540 U/ml, une spécificité de 98,9 % a été obtenue en comparaison avec le test de la 

compagnie B. 

Caractéristiques de performance (étude externe) Sensibilité Spécificité 



français 21 

FR

Les résultats limites n'ont pas été pris en compte dans les calculs. 

Le test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG est adapté pour la détermination du 

statut immunitaire des femmes enceintes. 

Les taux d'hémoglobine jusqu'à 10 mg/ml dans le sérum n'avaient pas d'effet sur les 

résultats obtenus. 

L'étude d'un panel de sérums avec des activités d'anticorps contres des paramètres 

pouvant causer des réactions croisées (sérums avec des auto-anticorps, facteur 

rhumatoïde, EBV et la syphilis) n'ont pas révélé de preuve de résultats faux-positifs à 

cause des réactions croisées. 

L'infection avec le virus Epstein-Barr peut induire une stimulation polyclonale de la 

production des anticorps et donner des résultats d'anticorps IgM anti-toxoplasme fauxpositifs. 

En outre, il doit être noté que les anticorps IgM anti-toxoplasme peuvent persister 

pendant des mois ou même des années après disparition d'une infection. 


9.2 Reproductibilité 


La reproductibilité intra-essais a été déterminée en analysant des sérums ayant des 

réactivités différentes, 20 fois dans un même test. La reproductibilité inter-essais a été 

déterminée en testant des sérums ayant des réactivités différentes, 10 fois lors de 10 

essais indépendants, effectués pendant 5 jours différents. 

français 22 

Écart type 

Coefficient de Variation (CV %) = x 100 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG : 

Valeur moyenne 

Échantillon 

Valeur 

moyenne 

(DO) 

Intra-essai 

(CV %) 


(DO) 

Inter-essai 

(CV %) 

Faiblement positif 0,559 8,3 0,535 14,4 

positif 0,834 8,0 0,777 10,0 

Fortement positif 1,653 5,6 1,500 12,8

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM : 

Échantillon 

Valeur 

moyenne 

(DO) 

Intra-essai 

(CV %) 

français 23 


(DO) 

Inter-essai 

(CV %) 

Faiblement positif 0,302 5,1 0,202 9,9 

positif 0,938 4,8 0,936 6,5 

Fortement positif 1,146 5,3 1,142 5,8 


10 MESURES DE SÉCURITÉ 

10.1 Mises en garde 

Le test SERION ELISA classic est conçu pour être utilisé par un personnel compétent qui 

est familier avec les bonnes pratiques de laboratoire. 

Tous les réactifs de la trousse et les prélévements humains doivent être manipulés avec 

précaution, en usant des bonnes pratiques de laboratoire. 

- Cette trousse contient des composants du sang humain. Même si tous les sérums 

de contrôle et de seuil sont négatifs pour l'anticorps anti-VIH, HBs-Ag (Antigène de 

surface du virus de l'hépatite B) et l'anticorps anti-VHC, ils doivent être considérés 

comme potentiellement infectieux. 

- Il ne faut pas pipeter à la bouche. 

- Il ne faut pas fumer, consommer de la nourriture ou des boissons dans les endroits 

où les réactifs de la trousse ou les échantillons sont manipulés. 

- Utilisez des gants jetables et portez une blouse et des lunettes de protection lors de 

la manipulation des réactifs de la trousse ou des échantillons. Lavez-vous bien les 

mains après la manipulation. 

- Les échantillons de patient et autres produits potentiellement infectieux doivent être 

décontaminés après chaque série de tests. 

- Les réactifs doivent être stockés dans un endroit sûr et doivent être inaccessibles 

pour les personnes non autorisées, comme des enfants. 

- Solution d'arrêt : corrosif (C); provoque des brûlures acides (R34) 

Utilisez des lunettes de protection, des gants et une blouse lors de la manipulation! 

10.2 Élimination 

Veuillez respecter les dispositions légales pertinentes! 


FR

11 RÉFÉRENCES 













548-52. 


















273. 




français 24

Aggiornamenti 

Prestare attenzione alle differenze rispetto alla versione precedente. 

Versione attuale n.: V 18.11/12-1 

Versione precedente: V 17.11/08-1 

Aggiornamento del capitolo: 5, 7.2.1 


INDICE 

1 CAMPO DI APPLICAZIONE 

2 RILEVANZA DIAGNOSTICA 

3 PRINCIPIO DEL TEST SERION ELISA classic 

4 COMPONENTI DEL KIT 

5 MATERIALI NECESSARI, MA NON FORNITI 

6 CONSERVAZIONE E STABILITÀ 

7 PROCEDURA PER IL TEST SERION ELISA classic 

7.1 Segni di deterioramento 

7.2 Preparazione e conservazione dei campioni 

7.3 Preparazione dei reagenti del kit 

7.4 Schema riassuntivo della procedura 

7.5 Procedura manuale 

7.6 Procedura automatica 

7.7 Controllo positivo / controllo di accuratezza 

7.8 Determinazione dell’avidità 

7.9 Diagnostica neonatale 

8 VALUTAZIONE DEL TEST 

8.1 Quantificazione a singolo punto con il metodo 4PL 

8.2 Criteri di validità 

8.3 Calcolo SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 

8.4 Limiti di quantificazione 

8.5 Zona grigia 

8.6 Interpretazione dei risultati 

8.7 Valori di riferimento negli individui sani 

9 CARATTERISTICHE DI PRESTAZIONE 

9.1 Sensibilità e specificità 

9.2 Riproducibilità 

10 MISURE DI SICUREZZA 

10.1 Avvertenze 

10.2 Smaltimento 

11 BIBLIOGRAFIA 

versione attuale nr.: V 18.11/12-1 

versione precedente: V 17.11/08-1 

IT




Dosaggio immunoenzimatico per la determinazione degli anticorpi umani 

per uso diagnostico in vitro 


SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG N. di ordinazione: ESR110G 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM N. di ordinazione: ESR110M 

Pos: classic/Allgemeine 0\mod_1177351044007_33.doc 4 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ 173 classic/Kapitelüberschrift classic/Gültig @ 1 für alle Dokumente/ELISA 


1 CAMPO DI APPLICAZIONE 


I test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG e IgM sono immunodosaggi 

quantitativi e qualitativi per la determinazione nel siero o nel plasma degli anticorpi umani 

diretti contro Toxoplasma gondii. I dosaggi sono consigliati per determinare lo status 

immunitario e distinguere tra infezioni acute e recenti. Il test SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgM è indicato per la diagnosi delle infezioni acute. Gli anticorpi IgM 

diretti contro Toxoplasma gondii possono persistere a lungo. Il test SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgG, utilizzato in combinazione con il reagente di avidità SERION 

ELISA classic Toxoplasma gondii (n. di ordinazione: B110AVID), consente di determinare 

l’avidità degli anticorpi IgG per la differenziazione tra infezioni acute e recenti. Il test 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM è indicato per lo screening neonatale su 

gocce di sangue essiccato (dried blood spots, DBS). 


2 RILEVANZA DIAGNOSTICA 


Toxoplasma gondii, un eucariote appartenente al gruppo degli Sporozoi, è un parassita 

intracellulare obbligato a distribuzione mondiale. Tipica degli Sporozoi è l’alternanza di cicli 

di riproduzione sessuale (che si verifica solo nel gatto, l’ospite finale) e asessuale. 

Dopo assunzione orale, ad esempio con cibo contaminato, il microrganismo raggiunge 

l'intestino e il sistema reticoloendoteliale. Grazie alla disseminazione per via ematica, 

Toxoplasma gondii infetta svariati organi e tessuti dell’ospite. 

La prevalenza dell’infezione da Toxoplasma gondii nella popolazione generale è 

strettamente correlata all’età. Anche i fattori ambientali e lo stile di vita svolgono un ruolo 

importante e possono influire in misura significativa sulla sieroprevalenza che, in media, 

aumenta del 10% circa per decade di vita; entro i 50 anni di età, il 50% circa della 

popolazione è stato esposto al toxoplasma. 

Circa la metà delle infezioni da Toxoplasma gondii è inapparente, mentre il rimanente 50% 

presenta, dopo un periodo di incubazione di una-tre settimane, solo sintomi aspecifici 

come febbre non elevata, esaurimento, cefalea e dolore muscolare e articolare. Una 

minoranza di pazienti manifesta febbre fino a 39 °C e gonfiore dei linfonodi cervicali. 

Nell’1% dei bambini e giovani adulti infetti possono presentarsi complicanze come 

miocardite, meningite o polmonite. 

Dopo la guarigione, Toxoplasma gondii persiste nei tessuti infettati grazie alla formazione 

di cisti resistenti alle difese immunitarie. Nei soggetti immunocompetenti l’infezione latente 

non si riattiva, probabilmente grazie alla continua stimolazione del sistema immunitario da 

parte degli antigeni del toxoplasma, e si instaura un’immunità permanente. 

Lo screening durante la gravidanza, nel contesto delle misure preventive generali, è di 

vitale importanza. Il parassita può essere trasmesso al feto per via transplacentare 

italiano 2

durante qualsiasi fase della gravidanza, ma il momento della trasmissione influisce sugli 

esiti clinici per il feto. 

1 o trimestre 17 % (più spesso aborto, raramente danni gravi al nascituro) 

2 o trimestre 24 % (danni fetali moderati o gravi) 

3 o trimestre 64 % (danni lievi o danni che si manifestano tardivamente dopo la nascita) 

Il rischio di infezione del nascituro tramite trasmissione transplacentare è limitato alle 

donne sieronegative che contraggono un’infezione primaria durante la gravidanza. In 

Germania, la frequenza è di due-sette neonati infetti per 1.000 nati vivi. 

Poiché gli anticorpi IgM anti-toxoplasma possono persistere per mesi o anni dopo 

l’infezione, il rilevamento di anticorpi IgM specifici durante la gravidanza non è un segno 

definitivo di infezione attiva da toxoplasma. Nei sieri positivi per le IgM, l’analisi dell’avidità 

consente la differenziazione tra infezione primaria e infezione pregressa, perché gli 

anticorpi IgG ad alta avidità sono segno di infezione pregressa. 

Mentre, immediatamente dopo la nascita, solo l’1-3 % dei neonati infetti presenta segni 

clinici di toxoplasmosi, fino all’80 % dei bambini con infezione subclinica manifesta danni 

tardivi e sintomi clinici gravi. Il test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM è utile 

per lo screening dei neonati infetti asintomatici. Il test viene eseguito su campioni di 

sangue essiccato su comune carta bibula (vedere le istruzioni specifiche per il test 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii neonatal). Il rilevamento di anticorpi specifici 

IgM nei neonati è riconducibile a un’infezione intrauterina o acuta del bambino, perché la 

diffusione di anticorpi materni attraverso la placenta può essere esclusa a causa delle 

dimensioni degli anticorpi. In presenza di infezione da Toxoplasma gondii, una terapia 

precoce dei neonati infetti consente di prevenire molte manifestazioni cliniche. 

L’infezione da Toxoplasma gondii fino a due settimane prima dell’inizio della gravidanza 

conferisce un’immunità protettiva. Se si pianifica una gravidanza, è opportuno determinare 

lo status immunitario. 

In presenza di infezione primaria materna trattata con chemioterapia, il rischio di 

trasmissione al feto si riduce del 75 % circa. 

La riattivazione di un’infezione latente può conseguire a un’immunosoppressione naturale 

o iatrogena. Dopo soppressione del sistema immunitario è stata osservata l’attivazione di 

infezioni latenti. Nei pazienti con AIDS, l’encefalite da toxoplasma è un’importante causa di 

decesso. 


3 PRINCIPIO DEL TEST SERION ELISA classic 

Il test ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay, dosaggio immunoenzimatico) è un 

immunodosaggio particolarmente indicato per la determinazione degli anticorpi nel campo 

della sierologia infettiva. La reazione si basa sull’interazione specifica degli anticorpi con 

gli antigeni corrispondenti. Le strisce reattive della piastra per microtitolazione del test 

SERION ELISA classic sono rivestite con antigeni specifici dell’agente patogeno di 

interesse. Se il siero del paziente contiene gli anticorpi specifici, questi si legano 

all’antigene fissato sulle strisce. Un anticorpo secondario, coniugato con l’enzima fosfatasi 

alcalina, rileva e lega il complesso immune. Il substrato incolore p-nitrofenilfosfato è quindi 

convertito nel composto colorato p-nitrofenolo. L’intensità di segnale del prodotto della 

reazione è proporzionale alla concentrazione dell’analita nel campione e viene misurata 

con metodo fotometrico. 

italiano 3 

IT




4 COMPONENTI DEL KIT 

Componenti del test Pezzi / 

volume 

Strisce reattive per microtitolazione separabili, ciascuna con otto pozzetti 

singoli rivestiti da antigene 

(96 in totale) MTP , 

1 telaio. 

Il materiale di rivestimento è inattivato. 

Siero standard (pronto per l’uso) STD 

Siero umano in tampone fosfato contenente proteine; 

negativo per anti-HIV Ab, HBs-Ag (antigene di superficie del virus dell’epatite B) e 

anti-HCV Ab; 

conservante: sodio azide < 0,1 %; 

colorante: amaranto O. 

Siero di controllo negativo (pronto per l’uso) NEG 

Siero umano in tampone fosfato contenente proteine; 

negativo per anti-HIV Ab, HBs-Ag (antigene di superficie del virus dell’epatite B) e 

anti-HCV Ab; 


colorante: verde di lissamina V. 

Coniugato anti- IgA, IgG o IgM umane (pronto per l’uso) APC 

Anticorpo policlonale anti-IgA, IgG o IgM umane, 

coniugato con fosfatasi alcalina, stabilizzato con soluzione stabilizzante contenente 

proteine; 

conservanti: metilisotiazolone 0,01 %, bromonitrodiossano 0,01 %. 

Soluzione di lavaggio concentrata (sufficiente per 1000 ml) WASH 

Soluzione di sodio cloruro con Tween 20 e Tris/HCl 30 mM, pH 7,4; 

conservante: sodio azide < 0,1 %, 

Tampone di diluizione DILB 

Tampone fosfato contenente proteine, con Tween 20; 


colorante: blu di bromofenolo 0,01 g/l. 

Soluzione di arresto STOP 

Sodio idrossido 1,2 N 

Substrato (pronto per l’uso) pNPP 

Para-nitrofenilfosfato in tampone privo di solvente; 

conservante: sodio azide < 0,1 % 

(Il substrato nel flacone chiuso può avere un colore leggermente giallo, che non 

compromette la qualità del prodotto!) 

Certificato di controllo qualità con curva standard e tabella di valutazione INFO 

(Quantificazione degli anticorpi in UI/ml o U/ml). 

italiano 4 

12 pezzi 

2 x 2 ml 

2 ml 

13 ml 

33,3 ml 

2 x 50 ml 

15 ml 

13 ml 

2 pagine 

Pos: 10 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für mehrere Dokumente/Zusätzlich 

benötigte Materialien/Z200 Zusätzlich benötigte Materialien (für Teste mit IgM- 

Nachweis) @ 9\mod_1316422545600_33.doc @ 36493 @ 1

5 MATERIALI NECESSARI, MA NON FORNITI 

- normale equipaggiamento di laboratorio 

- per la determinazione delle IgM: adsorbente SERION Rf, n. di ordinazione Z200 

(20 ml) 

- fotometro per piastre da microtitolazione con filtro, lunghezza d’onda 405 nm, 

lunghezza d’onda di riferimento consigliata 620 nm - 690 nm (ad es. 650 nm) 

- incubatore a 37 °C 

- camera umida 

- acqua distillata 

- Click-Clips (n. di ordinazione VT120) 


classic/Lagerung und Haltbarkeit/Lagerung und Haltbarkeit @ 

4\mod_1255343176800_33.doc @ 21243 @ 1 

italiano 5 

IT

6 CONSERVAZIONE E STABILITÀ 

Reagente Conservazione Stabilità 

Strisce per 

microtitolazione 

(rivestite con 

antigene) 

Sieri di controllo / sieri 

standard 

non aperto 

dopo l’apertura a 2 – 8 °C nella busta di alluminio 

chiusa, con essiccante 

Le strisce non utilizzate devono essere conservate 

all’asciutto nella busta di alluminio chiusa. 

italiano 6 

vedere data di 

scadenza; 

validità minima: quattro 

settimane; 

validità in caso di uso 

e conservazione 

corretti fino alla data di 

scadenza 

dopo l’apertura a 2 – 8 °C vedere data di 

scadenza; 

Coniugato soluzione pronta per l’uso a 2 – 8 °C 

Tampone di diluizione non aperto 

Evitare le contaminazioni, ad es. utilizzando puntali 

sterili. 

dopo l’apertura a 2 – 8 °C 

Gettare via le soluzioni torbide. 

Soluzione di lavaggio concentrata dopo l’apertura a 2 – 8 °C 

alla diluizione di lavoro a 2 – 8 °C 

alla diluizione di lavoro a temperatura ambiente 

I flaconi usati per le diluizioni di lavoro devono essere 

lavati regolarmente. Gettare via le soluzioni torbide. 

Substrato soluzione pronta per l’uso a 2 – 8 °C, al riparo dalla 

luce 

Evitare le contaminazioni, ad es. utilizzando puntali 

sterili. 

Eliminare la soluzione se vira verso il giallo 

(estinzione contro acqua distillata > 0,25 OD).) 

24 mesi dopo la data 

di produzione 


scadenza; 


di produzione 


scadenza; 


di produzione; 

24 mesi 


scadenza; 

2 settimane; 

1 settimana 


scadenza; 


di produzione 

Soluzione di arresto dopo l’apertura a temperatura ambiente vedere data di 

scadenza 

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Überschrift: Durchführ ung @ 0\mod_1184679699953_33.doc @ 2476 @ 1

7 PROCEDURA PER IL TEST SERION ELISA classic 


7.1 Segni di deterioramento 

Utilizzare solo i reagenti SERION ELISA classic con gli immunodosaggi SERION ELISA 

classic. I componenti non devono essere sostituiti con reagenti di altri produttori. I sieri 

standard e di controllo degli immunodosaggi SERION ELISA classic sono destinati 

esclusivamente all’uso con il kit corrispondente e non devono essere utilizzati con altri lotti. 

Il tampone di diluizione, la soluzione di lavaggio, il substrato e la soluzione di arresto 

possono essere utilizzati con tutti gli immunodosaggi SERION ELISA classic, 

indipendentemente dal numero di lotto e dal test. 

Per ogni classe immunoglobulinica, il coniugato è disponibile in tre differenti 

concentrazioni: BASSA, MEDIA, ALTA. La concentrazione è riportata sull’etichetta nel 

modo seguente: 

ad es. IgG + coniugato IgG a concentrazione bassa 

IgG ++ coniugato IgG a concentrazione media 

IgG +++ coniugato IgG a concentrazione alta 

In casi rari è necessario utilizzare un coniugato speciale per garantire una qualità costante 

dei nostri prodotti. I coniugati speciali vengono prodotti con un numero di lotto distinto, non 

recano il segno “+” e non sono intercambiabili con altri coniugati. 

Prestare la massima attenzione alle informazioni riportate sull’etichetta! 

Finché sono chiusi e conservati correttamente, tutti i componenti dei test SERION ELISA 

classic possono essere utilizzati fino alla data di scadenza riportata sulle etichette. I 

reagenti non possono essere utilizzati dopo la data di scadenza. 

La diluizione o qualsiasi modifica apportata ai reagenti può comportare una perdita di 

sensibilità. 

Non esporre i reagenti alla luce intensa durante la conservazione e l’incubazione. Dopo 

l’uso, i reagenti devono essere chiusi saldamente per evitare l’evaporazione e la 

contaminazione. 

Per aprire la busta di alluminio della piastra per microtitolazione, tagliare solo l’estremità 

del lato appositamente contrassegnato, per poter richiudere correttamente la busta. Non 

utilizzare le strisce se la busta di alluminio risulta danneggiata o se la busta contenente le 

strisce rimanenti e l’agente essiccante non è stata richiusa correttamente. 

Per evitare contaminazioni, utilizzare tecniche asettiche per prelevare aliquote dalle 

provette dei reagenti. Per evitare risultati falsamente positivi, prestare attenzione a non 

toccare o bagnare con la pipetta la parte superiore delle pareti dei pozzetti quando si 

dispensa il coniugato. Prestare attenzione a non scambiare i tappi dei flaconi e/o dei 

flaconcini. 

italiano 7 

IT

Per ottenere risultati riproducibili, mescolare con cura i reagenti. Prima dell’uso, agitare i 

contenitori dei sieri di controllo e tutti i campioni dopo la diluizione (ad es. utilizzando un 

vortex). 

Pipettare con attenzione e attenersi ai tempi e alle temperature di incubazione indicati. Se, 

quando si dispensano i campioni e i sieri di controllo, il coniugato o il substrato, trascorre 

un arco di tempo significativo tra la pipettata nel primo pozzetto e la pipettata nell'ultimo 

pozzetto della piastra da microtitolazione, possono derivarne tempi di pre-incubazione 

differenti, con conseguenti effetti sulla precisione e la riproducibilità dei risultati. 

Solo attenendosi scrupolosamente alle istruzioni è possibile ottenere risultati ottimali. 

L’immunodosaggio SERION ELISA classic è valido solo se vengono rispettati i criteri di 

validazione specifici per ogni lotto, riportati nel certificato di controllo qualità. 

Un lavaggio corretto consente di evitare risultati non specifici. Pertanto, la procedura di 

lavaggio deve essere effettuata con cura. Riempire tutti i pozzetti a fondo piatto con volumi 

uguali di tampone di lavaggio. Al termine di questa procedura, assicurarsi che non 

rimangano residui del tampone di lavaggio nei pozzetti, per evitare effetti di diluizione non 

controllabili. Evitare la formazione di schiuma! 

Per evitare confusioni, prestare attenzione a non danneggiare la scritta (agente patogeno / 

classe anticorpale) sulle strisce reattive per microtitolazione durante le procedure di 

lavaggio e aspirazione. 


7.2 Preparazione e conservazione dei campioni 

I campioni lipemici, emolitici o itterici (siero o plasma) devono essere analizzati solo con 

cautela. Campioni contaminati non devono essere analizzati. Sono campioni idonei i 

campioni di siero o plasma (EDTA, citrato, eparina) prelevati secondo le metodiche 

standard di laboratorio. I campioni non devono essere sottoposti ad inattivazione termica. 


7.2.1 Diluizione dei campioni 

Prima dell’analisi, i campioni dei pazienti (V1) devono essere diluiti nel tampone di 

diluizione (V2) nel modo seguente: 



V1 + V2 = 1+100 aggiungere 10 µl di campione del paziente 

italiano 8 

a ogni 1.000 µl di tampone di diluizione 


Dopo la diluizione e prima di dispensare i campioni nella piastra per microtitolazione, i 

campioni devono essere miscelati con cura per ottenere una soluzione omogenea. 

Pos: 18 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/Toxoplasma: Probenver dünnung, T eil 2 Überschrift @ 0\mod_1188812811112_33.doc @ 9364 @


Pos: Dokumente/Testdurchführung/Probenverdünnung: mit IgM-Nachweis) 19 /Arbeitsanleitungen @ 9\mod_1316422765852_33.doc ELISA classic/Gültig für @ Rheumafaktor-Interferenz mehrere 36510 @ 

(für Tests 

Interferenza con i fattori reumatoidi 

I fattori reumatoidi sono autoanticorpi appartenenti principalmente alla classe IgM, che si 

legano preferenzialmente ai complessi immuni IgG. La presenza di anticorpi IgM non 

specifici (fattori reumatoidi) può causare risultati falsamente positivi nel dosaggio delle 

IgM. Inoltre, esiste la possibilità che gli anticorpi IgG con legame forte competano con gli 

anticorpi IgM patogeno-specifici con legame debole per il legame all’antigene adeso sulla 

micropiastra, di conseguenza gli anticorpi IgG si legano all’ antigene al posto degli 

anticorpi IgM patogeno-specifici ottenendo un risultato falsamente negativo per le IgM. 

Pertanto, è necessario pretrattare i campioni con un adsorbente del fattore reumatoide 

prima di determinare le IgM (SERION Rf-Absorbent, n. di ordinazione: Z200 (20 ml/100 

test)). Per l’adsorbimento del Rf, incubare il campione del paziente in tampone di 

diluizione Rf per 15 minuti a temperatura ambiente oppure per una notte a 4 °C. La 

procedura è descritta in un manuale di istruzioni distinto. 


Prima dell’analisi, l’adsorbente del fattore reumatoide (V1) deve essere diluito 1+4 nel 

tampone di diluizione (V2). 

V1 + V2 = V3 (1 + 4) aggiungere 200 µl di adsorbente Rf 

italiano 9 

a ogni 800 µl di tampone di diluizione 

I campioni dei pazienti (V4) devono essere diluiti in questo tampone di diluizione Rf (V3): 

V4 + V3 = 1 +100 aggiungere 10 µl di campione del paziente 

a ogni 1.000 µl di tampone di diluizione Rf 


Dopo la diluizione e prima di dispensare i campioni nella piastra per microtitolazione, i 

campioni devono essere miscelati con cura per ottenere una soluzione omogenea. 


7.2.2 Conservazione dei campioni 

Non conservare i campioni dei pazienti per più di 7 giorni a 2 – 8 °C. Per una durata più 

lunga dei campioni conservare a temperature ≤ - 20 °C. Evitare di congelare e scongelare 

ripetutamente i campioni. I campioni diluiti possono essere conservati per una settimana a 

2 – 8 °C. 

classic/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung, 4\mod_1255343795606_33.doc Pos: 23 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 21307 classic/Gültig @ 233 für Teil alle 1 Dokumente/ELISA 

@ 

IT

7.3 Preparazione dei reagenti del kit 

Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente prima dell’uso. 

7.3.1 Strisce reattive per microtitolazione 

Le strisce reattive per microtitolazione inserite in un telaio sono confezionate in una 

busta di alluminio con un agente essiccante. Prelevare dal telaio i pozzetti non 

necessari e riporli nella busta di alluminio. Chiudere la busta con cura per garantire 

la chiusura ermetica. 

7.3.2 Sieri di controllo / sieri standard 

I sieri di controllo e i sieri standard sono pronti per l’uso e non devono essere 

ulteriormente diluiti. I sieri di controllo e i sieri standard devono essere inclusi in ogni 

analisi, indipendentemente dal numero di strisce reattive per microtitolazione 

utilizzate. I sieri standard devono essere analizzati in duplicato. 


Non trattare i sieri di controllo con l’adsorbente Rf. 


7.3.3 Coniugato AP anti- IgA, IgG o IgM umane (pronto per l’uso) 

I coniugati con la medesima concentrazione e della stessa classe 

immunoglobulinica sono intercambiabili. Evitare la contaminazione dei coniugati 

pronti per l’uso, ad es. utilizzando puntali sterili. 

7.3.4 Soluzione di lavaggio 

Diluire la soluzione di lavaggio concentrata (V1) 1:30 con acqua distillata, per un 

volume finale di V2. 

Esempio: 

italiano 10 

Tampone concentrato (V1) Volume finale(V2) 

33.3 ml 1.000 ml 

1.0 ml 30 ml 

7.3.5 Tampone di diluizione per campioni (pronto per l’uso) 

7.3.6 Substrato (pronto per l’uso) 

Evitare la contaminazione della soluzione substrato pronta per l’uso, ad es. 

utilizzando puntali sterili. 

7.3.7 Soluzione di arresto (pronta per l’uso) 

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/Ü berschrift Testablauf @ 0\mod_1180955922843_33.doc @ 736 @ 2

7.4 Schema riassuntivo della procedura 


italiano 11 



analisi quantitativa 

Per il rilevamento delle IgM eseguire l’adsorbimento del fattore reumatoide, vedere n. 

7.2.1; Incubare 15 minuti a temperatura ambiente o tutta la notte a 4°C 


diluizione del campione 1 

(campioni dei pazienti) 

1+100 

Dispensare i campioni diluiti e i sieri di controllo / 

standard pronti per l’uso nei pozzetti per microtitolazione (100 µl) 

 

INCUBAZIONE 60 min/ 37 °C 

camera umida 

 

LAVARE (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Dispensare la soluzione di coniugato APC (100 µl) 

 

INCUBAZIONE 30 min./ 37 °C 

camera umida 

 

LAVARE (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Dispensare la soluzione di substrato pNPP (100 µl) 

 

INCUBAZIONE 30 min./ 37 °C 

camera umida 

 

Dispensare la soluzione di arresto STOP (100 µl) 

 

LEGGERE L’ESTINZIONE a 405 nm 

1 Tamponi di diluizione speciali per i seguenti test SERION ELISA classic: 

Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG, Parvovirus B19 IgM e Hantavirus Puumala IgG, IgM 


2 Per uso manuale: 

al termine della procedura di lavaggio, picchiettare la piastra su carta bibula. 

IT

7.5 Procedura manuale 

1. Collocare la quantità necessaria di pozzetti nel telaio e preparare un foglio 

protocollo. 

2. Aggiungere 100 µl di campione diluito o dei controlli pronti per l’uso nei 

pozzetti corrispondenti delle strisce reattive per microtitolazione. Lasciare vuoto un 

pozzetto per il bianco substrato, ad es.: 

IgG/IgM analisi quantitativa 

pozzetto n. 

pozzetto A1 Bianco substrato 

pozzetto B1 Controllo negativo 

pozzetto C1 Siero standard 

pozzetto D1 Siero standard 

pozzetto E1 Paziente 1… 

3. Incubare i campioni per 60 minuti (+/- 5 min) a 37 °C (+/- 1°C) in camera umida 

4. Dopo l’incubazione, lavare tutti i pozzetti con la soluzione di lavaggio (con 

dispositivo automatico o manualmente): 

- aspirare o gettare via la soluzione di incubazione rovesciando la piastra per 


- riempire ogni pozzetto con 300 µl di soluzione di lavaggio 

- aspirare o gettare via la soluzione di lavaggio rovesciando la piastra per 


- ripetere per 3 volte la procedura di lavaggio (per un totale di 4 lavaggi!) 

- asciugare picchiettando la piastra per microtitolazione su carta bibula 

5. Aggiunta del coniugato 

Aggiungere 100 µl del coniugato IgG/IgM pronto per l’uso ai pozzetti corrispondenti 

(ad eccezione del bianco substrato) 

6. Incubare il coniugato per 30 minuti (+/- 1 min)* a 37 °C (+/- 1 °C) in camera 

umida. 

7. Dopo l’incubazione, lavare tutti i pozzetti con la soluzione di lavaggio (come sopra) 

8. Aggiunta del substrato 

Aggiungere a ogni pozzetto 100 µl della soluzione di substrato pronta per l’uso 

(compreso il pozzetto per il bianco substrato!) 

9. Incubare il substrato per 30 minuti (+/- 1 min)* a 37 °C (+/- 1 °C) in camera umida. 

10. Arresto della reazione 

Aggiungere a ogni pozzetto 100 µl di soluzione di arresto e miscelare scuotendo 

leggermente la piastra per microtitolazione. 

11. Determinare l’estinzione 

Determinare la densità ottica (OD) entro 60 minuti a 405 nm contro il bianco 

substrato; lunghezza d’onda di riferimento tra 620 nm e 690 nm (ad es. 650 nm). 

_____________________ 

* Si prega di notare che, in particolari condizioni di lavoro, possono essere necessarie 

modifiche interne al laboratorio dei tempi di incubazione. 


italiano 12

7.6 Procedura automatica 

I SERION ELISA possono essere analizzati con strumenti automatici e validati sia con 

Immunomat TM , sia con DYNEX DSX ® e DS2 ® . L’analisi automatica viene effettuata 

analogamente alla procedura manuale. Si prega di notare che, in particolari condizioni di 

lavoro, possono essere necessarie modifiche interne di laboratorio ai tempi di incubazione. 


7.7 Controllo positivo / controllo di accuratezza 

Per la verifica periodica del metodo di analisi, in conformità ai requisiti dei sistemi di 

gestione qualità interni al laboratorio, raccomandiamo l’uso dei controlli SERION ELISA 

controls per determinare la precisione e l’affidabilità delle analisi effettuate con SERION 

ELISA classic. L’uso dei SERION ELISA controls è descritto nei manuali di istruzioni 

specifici. 


7.8 Determinazione dell’avidità 

Il test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG, in combinazione con il 

corrispondente reagente di avidità SERION ELISA classic, consente di determinare 

l’avidità degli anticorpi IgG specifici per l’agente patogeno. La determinazione dell’avidità è 

consigliata per facilitare la differenziazione tra infezione primaria acuta e infezione 

pregressa, in particolanre in occasione delle indagini sierologiche effettuate durante la 

gravidanza. La procedura è descritta in un manuale di istruzioni distinto. Il programma 

software SERION avidity basato su Excel aiuta e permette il calcolo degli indici di avidità 

SERION. 


7.9 Diagnostica neonatale 

Il test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM è stato validato per il rilevamento 

degli anticorpi umani IgM specifici per l’agente patogeno nei campioni di sangue 

neonatale. Lo screening neonatale può essere condotto sugli abituali “dried blood spots” 

(DBS), sangue neonatale essiccato prelevato dal tallone e applicato su carta bibula dal 

diametro di 1/8 pollici (3,2 mm). La procedura è descritta in un manuale di istruzioni 

distinto. 


italiano 13 

IT

8 VALUTAZIONE DEL TEST 



8.1 Quantificazione a singolo punto con il metodo 4PL 

Una corrispondenza ottimale dei segnali di estinzione con i valori quantitativi è data dalle 

funzioni non lineari, che consentono di correlare le curve sigmoidali direttamente, senza 

ulteriore trasformazione, ai valori OD. La determinazione della concentrazione anticorpale 

con il SERION ELISA classic viene effettuata con il modello logistic-log a 4 parametri (4 

PL), ideale per una corrispondenza esatta della curva. Il modello si basa sulla formula 

seguente: 

OD = A + 

1 + e 

italiano 14 

D - A 


I parametri A, B, C e D rappresentano l'andamento esatto della curva: 

1. asintoto inferiore parametro A 

2. pendenza della curva parametro B 

3. punto di flesso parametro C 

4. asintoto superiore parametro D 

L’Istituto Virion\Serion GmbH (Würzburg, Germania) determina le curve standard per 

ciascun lotto in test ripetuti e in condizioni ottimali. Non è più quindi necessaria una lunga 

e dispendiosa costruzione della curva standard da parte dell’utilizzatore. 

Per la determinazione delle concentrazioni anticorpali, una curva standard e una tabella di 

valutazione specifiche per il lotto sono allegate a ogni kit SERION ELISA classic. Il 

software di valutazione SERION evaluate e il software basato su Microsoft ® Excel 

SERION activity sono disponibili su richiesta. 

Per compensare le normali oscillazioni e per valutare il test di controllo, in ogni test viene 

utilizzato un siero standard. Il controllo qualità del produttore determina il valore di 

riferimento e l’ambito di validità del siero di controllo. All’interno di tale ambito si 

garantisce la quantificazione corretta della concentrazione anticorpale. 

Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Testgültig kei tskriterien @ 4\mod_1255348317229_33.doc @ 21435 @ 2

8.2 Criteri di validità 

- Il bianco substrato deve essere < 0,25 OD. 

- Il controllo negativo deve fornire un risultato negativo. 

- Con i test quantitativi SERION ELISA classic, il valore OD medio (dopo sottrazione 

del bianco substrato!) del siero standard deve essere compreso nel range di 

validità, riportato nel certificato di controllo qualità specifico per ogni lotto. 

- Le oscillazioni dei valori OD del siero standard non devono superare il 20 %. 

Se questi criteri non sono soddisfatti, il test non è valido e deve essere ripetuto. 


8.3 Calcolo SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 


L’attività anticorpale espressa in UI/ml (Unità Internazionali/ml) nel test SERION ELISA 

classic Toxoplasma gondii IgG è conforme al secondo Standard Internazionale per 

Toxoplasma gondii (1980), con 2.000 UI per flaconcino. La quantificazione del test 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM si basa sul terzo Standard Internazionale 

per Toxoplasma gondii (1994), con un’attività dichiarata di anticorpi IgM di 3.000 U per 

flaconcino). Questo standard internazionale non è ancora generalmente riconosciuto, 

perché non è stato possibile stabilire uno standard generale per la determinazione degli 

anticorpi IgM. Pertanto, i risultati del test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM 

sono espressi in U/ml. 


8.3.1 Valutazione non automatica 

Per la valutazione dei test, al kit SERION ELISA classic sono allegati un certificato di 

controllo qualità con curva standard e una tabella di valutazione specifici per ogni lotto, per 

poter correlare i valori OD ottenuti alla corrispondente attività anticorpale. Il bianco 

substrato deve essere sottratto da tutti i valori OD prima della valutazione. 


s 

Metodo 1: determinazione qualitativa 

Per fissare gli ambiti di cut-off, moltiplicare il valore medio di OD dello standard con i 

numeri riportati nel certificato di controllo qualità (vedere le formule per determinazioni 

particolari),ad es.: 

OD = 0,502 x MW(STD) con cut-off superiore 

OD = 0,352 x MW(STD) con cut-off inferiore 

Se il valore di assorbanza medio del siero standard è 0,64 OD, il range del cut-off è 

compreso tra 0,225 e 0,321 OD. 

italiano 15 

IT

Metodo 2: 


Determinazione continua dell’attività anticorpale tramite la curva standard 

Le cosiddette variazioni intersaggio (oscillazioni che possono verificarsi di giorno in giorno 

e di laboratorio in laboratorio) vengono compensate moltiplicando il valore misurato nel 

campione del paziente con il fattore di correzione F. Il fattore di correzione è calcolato nel 

modo seguente: 

F = 

italiano 16 

valore OD di riferimento (del siero standard) 

valore OD attuale (del siero standard) 

Questa procedura è necessaria per correlare il livello attuale del test effettuato 

dall’utilizzatore alla curva standard specifica per il lotto. Innanzitutto, le deviazioni 

giornaliere devono essere corrette con il calcolo del fattore di correzione F. 

1. Calcolare la media dei due valori OD del siero standard e verificare che rientrino nel 

range di validità prestabilito. 

2. Calcolo del fattore F: il valore di riferimento viene diviso per la media di estinzione 

del siero standard: 

F = valore di riferimento estinzione siero STD / valore medio estinzione siero STD. 

3. Tutti i valori determinati con i campioni dei pazienti vengono moltiplicati per F. 

4. Le attività anticorpali espresse in UI/ml o U/ml possono essere determinate tramite 

la curva standard con i valori corretti. 

Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_33.doc @ 21355 @ 3

8.3.2 Valutazione automatica del test con il software SERION evaluate 

Inserendo i quattro parametri e il valore di riferimento del siero standard, le attività 

anticorpali vengono calcolate online dal software di valutazione SERION evaluate in base 

alle analisi effettuate e misurate con SERION ELISA classic . 

Se la densità ottica dello standard non è compresa nel range di validità, apparirà il 

seguente messaggio (in lingua inglese). 

“Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” oppure 

“Standard value differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.” 

In questi casi, l’analisi non è valida e deve essere ripetuta. 

I parametri e il valore di riferimento devono essere modificati solo in occasione del cambio 

di lotto (la tabella di valutazione riporta i parametri e i valori di riferimento). L’inserimento 

corretto dei dati specifici per il lotto può essere controllato in base all’attività (in UI/ml o 

U/ml) assegnata al siero standard. Il valore medio calcolato in unità deve corrispondere al 

valore in unità riportato nel certificato specifico del lotto. Viene effettuata una correzione 

automatica dei valori misurati. Nella versione standard, la stampa riporta quanto segue: 


8.4 Limiti di quantificazione 

italiano 17 

Codice campione 

Valore OD 

UI/ml o U/ml 

Valutazione 

I limiti di quantificazione sono specificati nel certificato di controllo qualità del test SERION 

ELISA classic. La linearità della diluizione in questo ambito è stata dimostrata in ampi studi 

di validazione. Qualora un campione di un paziente fornisca un risultato superiore al limite 

di quantificazione superiore, può essere analizzato a una diluizione maggiore. L’attività 

anticorpale così determinata deve essere moltiplicata per il fattore di diluizione 

addizionale. 


8.5 Zona grigia 

La zona grigia del test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM è specificata 

nel certificato di controllo qualità e indica i valori del test della zona grigia. I valori dei 

campioni dei pazienti inferiori a tale zona grigia indicano un risultato negativo, mentre i 

valori superiori alla zona grigia sono considerati positivi. Se i risultati sono all’inerno della 

zona grigia non è possibile un’interpretazione definitiva dei dati. In questi casi, ripetere il 

test in parallelo con un nuovo campione prelevato dopo una o due settimane (coppia di 

sieri). 

Pos: 45 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/T oxopl asma/T oxopl asma: Gr enzwertbereich - Z usatz @ 9\mod_1312357599387_33.doc @ 36022 @ 

IT

Si raccomanda di utilizzare il test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM con i 

valori di zona grigia indicati, pari a 300 – 350 U/ml. Tuttavia, il dosaggio può essere 

interpretato utilizzando una soglia alternativa superiore di 450 – 540 U/ml, per evitare il 

rilevamento di anticorpi IgM persistenti a bassa attività. In realtà, gli anticorpi IgM diretti 

contro Toxoplasma gondii raggiungono livelli elevati poco dopo l’infezione. Questa 

circostanza giustificherebbe l’uso di valori di zona grigia superiori, pari a 450-540 U/ml. 

Inoltre, nei pazienti infetti si rilevano spesso livelli differenti di anticorpi IgM per periodi 

prolungati. I valori di zona grigia elevati riducono al minimo il numero di sieri positivi con 

anticorpi IgM persistenti e l’incidenza di eventi positivi irrilevanti. Ciò nonostante, è 

preferibile utilizzare i valori inferiori di zona grigia compresi tra 300 e 350 U/ml, per ridurre 

la probabilità di mancato rilevamento di un’infezione primaria. (Lappalainen, M. e Hedman, 

K., 2004). Di conseguenza, si otterrà un numero maggiore di risultati positivi per le IgM 

anti-Toxoplasma gondi, i quali dovranno essere valutati e classificati come infezione acuta 

o pregressa tramite analisi successive, ad esempio con la determinazione dell’avidità delle 

IgG. 


8.6 Interpretazione dei risultati 


L’Istituto Robert Koch raccomanda la diagnosi sierologica nelle donne in gravidanza. Il test 

SERION ELISA classic Toxoplasma IgG può essere utilizzato per lo screening. Un 

risultato negativo nel test SERION ELISA classic Toxoplasma IgG (

Per l'interpretazione dei risultati si fa riferimento alla tabella seguente (Istituto Robert 

Koch). 

IgG IgM AVIDITÀ IgG RISULTATO PROBABILE 

POSITIVO NEGATIVO ---------- INFEZIONE INATTIVA, LATENTE 

POSITIVO POSITIVO ALTA INFEZIONE PREGRESSA O LATENTE 

(INATTIVA) 

POSITIVO POSITIVO BASSA POSSIBILE INFEZIONE ACUTA, QUINDI 

NECESSITÀ DI CONFERMA CON ALTRI 

METODI / MONITORAGGIO CLINICO 


8.7 Valori di riferimento negli individui sani 


L’analisi di sieri di donatori di sangue scelti a caso, provenienti dalla Germania 

meridionale, con il test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG ha fornito i seguenti 

risultati. Su 50 sieri analizzati, 31 (62 %) sono risultati positivi e 19 (38 %) negativi. Questo 

risultato è in linea con i dati pubblicati in letteratura, secondo i quali la sieroprevalenza 

nella popolazione generale è altamente variabile, a seconda delle abitudini alimentari e 

dell’età. L’età e le abitudini alimentari dei donatori di sangue partecipanti a questo studio 

non sono note. 


9 CARATTERISTICHE DI PRESTAZIONE 


9.1 Sensibilità e specificità 


Per determinare le caratteristiche di prestazione del test SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgG, 450 sieri di pazienti e di soggetti sani sono stati analizzati in uno 

studio esterno in parallelo con un test di immunofluorescenza indiretta. I risultati indicano 

una sensibilità del 98,2 % e una specificità del 99,4 %. 

È stato inoltre condotto uno studio interno su campioni di siero di 1.000 donne in 

gravidanza. Nuovamente è stata utilizzata l’immunofluorescenza indiretta come metodo di 

riferimento e i risultati discordanti sono stati controllati con il test di Sabin-Feldman. I 

risultati indicano una sensibilità del 97,8 % e una specificità del 99,8 %. 

Per determinare la sensibilità e specificità del test SERION ELISA classic Toxoplasma 

gondii IgM è stato condotto uno studio esterno con 256 sieri, tra cui 104 campioni positivi, 

utilizzando come confronto due test IgM disponibili in commercio (dei produttori A e B). I 

sieri positivi per le IgM sono stati individuati con il test Toxoplasma IgM del produttore A. 

Impostando una zona grigia compresa tra 450 e 540 U/ml, 19 sieri positivi non sono stati 

riconosciuti tali e sette di questi provenivano da soggetti con potenziale infezione acuta. In 

questo studio, la sensibilità del test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM è stata 

superiore alla sensibilità del test del produttore B, nel quale sono stati ottenuti risultati 

negativi con 28 dei 104 sieri positivi. 

italiano 19 

IT

Utilizzando una zona grigia compresa tra 450 e 540 U/ml, la specificità del test SERION 

ELISA classic è stata del 98,6 % in confronto al test del produttore A. 

Con una zona grigia compresa tra 300 e 350 U/ml, undici sieri positivi non sono stati 

riconosciuti tali. Considerando i risultati di altre analisi e il contesto clinico, solo due di 

questi sieri con risultati discordanti provenivano da soggetti con possibile infezione 

primaria e gli altri nove contenevano IgM persistenti o aspecifiche. In relazione alle 

infezioni primarie di rilevanza diagnostica è stata determinata una sensibilità del 97,8 %. In 

confronto all’ELISA del produttore A, la specificità è stata del 95,7 %. 

Secondo l’’autore dello studio esterno, si ottengono le prestazioni migliori con il test 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM utilizzando la zona grigia compresa tra 300 

e 350 U/ml. 

In uno studio interno sulla sensibilità del test Toxoplasma gondii IgM, un pannello di 86 

sieri (tra cui 29 positivi per le IgM) è stato analizzato con il test SERION e due ELISA IgM 

disponibili in commercio (produttori C e B). I sieri positivi per le IgM sono stati individuati 

con il test del produttore C. 

Con una zona grigia compresa tra 450 e 540 U/ml, cinque sieri positivi non sono stati 

riconosciuti tali e la sensibilità in confronto al test del produttore C è stata dell’82,8 %. In 

confronto al test del produttore B, la sensibilità del test SERION è stata del 100 %. 

Per determinare la specificità sono stati utilizzati 372 sieri di donne in gravidanza e di 

donatori di sangue. Utilizzando la zona grigia compresa tra 450 e 540 U/ml, la specificità in 

confronto al test del produttore B è stata del 98,9 %. 

Caratteristiche di prestazione (studi esterni) Sensibilità Specificità 



I risultati compresi nella zona grigia non sono stati inclusi nei calcoli. 

Il test SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG è indicato per determinate lo status 

immunitario nelle donne in gravidanza. 

Livelli emoglobinici massimi di 10 mg/ml nel siero non hanno avuto ripercussioni sui 

risultati ottenuti. 

L’analisi di un pannello di sieri contenenti anticorpi potenzialmente cross-reattivi (sieri con 

autoanticorpi, fattore reumatoide, EBV e sifilide) non ha rilevato nessun evidente risultato 

falsamente positivo dovuto a cross-reazioni. 

L’infezione dovuta al virus di Epstein-Barr può indurre una stimolazione policlonale di 

anticorpi e quindi si possono rilevare risultati falsamente positivi per le IgM anti- 

Toxoplasma gondii. Inoltre, gli anticorpi IgM anti-Toxoplasma gondii possono persistere 

per mesi o anni dopo l'infezione. 


italiano 20

9.2 Riproducibilità 


La riproducibilità intrasaggio è stata determinata analizzando per 20 volte in una sessione 

di analisi sieri con reattività differente. La riproducibilità intersaggio è stata determinata 

analizzando per 10 volte sieri con reattività differente in 10 sessioni di analisi indipendenti 

effettuate in 5 giorni diversi. 

italiano 21 

Deviazione standard 

Coefficiente di variazione (CV %) = x 100 


Campione 

Valore medio 

(OD) 

Intrasaggio 

(CV %) 

Valore medio 

Valore medio 

(OD) 

Intersaggio 

(CV %) 

debolmente 

positivo 

0,559 8,3 0,535 14,4 

positivo 0,834 8,0 0,777 10,0 

fortemente 

positivo 

1,653 5,6 1,500 12,8 


Campione 

Valore medio 

(OD) 

Intrasaggio 

(CV %) 

Valore medio 

(OD) 

Intersaggio 

(CV %) 

debolmente 

positivo 

0,302 5,1 0,202 9,9 

positivo 0,938 4,8 0,936 6,5 

fortemente 

positivo 

1,146 5,3 1,142 5,8 


IT

10 MISURE DI SICUREZZA 

10.1 Avvertenze 

Il SERION ELISA classic deve essere utilizzato da personale qualificato che abbia 

familiarità con la buona pratica di laboratorio. 

Maneggiare con attenzione tutti i reagenti del kit e i campioni di origine umana, secondo le 

regole della buona pratica di laboratorio. 

- Questo kit contiene emoderivati di origine umana. Benché tutti i sieri di controllo e 

cut-off siano risultati negativi per gli anticorpi anti-HIV, per HbsAg (antigene di 

superficie del virus dell’epatite B) e per gli anticorpi anti-HCV, devono essere 

considerati potenzialmente infetti. 

- Non pipettare con la bocca. 

- Non fumare, mangiare o bere nelle aree dove vengono maneggiati i campioni o i 

reagenti del kit. 

- Indossare guanti monouso, camici da laboratorio e occhiali di protezione quando si 

lavora con i reagenti del kit o con i campioni. Al termine, lavarsi accuratamente le 

mani. 

- Decontaminare i campioni dei pazienti e gli altri materiali potenzialmente infetti dopo 

l’esecuzione del test. 

- Conservare i reagenti in luogo sicuro e inaccessibile alle persone non autorizzate, 

ad es. ai bambini. 

- Soluzione di arresto: corrosivo (C); provoca ustioni (R34) 

Utilizzare occhiali di protezione, guanti e camici da laboratorio per la manipolazione! 

10.2 Smaltimento 

Rispettare le disposizioni di legge vigenti! 


italiano 22

11 BIBLIOGRAFIA 













548-52. 


















273. 




italiano 23 

IT

Обновления 

Пожалуйста, обратите внимание на изменения по сравнению с предыдущей 

версией 

Номер версии: V 18.11/12-1 

Предыдущая версия: V 17.11/08-1 

Изменение в главе: 5, 7.2.1 


ОГЛАВЛЕНИЕ 

1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ 

2 ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ 

3 ПРИНЦИП РАБОТЫ SERION ELISA classic 

4 СОСТАВ НАБОРА 

5 ДОПОЛНИТЕЛЬНО НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ 

6 ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ 

7 ПРОВЕДЕНИЕ ТЕСТА SERION ELISA classic 

7.1 Общие указания 

7.2 Подготовка и хранение проб 

7.3 Приготовление реагентов 

7.4 Схема проведения анализа 

7.5 Проведение анализа вручную 

7.6 Проведение теста в автоматическом режиме 

7.7 Положительный контроль / контроль достоверности 

7.8 Определение авидности 

7.9 Диагностика новорожденных 

8 ОБРАБОТКА ДАННЫХ ТЕСТА 

8.1 Количественное определение одной точки по методу 4PL 

8.2 Критерии валидности 

8.3 Обработка данных SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 

8.4 Диапазон количественных измерений 

8.5 Области пограничных значений 

8.6 Интерпретация результатов 

8.7 Референсный диапазон значений, полученный для здоровой популяции людей 

9 ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ЧЕРТЫ 

9.1 Чувствительность и специфичность 

9.2 Воспроизводимость 

10 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ 

10.1 Предостережения и меры предосторожности 

10.2 Утилизация 

11 ЛИТЕРАТУРА 

Данная версия № V: V 18.11/12-1 

предыдущая версия: V 17.11/08-1 

RU

Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/U pdate/U pdate: Toxoplasma @ 9\mod_1312896808207_78.doc @ 36159 @ 

Pos: 2 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Einl eitung " Enzymimmunoassay" @ 4\mod_1255336385816_78.doc @ 21177 @ 


Иммуноферментный набор для определения человеческих 

russian 2 

антител для диагностики in vitro 


SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG № для заказа: ESR110G 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM № для заказа: ESR110M 

Pos: 4 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift " Anwendungsber eich" @ 0\mod_1177351044007_78.doc @ 182 @ 1 

1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ 


Иммунноферментные тест-наборы SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG и 

IgM предназначены для качественного и количественного выявления антител 

человека к Toxoplasma gondii в сыворотке или плазме. Выявление антител IgG 

служит для определения иммунного статуса. В сочетании с тестом SERION ELISA 

classic Toxoplasma gondii Aviditätsreagenz (Nr для заказа.: B110AVID) можно 

проводить определение авидности антител IgG. Выявление IgM антител 

применяется как первичный тест для определения наличия свежей инфекции. 

Поскольку IgM антитела могут персистировать долгое время, то при положительном 

результате необходимы дальнейшие серологические исследования, напр. 

авидитетный тест. Тест SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM служит также 

для скрининга новорожденных, с использованием обычной фильтровальной бумаги 

с высохшей пробой крови новорожденного. 


2 ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ 


Toxoplasma gondii является эвкариотным одноклеточным организмом из группы 

споровиков. Облигатные внутриклеточные паразиты широко распространены во 

всем мире. Типичным для споровиков является переменное размножение: половое – 

происходящее исключительно в конечном хозяине, кошке,- и неполовое. 

После попадания паразитов через рот, напр. с зараженной пищей, токсоплазмы 

проникают в стенки кишечника и попадают далее в ретикулоэндотелиальную 

систему. С помощью этого гематогенного распространения Toxoplasma gondii 

способна инфицировать множество тканей и органов. 

Заражение населения этим широко распространенным паразитом зависит от 

возраста. Факторы окружающей среды и стиля жизни имеют так же большое 

значение. В среднем серопревалентность увеличивается прим. на 10% с каждым 

десятком лет жизни. Так, примерно 50% населения в возрасте 50 лет являются 

сероположительными. Примерно в половине случаев токсоплазменная инфекция 

протекает без заметных клинических симптомов. В остальных случаях после 

инкубационного периода 1-3 недели появляются неспецифические симптомы, такие 

как температура, вялость, головные боли в области лба, боли в мускулах и суставах. 

У незначительного числа пациентов температура поднимается до 39°C, а также 

бывает увеличение шейных и других лимфоузлов. Осложнения в виде миокардита, 

менингита или пневмонии встречаются у 1 % инфицированных детей или 

подростков. После прохождения активной фазы инфекции токсоплазмы остаются в

зараженных тканях и кистах. Обычно у хозяина с иммунной компетенцией такая 

латентная инфекция не реактивируется. Очевидно, из-за постоянного наличия 

соответствующих антигенов индуцируется пожизненный иммунитет, который 

надежно защищает от последующих инфекций. 

В рамках защиты здоровья будущих матерей скрининг сывороток беременных 

женщин играет большую роль для выяснения иммунного статуса. Инфекция во 

время беременности может в каждый момент привести к внутриутробному 

заражению токсоплазмами, хотя риск предродового заражения не так велик и 

возможные последствия для новорожденного могут быть различны: 

В первые три месяца 17% (в больш. случаев аборт, редко тяжелые 

russian 3 

последствия у новорожденного) 

Во вторые три месяца 24% (последствия средней тяжести и тяжелые 

последствия у новорожденных) 

В третьи три месяца 64% (легкие последствия или поздние последствия) 

Опасность внутриутробного переноса паразитов существует исключительно в том 

случае, если мать является сероотрицательной и имеет первичную инфекцию. В 

Германии бывает примерно 2-7 случаев в год на каждые 1000 новорожденных. 

Поскольку после перенесенной инфекции очень часто IgM-антитела токсоплазмы 

могут персистировать месяцы и годы, в большенстве случаев обнаружение 

специфических возбудителю IgM-антител не означает, что имеется релевантная для 

беременности свежая инфекция токсоплазмы. 

У сывороток положительных на IgM –антитела токсоплазмы определение авидитета 

дает возможность разграничения свежей первичной инфекции, поскольку 

высокоавидные IgG-антитела токсоплазмы предполагают наличие момента 

инфицирования в более далеком прошлом. 

В то время, как 1-3% зараженных новорожденных сразу после рождения проявляют 

клинические признаки, у 80% субклинически зараженных новорожденных 

проявляются тяжелые поздние последствия. Для диагноза бессимптомной инфекции 

тест SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM может быть использован как 

поисковый скрининг в рамках проверки новорождённых. Исследование производится 

с применением обычной фильтровальной бумаги с засохшей пробой крови (см. 

специальную инструкцию для SERION ELISA classic Toxoplasma новорождённых). 

Выявление специфических возбудителю антител IgM у новорождённых коррелирует 

с внутриматочной или острой инфекцией ребёнка соответствующим возбудителем, 

поскольку материнские антитела IgM из-за их размеров не могут проникать в 

плаценту. При токсоплазмозе гондии своевременная терапия инфицированного 

новорождённого может помочь избежать тяжёлых поздних последствий. 

Инфекция токсоплазмы за 2 недели до беременности дает надежный иммунитет. 

При планированной беременности имеет смысл провести серологическую 

диагностику еще до начала беременности. 

Если сразу после обнаружения первичной инфекции беременная пройдет курс 

лечения, риск передачи инфекции плоду сократится на 75%. 

RU

После естественной или ятрогенной иммунной суппресии может произойти 

активирование латентной инфекции. Большое значение имеет токсоплазменный 

энцефалит для больных СПИДом, поскольку является часто единственной причиной 

смерти этой группы пациентов. 


3 ПРИНЦИП РАБОТЫ SERION ELISA classic 

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) - это иммунологический метод, широко 

используемый в инфекционной серологии для выявления антигенов и антител. 

Реакция основывается на специфическом взаимодействии соотвествующих друг 

другу антител и антигенов. 

Стрипы микротитровального планшета SERION ELISA classic покрыты 

специфическими антигенами диагностируемого возбудителя инфекции. Если в 

сыворотке пациента присутствуют антитела к возбудителю, то они связываются с 

антигенами стрипов. Для детекции образовавшихся таким образом иммунных 

комплексов, используются вторичные антитела, меченные щелочной фосфатазой. 

Фермент катализирует реакцию, в результате которой бесцветный субстрат 

нитрофенилфосфат-р преобразуется в окрашенный продукт нитрофенол-р. 

Интенсивность окраски продукта реакции пропорциональна концентрации антител в 

пробе и измеряется фотометрическим методом. 




russian 4

4 СОСТАВ НАБОРА 

Компоненты набора Колич./ 

8-луночные стрипы; лунки с иммобилизованными антигенами (всего 12 

стрипов по 8 лунок) MTP , 

1 рамка держатель 

Напыленный материал деактивирован 

Стандартная сыворотка (готовая к использованию) STD 

Человеческая сыворотка в фосфатном буфере с протеином; отрицательная в 

отношении антител к HIV, антигенов HBs -Ag (поверхностных антигенов вируса 

гепатита B) и антител к HCV; консервант: < 0,1 % азид натрия 

Краситель: Amaranth O 

Отрицательная контрольная сыворотка (готовая к использованию) NEG 

Человеческая сыворотка в фосфатном буфере с протеином; отрицательная в 

отношении антител к HIV, антигенов HBs –Ag (поверхностных антигенов вируса 

гепатита B) и антител к HCV; консервант: < 0,1 % азид натрия 

Краситель: Lissamin-зеленый V 

Конъюгаты к человеческим IgG, IgA, IgM (готовые к использованию) APC 

Поликлональные антитела к человеческим IgG, IgA, IgM, конъюгированные со 

щелочной фосфатазой, стабилизированные протеиновым стабилизирующим 

раствором 

Консервант: 0,01 % метилизотиазолон 

0,01 % бромнитродиоксан 

Концентрат раствора для промывания (доводится до 1000 мл) WASH 

Раствор хлорида натрия с Tween 20, 30 mM Tris/HCl, pH 7,4 

Консервант: < 0,1 % азид натрия 

Буфер для разведения DILB 

Фосфатный буфер с протеином и Tween 20; 


Краситель: 0,01 г/л бромфеноловой голубой 

Стоп-реагент STOP 

1,2 Н гидроксид натрия 

Субстрат (готовый к употреблению) pNPP 

паранитрофенилфосфат 


(Возможно лёгкое жёлтое окрашивание неоткрытого субстрата, не влияющее на 

качество!) 

Сертификат контроля качества со стандартной кривой и таблицей значений 

INFO 

(количественное выражение антител в мЕд/мл или Ед/мл) 


russian 5 

объём 

12 

2 х 2 мл 

2 мл 

13 мл 

33,3 мл 

2 х 50 мл 

15 мл 

13 мл 

2 стр. 

RU

5 ДОПОЛНИТЕЛЬНО НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ 

- Обычное лабораторное оборудование 

- Для определения IgM: SERION Rf-Absorbent (кат.номер Z200 (20 ml)) 

- Фотометр для микротитровальных планшетов со светофильтром на 405 нм и с 

референтным сфетофильтром на 620 - 690 нм (например, 650 нм) 

- Инкубатор 37°C 

- Влажная камера 

- Дистиллированная вода 

- Зажимы ( № для заказа VT120) 

Pos: 11 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Lag erung und Hal tbar kei t/Lager ung und Haltbar keit @ 4\mod_1255343176800_78.doc @ 21252 @ 1 

russian 6

6 ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ 

Реактив Хранение Срок годности 

8-луночные стрипы 

микротитровального 

планшета (покрытые 

антигеном) 

Контрольные/ 

стандартные 

сыворотки 

в закрытом виде 

после вскрытия хранить в закрытой алюминиевой 

упаковке с влагопоглотителем при 2-8 °C 

Неиспользованные стрипы хранить в сухих условиях 

в специальном пакете из алюминиевой пленки, 

герметично закрытыми. 

после вскрытия упаковки при 2-8°C 

Конъюгат готовый к использованию раствор при 2-8°C 

Буфер для разведения В закрытом виде 

Следует избегать контаминации, напр., 

использовать стерильные наконечники пипеток. 

после вскрытия упаковки при 2-8 °C 

Помутневшие растворы не использовать. 

Раствор для промывки Концентрат после вскрытия упаковки при 2 – 8 °C 

Готовый раствор при 2 – 8 °C 

Готовый раствор при комнатной температуре 

Регулярно чистить ёмкость для готового раствора! 

Помутневшие растворы не использовать. 

Субстрат Готовый к использованию раствор при 2 – 8 °C, в 

защищеном от света месте. 

Следует избегать контаминации, напр., 

использовать стерильные наконечники пипеток. 

При наличие интенсивной жёлтой окраски 

(экстинкция против дистиллированной 

воды > 0,25 ОE) не использовать 

russian 7 

До истечения срока 

годности 

Минимальный срок 

годности 4 недели 


годности; 

24 месяца с даты 

выпуска 



28 месяцев с даты 






24 месяца 



2 недели; 

1 неделя 





Стоп-раствор После вскрытия при комнатной температуре До истечения срока 

годности 


classic/Testdurchführung/Überschrift: Durchführung @ 0\mod_1184679699953_78.doc @ 

2485 @ 1 

RU

7 ПРОВЕДЕНИЕ ТЕСТА SERION ELISA classic 


7.1 Общие указания 

При использовании набора SERION ELISA classic необходимо работать 

исключительно с реагентами SERION ELISA classic, и не заменять их реагентами 

других производителей. Стандартные и контрольные сыворотки, в зависимости от 

лота адаптированы к конкретному набору и не могут использоваться в наборах 

других лотов. Буфер для разведения, буфер для промывывания, субстрат и стопреагент 

могут использоваться во всех тестах SERION ELISA classic независимо от 

лота и наборов. 

Для каждого класса иммунглобулина имеются три разных концентрации конъюгата: 

НИЗКАЯ, СРЕДНЯЯ И ВЫСОКАЯ. Классификацию конъюгата можно распознать на 

этикетках по следующим обозначениям: 

Напр. IgG + IgG-конъюгат низкой концентрации 

IgG ++ IgG-конъюгат средней концентрации 

IgG +++ IgG-конъюгат высокой концентрации 

В некоторых тестах используют специальный конъюгат другого лота, не 

промаркированный символом "+". Специальный конъюгат нельзя заменять другими 

конъюгатами. 

Пожалуйста, всегда обращайте внимание на надписи на этикетках! 

При правильном хранении все компоненты теста SERION ELISA classic в закрытом 

виде можно использовать до истечения срока годности (см. указания на этикетке). 

Не следует использовать реагенты, срок годности которых истёк. 

Неправильное разведение реагентов может привести к понижению 

чувствительности. 

Реагенты при хранении и использовании необходимо защищать от прямых лучей 

солнца. После использования плотно закрыть упаковку, во избежание высыхания и 

бактериального загрязнения. 

Герметично закрытый пакет с микротитровальным планшетом разрезать только по 

намеченному месту. При повреждении пакета из алюминиевой пленки использовать 

планшет не рекомендуется. 

При аликвотировании реактивов следует соблюдать правила стерильности для 

предотвращения микробной контаминации. При раскапывании конъюгата не следует 

касаться наконечником пипетки лунок во избежание ложноположительных 

результатов. Необходимо следить за тем, чтобы флаконы закрывались своими 

крышками. 

russian 8

Воспроизводимость результатов зависит, кроме прочего, от тщательного 

перемешивания реагентов. Контрольные сыворотки и разведенные сыворотки 

пацентов необходимо тщательно перемешать перед использованием (например, с 

помощью вортекса). 

При постановке анализа необходимо следить за аккуратным раскапыванием лунок и 

соблюдать указанные в инструкции время и температуру инкубации. Значительные 

различия во времени между заполнением первой и последней лунок при внесении 

проб пациентов, контрольных сывороток, конъюгата и субстрата приводят к 

различиям инкубационного периода, которые могут значительно повлиять на 

точность и воспроизводимость измеренных значений. 

Лишь строгое соблюдение рабочей инструкции обеспечивает правильность 

результатов. 

Результаты теста SERION ELISA classic можно учитывать лишь в том случае, если 

соблюдены все критерии валидности, приведенные в сертификате контроля 

качества, прилагаемом к набору. 

Правильная промывка предовтращает неспецифическое взаимодействие. Поэтому 

необходимо следовать руководству по применению используемых приборов для 

промывания. Важно равномерное заполнение промывающим буфером и 

опорожнение лунок планшета во время промывки. Следует избегать образования 

пены! 

Избегать повреждения надписей микротитровальных стрипов, обозначающих 

возбудителя и класс антител, чтобы не перепутать. 


7.2 Подготовка и хранение проб 

Липидные, гемолизированные, а также иктеричные пробы (сыворотка или плазма) 

следует использовать с особым вниманием. Пробы, загрязненные бактериями, 

использовать не следует. Пригодными для исследований материалами являются 

пробы сыворотки или плазмы (EDTA, цитрат, гепарин), полученные стандартными 

лабораторными методами. Пробы нельзя деактивировать термическим способом. 


7.2.1 Разведение проб 

Перед началом теста пробы (V1) развести в буфере для разведения (V2) 



V1 + V2 = 1+100 по 10 мкл пробы пациента 

russian 9 

на каждые 1000 мкл разбавляющего буфера 


После каждого разведения и перед отбором пробы следует хорошо размешать 

мономиксером (например, Vortex) для получения гомогенного раствора. 


RU



Интерференция с ревматоидным фактором 

Ревматоидные факторы – это аутоантитела, главным образом, относящиеся к 

антителам класса M (IgM), связывающие иммунные комплексы IgG антител. 

Присутствие неспецифических антител IgM (ревматоидных факторов) может 

привести к ложноположительным результатам при определении специфических 

антител IgM. Более того, существует вероятность вытеснения IgM-антител с более 

слабыми связями IgG-антителами с более сильными связями. Результаты по IgM в 

этом случае окажуться ложноотрицательными. По этой причине пробы для 

определения IgM необходимо предварительно обработать абсорбентом 

ревматоидного фактора SERION-Rf-Absorbens (кат. номер Z200 (20 мл/100 

определений)). Абсорбция ревматоидного фактора происходит путем инкубирования 

пробы пациента в Rf-буфере в течение 15 минут при комнатной температуре или в 

течение ночи при температуре 4° C. Данная процедура описана в специальной 

инструкции по применению. 


Сначала производится разбавление абсорбента ревматоидного фактора (V1) 

разбавляющим буфером (V2) в соотношении 1+4. 

V1 + V2 = V3 (1 + 4) по 200 мкл Rf-абсорбента 

russian 10 

на каждые 800 мкл разбавляющего буфера 

Затем пробы пациента (V4) разбавляются в смеси Rf и разбавляющего буфера (V3): 

V4 + V3 = 1+100 по 10 мкл пробы пациента 

на каждые 1000 мкл Rf-разбавляющего буфера 


После каждого разведения и перед отбором пробы следует хорошо размешать 

мономиксером (например, Vortex) для получения гомогенного раствора. 


7.2.2 Хранение проб 

Пробы пациентов должны храниться не более 7 дней при температуре 2-8°C. Более 

длительное хранение проб возможно при температуре ≤ -20°C. Следует избегать 

повторных циклов замораживания и оттаивания. Разведенные пробы могут 

храниться при 2-8°C в течение одной недели. 

Pos: 23 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 1 @ 4\mod_1255343795606_78.doc @ 21316 @ 233

7.3 Приготовление реагентов 

Перед использованием все реагенты должны быть прогреты до комнатной 

температуры. 

7.3.1 Стрипы планшета 

Стрипы упакованы вместе с осушителем. Неиспользуемые стрипы следует 

снова положить в пакет из алюминиевой фольги с осушителем, который 

закрывается герметично. 

7.3.2 Контрольные сыворотки / стандартные сыворотки 

Контрольные и стандартные сыворотки готовы к использованию и не требуют 

дальнейшего разведения. При каждой постановке анализа, независимо от 

количества используемых стрипов, необходимо включать в анализ 

контрольные и стандартные сыворотки. Тестирование проводить в дублях. 

eis) @ 0\mod_1184741119299_78.doc @ 2882 


Контрольные сыворотки не обрабатывать Rf-абсорбентом (абсорбент 

ревматоидных факторов)! 


7.3.3 Конъюгат к человеческим IgA, IgG или IgM АР-конъюгат (готовый к 

использованию) 

Конъюгаты взаимозаменяемы в пределах одной концентрации и одного класса 

иммунноглобулинов. Строго избегать бактериального заражения готового к 

использованию конъюгата, используя для забора стерильные наконечники 

пипетки. 

7.3.4 Раствор для промывки 

Пример: 

Концентрат раствора для промывки (V1) разбавить дистиллированной водой в 

соотношении 1:30 до конечного объема (V2). 

Концентрат раствора для 

промывки (V1) 

russian 11 

Конечный объем (V2) 

33,3 мл 1000 мл 

1,0 мл 30 мл 

7.3.5 Буфер для разведения проб (готовый к использованию) 

7.3.6 Субстрат (готовый к использованию) 

Во избежание загрязнения бактериями готового к использованию раствора 

субстрата, используйте только стерильные наконечники пипеток. 

7.3.7 Стоп-реагент (готовый к использованию) 

RU


classic/Testdurchführung/Testablauf/Überschrift Testablauf @ 

0\mod_1180955922843_78.doc @ 745 @ 2 

7.4 Схема проведения анализа 



количественный 

Для выявления IgM антител провести предварительную Rf-абсорбцию проб, см. 

пункт 7.2.1; инкубировать 15 минут при комнатной температуре или ночь при 4°C. 



russian 12 

Разбавление проб 1 

(пробы пациентов) 

1+100 

Внесение разведенных проб пациентов и 

готовых к использованию контрольных/стандартных сывороток в лунки планшета 

(100 мкл) 

 

ИНКУБАЦИЯ 60 мин./37°C 

влажная камера 

 

ПРОМЫВКА (4 x 300 мкл DIL WASH ]) 2 

 

Внесение раствора конъюгата APC (100 мкл) 

 



 

ПРОМЫВКА (4 x 300 мкл DIL WASH ]) 2 

 

Внесение раствора субстрата pNPP (100 мкл) 

 



Внесение стоп-реагента STOP (100 мкл) 

 

ИЗМЕРЕНИЕ ПОГЛОЩЕНИЯ при 405 нм 

1 Специальный буфер для разведения для следующих наборов SERION 

ELISA classic: Borrelia IgG, IgM, EBV EA IgG, Parvovirus B19 IgM, Hantavirus Puumala IgG, IgM. 

2 При проведении анализа вручную: после промывки хорошо вытряхнуть планшет на бумажные 

салфетки. 

Pos: 29 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/M anuelle Testdurchführ ung (für ALLE Erreg er auß er C oxiella) @ 5\mod_1255349441824_78.doc @ 21523 @ 2

7.5 Проведение анализа вручную 

1. Установить необходимое количество лунок в рамку держатель и составить протокол 

маркировки лунок. 

2. Внести по 100 мкл разведенных проб и готовых к использованию контрольных 

образцов в соответствующие лунки планшета. Оставьте одну лунку пустой для 

субстратного бланка, например: 

IgG/IgM количественный 

russian 13 

Лунка A1 Субстратный бланк 

Лунка B1 Отрицательный контроль 

Лунка C1 Стандартная сыворотка 

Лунка D1 Стандартная сыворотка 

Лунка E1 Пациент 1.... 

3. Инкубация проб 60 минут (+/- 5 мин.) при 37°C (+/-1°C) во влажной камере. 

4. По истечении времени инкубации, промойте планшет (в промывателе или вручную): 

- аспирируйте содержимое лунок или удалите ее из лунок вытряхиванием 

- в каждую лунку внесите по 300 мкл промывочного раствора 

- аспирируйте промывочный раствор или удалите его вытряхиванием 

- повторите процедуру 3 раза (т.е. всего 4 раза) 

- удалите остатки жидкости постукиванием планшета в перевернутом положении по 

фильтровальной бумаге. 

5. Добавление конъюгата 

Внести по 100 мкл готового к использованию IgG/IgM конъюгата в соответствующие 

лунки планшета (кроме лунок для определения субстратного бланка). 

6. Инкубация конъюгата в течение 30 минут (+/-1 мин.) * при 37°C 

(+/-1°C) во влажной камере. 

7. По истечении времени инкубации промойте лунки (см. выше). 

8. Добавление субстрата 

Внести по 100 мкл готового к использованию раствора субстрата во все лунки (в т.ч. и в 

лунку для субстратного бланка). 

9. Инкубация субстрата в течение 30 минут (+/- 1 мин.) * при 37°C 

(+/1°C) во влажной камере. 

10. Остановка реакции 

Внесите по100 мкл стоп-раствора во все лунки, слегка встряхните планшет. 

11. Измерение поглощения 

Измерить оптическую плотность в лунках при длине волны 405 нм в течении 60 минут 

против бланка по субстрату. Референтная длина волны в пределах 620-690 нм 

(например, 650 нм). 

* Учтите, пожалуйста, что в особых условиях работы может возникнуть необходимость лабораторной 

адаптации инкубационного периода. 


RU

7.6 Проведение теста в автоматическом режиме 

Наборы SERION ELISA пригодны для применения с приборами Immunomat TM а также 

DYNEX DSX ® и DS2 ® и с приборами, построенными по их типу. Автоматический 

процесс аналогичен ручному анализу. Учтите, что при особых условиях работы 

может возникнуть необходимость в лабораторной адаптации инкубационного 

периода. 


7.7 Положительный контроль / контроль достоверности 

Для проведения внутрилабораторного контроля качества исследований, 

проведенных с использованием наборов SERION ELISA classic, мы рекомендуем 

использовать контрольные материалы SERION ELISA control. Процедура 

применения контрольных материалов описана в отдельной инструкции по 

использованию. 


7.8 Определение авидности 

Набор SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG в комбинации с реагентом для 

определения авидности предназначен для определения авидности специфических 

антител IgG. Определение авидности антител к возбудителю позволяет выделить 

первичную инфекцию, дифференцировать ее от периода реактивации или 

вторичного проникновения антигена в организм. Данное исследование особенно 

важно при обследовании беременных. Проведение теста описано в отдельной 

инструкции по применению. Программа на базе Excel позволяет расчитать индексы 

авидности SERION. 


7.9 Диагностика новорожденных 

Набор SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM предназначен также для 

определения специфических антител IgM в образцах крови новорожденных. 

Скрининг новорожденных можно проводить с использованием карточек для взятия 

сухих пятен крови Dried Blood Spots (DBS) диаметром 3,2 мм, пропитанными кровью 

новорожденного, взятой из пятки. Проведение теста описано в отдельной 

инструкции по применению. 


russian 14

8 ОБРАБОТКА ДАННЫХ ТЕСТА 



8.1 Количественное определение одной точки по методу 4PL 

Определение концентрации антител с помощью наборов SERION ELISA classic 

производится по “логистической логарифмической модели с 4 параметрами (4PL)”, 

математическая функция которой описывается следующей формулой: 

OD = A + 

1 + e 

russian 15 

D - A 

B(C - ln Konz.) 

Параметры A, B, C и D точно передают ход кривой и определяют 

1. нижнюю асимптоту параметр A 

2. подъем кривой параметр B 

3. точку перегиба кривой параметр C 

4. верхнюю асимптоту параметр D 

Институт Вирион\Серион ГмбХ (Вюрцбург) (Virion\Serion GmbH (Würzburg)) для 

каждого лота наборов, получает стандартную кривую в нескольких тестированиях 

при соблюдении оптимальных условий. У пользователя нет необходимости в 

дорогостоящем и занимающем много времени построении стандартной кривой. 

Для расчета концентраций антител, к каждому набору прилагается стандартная 

кривая в виде графика и таблица значений. Они привязаны к конкретному лоту 

реагентов, и от лота к лоту меняются. Программное обеспечение для проведения 

расчетов SERION activity, SERION evaluate, предоставляется в ответ на запрос. 

Для выравнивания колебаний или смещений стандартной кривой, а также для 

контроля качества, используют стандартную сыворотку. Для каждой партии 

контрольной сыворотки производитель указывает референсное значение и диапазон 

валидности. 


RU

8.2 Критерии валидности 

- Значение OD субстратного бланка < 0,25. 

- Отрицательный контроль дает отрицательный результат 

- При количественном методе SERION ELISA classic, полученное среднее 

значение OD стандартной сыворотки, после вычета значения субстратного 

бланка, должно быть в пределах диапазона валидности, указанного в 

сертификате контроля качества данного лота. 

- Отдельные значения OD стандартной сыворотки не должны расходиться более 

чем на 20 % (CV

Метод 2: 


Определение активности антител с помощью стандартной кривой 

Для того чтобы компенсировать отклонения (девиацию) результатов, полученных в 

разные дни, в различных лабораториях, используют корректирующий фактор F. 

Полученные результаты пациентов умножают на F. Корректирующий фактор 

рассчитывают по формуле: 

Номинальное значение OD (стандартной сыворотки) 

F = 

Значение OD (стандартной сыворотки) в определенный день 

Этот метод необходим для того, чтобы привести в соответствие текущее значение 

теста и стандартную лотспецифическую кривую. Таким образом корректируются 

суточные отклонения. 

1. Из двух значений поглощения стандартной сыворотки рассчитать среднее 

значение и проверить, находится ли полученное значение в допустимых 

пределах. 

2. Расчет коэффициента "F": Указанное номинальное значение стандарта делится 

на среднее значение поглощения стандарта: 

F= номинальное значение стандарта / среднее значение поглощения стандарта. 

3. Все измеренные величины проб пациентов умножаются на "F". 

4. При помощи стандартной кривой и откорректированных значений, 

рассчитываются значения активности антител в мЕд/мл или Ед/мл. 


russian 17 

RU

8.3.2 Автоматическая обработка теста при помощи программы 

SERION evaluate 

В результате ввода четырех параметров и номинального значения стандартной 

сыворотки, активность антител SERION ELISA classic рассчитывается специальной 

программой для расчета SERION evaluate. 

В случае, если значение выходит за рамки области действительности, программа 

может выдать следующие сообщения об ошибках на английском языке: 

”Standard values out of ranges in following groups: 1-24” («Стандартные значения 

находятся вне диапазонов для следующих групп..») или 

”Standard values differ more than 20 % in following groups: 1-24” («Стандартные 

значения различаются более чем на 20 % в следующих группах..»). 

В этих случаях результат теста является недействительным и его следует 

повторить. 

Параметры и номинальное значение необходимо менять только при изменении 

партии (параметры и номинальное значение приведены в таблице значений). 

Верность ввода этих специфических для каждой партии значений можно проверить 

при помощи соответствующих стандартной сыворотке значений активности (в 

мЕд/мл или Ед/мл). Полученное среднее значение активности антител должно 

совпадать со значением, указанным в сертификате контроля качества партии. 

Корректировка значений производится автоматически. На распечатке результатов 

измерения появляется следующий текст: 


russian 18 

Sample code 

(Наименование пробы) 

OD-value (Значение OD) 

IU/ml или U/ml (мЕд/мл 

или Ед/мл) 

Evaluation (Подсчёт) 

8.4 Диапазон количественных измерений 

Диапазон количественных измерений, указанный в сертификате по контролю 

качества SERION ELISA classic, является диапазоном, в котором сохраняется 

линейность разведений. Если значение поглощения образца выше верхней границы 

диапазона измерений, сыворотку необходимо развести и измерить повторно. 

Полученное значение нужно умножить на коэффициент разведения. 


8.5 Области пограничных значений 

Области пограничных значений SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG/IgM 

указаны в сертификате контроля качества и обозначают области пограничных 

результатов измерения. Полученное значение пробы пациента ниже пограничной 

области характеризует отрицательный результат теста; полученное значение пробы 

пациента выше пограничной области расценивается как положительный результат 

теста. В случае, если результаты находятся в области пограничных значений, 

нельзя с уверенностью оценить пробу пациента. В случае пограничного результата, 

тест следует провести параллельно с новыми пробами (парных сывороток), взятыми 

с интервалом в одну-две недели. 


Тест SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM следует применять с указанной 

областью пограничных значений в 300-350 Ед/мл, но он может также альтернативно 

оцениваться с более высокой областью пограничных значений в 450-540 Ед/мл, 

которая в основном препятствует охвату персистирующих антител IgM с низкой 

активностью. За применение более высокой области пограничных значений говорит 

то, что уже через несколько дней после инфицирования можно выявить антитела 

IgM к Toxoplasma gondii, активность которых очень быстро возрастает. Кроме того, у 

многих пациентов наблюдаются персистирующие антитела IgM с низкой 

активностью. Вероятность того, что у сыворотки с низким содержанием антител IgM 

при использовании высокой области пограничных значений имеется острая или уже 

затихающая, лежащая несколько недель назад, инфекция, не очень высока, но не 

может быть исключена. При менее чувствительной настройке пограничных значений 

увеличивается промежуток времени между инфицированием Toxoplasma gondii и 

возможностью обнаружения первых антител IgM, так что очень свежие инфекции 

могут быть не распознанны. Поэтому предпочтительно применение более низких 

пограничных значений от 300 до 350 Ед/мл. (Lappalainen und Hedman, 2004). 

Благодаря этому выявляется больше положительных результатов IgM, которые 

следует подтверждать дальнейшими исследованиями, напр. определением 

авидности антител IgG, для различия острой или лежащей в прошлом инфекции. 


8.6 Интерпретация результатов 


Для серологического исследования беременных рекомендуется поступенчатая 

диагностика (институт Роберта Коха). В качестве поискового теста можно 

использовать SERION ELISA classic Toxoplasma IgG. Отрицательный результат 

теста SERION ELISA classic Toxoplasma IgG (

учитывать, что благодаря поликлональной стимуляции (напр. вирусом Эпштейна- 

Барра) могут также быть положительные данные исследования на IgМ токсоплазмы, 

которые не являются результатом свежей инфекции. 

В рамках регулярных обследований беременных удобно провести авидитетное 

тестирование IgG-антител. Поскольку этот тест легко проводится, следует 

исследовать все сыворотки беременных, у которых были выявленны IgМ-антитела 

токсоплазмы, даже и с незначительным содержанием. Этим повышается 

уверенность, что не осталась незамеченной первичная инфекция. 

В ходе иммунной реакции как правило происходит зависимое от времени 

значительное возрастание средней тропизма (аффиности) антител (созревание 

тропизма). Высокоавидные IgG-антитела указывают поэтому на момент 

инфицирования в далеком прошлом. Показателем недавнего первичного 

инфицирования является наличие IgG-антител с низкой авидностью. 

Результаты следует расценивать согласно следующей таблице (институт Роберта 

Коха): 

IgG IgM 

IgG- 

АВИДНОСТЬ 

russian 20 

ВОЗМОЖНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ 

ПОЛОЖ. ОТРИЦ. ---------- НЕАКТИВНАЯ, ЛАТЕНТНАЯ ИНФЕКЦИЯ 

ПОЛОЖ. ПОЛОЖ. ВЫСОКАЯ ЗАТУХАЮЩАЯ ИЛИ ЛАТЕНТНАЯ 

(НЕАКТИВНАЯ) ИНФЕКЦИЯ 

ПОЛОЖ. ПОЛОЖ. НЕЗНАЧИТ. ВОЗМОЖНА ОСТРАЯ ИНФЕКЦИЯ, 

НЕОБХОДИМЫ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ 

ИССЛЕДОВАНИЯ ИЛИ ТЕКУЩИЕ КОНТРОЛИ 


8.7 Референсный диапазон значений, полученный для здоровой популяции 

людей 


Исследование сывороток неотобранных доноров из южного региона Германии 

тестом SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG дало следующее 

распределение: из 50 проверенных донорских сывороток была 31 (62 %) в тесте 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG определена как положительная, 19 

сывороток (38 %) дали отрицательный результат. Это распределение соответствует 

данным литературы, согласно которым серопревалентность населения в 

зависимости от образа питания и возраста может иметь широкий диапазон. Возраст 

и образ питания доноров был не известен. 

Pos: 50 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Leistungsmer kmale @ 0\mod_1184676089844_78.doc @ 2115 @ 1

9 ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ЧЕРТЫ 

classic/Leistungsmerkmale/Kapitelüberschrift: 0\mod_1190013251494_78.doc Pos: 51 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 9937 classic/Gültig @ 2 Sensitivität für alle Dokumente/ELISA 

und Spezifität @ 

9.1 Чувствительность и специфичность 


Для расчета функциональных данных для SERION ELISA classic Toxoplasma IgG 

были проверены 450 сывороток пациентов, а так же здоровых людей в сравнение с 

одним из непрямых иммуннофлуоресцентных тестов. Была установлена 

чувствительность в 98,2 % и специфичность в 99,4 %. 

Дальнейшие внутриинститутские исследования тестом SERION ELISA classic 

Toxoplasma gondii IgG 1000 сывороток беременных женщин, при которых в качестве 

референтного теста также использовался непрямой иммуннофлуоресцентный тест 

и, в случае отклоняющихся результатов, тест Забина-Фельдмана, показали 

чувствительность в 97,8 % и специфичность в 99,8 %. 

Во внеинститутском исследовании теста SERION ELISA classic Toxoplasma gondii 

IgM были протестированы всего 256 сывороток, из них 104 положительных, для 

определения чувствительности и специфичности в сравнении с двумя имеющимися 

в продаже тестами IgM ELISA (фирма A и фирма B). Положительные IgM сыворотки 

были отобраны тестом Toxoplasma IgM фирмы A. 

При использовании пограничной области от 450 до 540 мЕд/мл 19 положительных 

сывороток не были охвачены, из них семь с возможной свежей первичной 

инфекцией. При оценке тестов тест SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM в 

сравнении с тестом Toxoplasma IgM фирмы B показал более высокую 

чувствительность. Этот тест фирмы В определил из 104 положительных сывороток 

28 как отрицательные. 

С пограничной областью от 450 до 540 Ед/мл в тесте SERION ELISA в сравнении с 

тестом Toxoplasma IgM фирмы A была установлена чувствительность в 98,6 %. 

При использовании пограничной области от 300 до 350 Ед/мл были 11 

положительных сывороток не распознаны. По клинической картине и последующим 

исследованиям выяснилось, что только у двух пациентов имелась возможная 

первичная инфекция, остальные девять результатов были охарактеризованны как 

персистирующие или неспецифические IgM антитела. Относительно диагностически 

релевантных первичных инфекций получается чувствительность в 97,8. 

Специфичность по сравнению с тестом фирмы A была определена в 95,7%. 

Авторами внеинститутского исследования самая высокая эффективность теста 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM была определена для пограничной 

области от 300 до 350 Ед/мл. 

В одном внутриинститутском исследовании по оценке функциональности теста 

SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgM была проверена панель из 86 

сывороток, из которых 29 были положительные, для определения чувствительности 

в сравнении с двумя другими имеющимися в продаже тестами IgM ELISA (фирма C и 

фирма B). Положительные IgM сыворотки были отобраны тестом Toxoplasma IgM 

фирмы C. При использовании пограничной области от 450 до 540 Ед/мл были пять 

положительных сывороток не распознаны, что соответствовало при расчетах 

russian 21 

RU

чувствительности относительно теста Toxoplasma IgM фирмы C 82,8 %. 

Относительно одновременно проведенного теста Toxoplasma IgM фирмы B 

чувствительность была 100 %. Для определения специфичности были 

протестированы 372 сыворотки беременных и доноров. При этом при области 

пограничных значений от 450 до 540 Ед./мл была специфичность 98,9 % 

относительно теста Toxoplasma IgM фирмы B. 

Функциональные параметры 

(внеинститутские исследования) 

russian 22 

Чувствительность Специфичность 



При расчетах сомнительные сыворотки во внимание не принимались. 

Тест SERION ELISA classic Toxoplasma gondii IgG пригоден для определения 

иммунитетного статуса у беременных. 

До концентрации 10 мг гемоглобина/мл сыворотки не наблюдалось никаких помех в 

результатах теста. 

Исследование панели сывороток с активностью антител к потенциально 

перекрёстным параметрам (сыворотки с аутоантителами и ревматоидными 

факторами, вирусом Эпштейна-Барра и инфекцией сифилиса) не выявило указаний 

на ложно-положительные результаты из-за перекрёстных реакций. 

Инфицирование вирусом Эпштейна-Барра может привести к поликлональной 

стимуляции и таким образом к ложно-положительным показаниям IgМ токсоплазмы. 

Следует также иметь в виду, что IgМ-антитела токсоплазмы могут персистировать 

месяцы и годы. 

Pos: 53 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Präzisi on @ 0\mod_1184676568397_78.doc @ 2130 @ 2

9.2 Воспроизводимость 


Точность в пределах серии сывороток определялась многократно при 

использовании сывороток с различной реактивностью (n = 20) в планшете с 

антигенным покрытием. Для определения точности вне серии пробы сывороток с 

различной реактивностью испытывались в 10 независимых друг от друга 

приготовлениях в пять различных дней. 

russian 23 

Стандартное отклонение 

Коэффициент изменения (VK %) = x 100 


Проба 

Среднее 

значение 

поглощения 

(OD) 

Внутрисериный 

(VK %) 

Среднее значение 




(OD) 

Межсерийный 

(VK %) 

слабоположит. 0,559 8,3 0,535 14,4 

положительная 0,834 8,0 0,777 10,0 

высокоположит. 1,653 5,6 1,500 12,8 


Проба 




(OD) 

Внутрисериный 

(VK %) 




(OD) 

Межсерийный 

(VK %) 

слабоположит. 0,302 5,1 0,202 9,9 

положительная 0,938 4,8 0,936 6,5 

высокоположит. 1,146 5,3 1,142 5,8 


RU

10 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ 

10.1 Предостережения и меры предосторожности 

Тест SERION ELISA classic предназначен только для использования специалистами, 

безупречно владеющими необходимыми навыками. 

При обращении с реагентами теста и пробами пациентов необходимо выполнение 

общепринятых лабораторных правил: 

- Упаковка теста содержит человеческие сыворотки. Хотя все контрольные 

сыворотки отрицательны на anti-HIV-Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen) 

и anti-HCV-Ab их следует рассматривать, как потенциально инфекционно 

опасные материалы. 

- Не набирайте растворы в пипетку при помощи рта. 

- В помещениях, где ведется работа с реагентами набора и пробами пациентов, 

не разрешается принимать пищу, пить или курить. 

- При обращении с реагентами теста и пробами пациентов следует избегать 

прямого контакта, поэтому следует использвать лабораторный халат, 

одноразовые перчатки и защитные очки. Руки по окончании работы следует 

тщательно вымыть. 

- Пробы пациентов и все потенциально инфекционные материалы после 

проведения теста следует подвергнуть обеззараживанию. 

- Реагенты необходимо хранить в месте, недоступном для детей. 

- Стоп-раствор: 

10.2 Утилизация 

Едкий (C); R34: вызывает химические ожоги, 

необходимо использовать защитные очки, перчатки и лабораторный халат 

Пожалуйста, выполняйте предписания, предусмотренные действующим 

законодательством! 


russian 24

11 ЛИТЕРАТУРА 













548-52. 


















273. 




russian 25 

RU

2°C 

SERION ELISA classic (V 11/12-1) 

Symbole auf den Etiketten/ symbols on labels/ symboles et étiquettes/ simboli sulle etichette/ символы на 

этикетках/símbolos sobre las etiquetas/ σύµβολα στις ετικέτες/ símbolos nos rótulos / Symboly na štítcích / 

symboler på etiketter/ symboler på etiketterna/ Symbole na etykietach/ symboly na označení/ Simboli na 

oznakah/ symbol på etiketter 

96 

8°C 

Hersteller/ Manufacturer/ Fabricant/ Produttore/Производитель/ Fabricante/ Κατασκευαστής/ 

Fabricante/ Výrobce/ Fremstiller/ Tillverkare/ Producent/ Výrobca/ Izdelovalec/ Produsent 

Ausreichend für 96 Tests/ sufficient for 96 tests/ suffisant pour 96 tests/ sufficiente per 96 test/ 

достаточно для 96 тестов / suficiente para 96 pruebas/ επαρεκεί για 96 δοκιµασίες/ suficiente para 

96 ensaios/ stačí na 96 testů/ nok til 96 test/ tillräckligt för 96 tester/ Wystarcza na 96 testów/ 

postačuje na 96 testov/ Zadostuje za 96 testov/ Tilstrekkelig til 96 tester 

LOT Charge/ lot/ lot / lotto/ lote/ παρτίδα/ lote/ šarže/ lot/ lot/ seria/ šarža/ serija/ lot /lot 

REF Referenz oder Bestellnummer/ reference or order number/ numéro de référence ou de commande/ 

numero di riferimento o ordinazione/ ссылка или номер для заказа / referencia o número de pedido/ 

Αριθµός αναφοράς ή παραγγελίας/ referência ou número para encomenda/ reference nebo číslo 

objednávky/ reference eller bestillingsnummer/ referens eller beställningsnummer/ Numer 

referencyjny lub numer zamówienia/ referenčné číslo alebo číslo objednávky/ referenčna ali kataloška 

številka/ Referanse eller ordrenummer 

Lagern zwischen 2 und 8 Grad Celsius/ store between 2 and 8 degree celsius/ entre 2 et 8 degré 

celsius/ conservare a temperatura compresa tra 2 e 8 gradi centigradi/ хранить при температуре от 

2 до 8 градусов цельсия / conservar entre 2 y 8 grados celsius/ Φύλαξη µεταξύ 2 και 8 βαθµούς 

Κελσίου/ Armazenar entre 2º e 8º Celsius/ uchovávejte při teplotě 2 až 8 °C/ opbevares mellem 2 og 8 

grader celsius/ förvara vid 2 till 8 grader Celsius/ Przechowywać w temp. pomiędzy 2 a 8 stopni 

Celsjusza/ skladovať pri teplote 2 až 8 stupňov Celzia/ Shranjujte pri temperaturi od 2 do 8 C/ 

Oppbevares mellom 2 og 8 grader Celsiu 

CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79 EG/ CE marking according to IVD guideline 

98/79 EC/ Étiquetage CE selon les directives DIV/ marcatura CE in conformità alla direttiva IVD 98/79 

EC/ маркировка СЕ согласно директивам IVD 98/79 /marca CE según la directiva IVD 98/79 CE/ 

Σήµανση CE σύµφωνα µε την οδηγία IVD 98/79 EΕ/ Marcação CE de acordo com a Directiva 98/79/ 

značení CE podle směrnice IVD 98/79/ES/ CE-mærkning iht. IVD-retningslinje 98/79/EF/ CEmärkning 

enligt riktlinjerna för IVD i direktiv 98/79/EC/ Oznakowanie CE zgodne z wytycznymi dot. 

diagnostyki in vitro 98/79 EC/ označenie CE podľa smernice IVD 98/79/ES/ oznaka CE, skladna s 

smernico IVD 98/79/ES/ CE-merking i henhold til IVD-retningslinjer 98/79/EØF 

0197 CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79 EG gemäß Anhang II, Liste B/ CE marking 

according to IVD guideline 98/79 EC according to annex II, list B/ Étiquetage CE selon les directives 

DIV 98/79 CE selon l'annexe II, liste B/ marcatura CE in conformità alla direttiva IVD 98/79 EC 

secondo l’allegato II, elenco B/ маркировка СЕ согласно директивам IVD 98/79, приложение II, 

список В / marca CE según la directiva IVD 98/79 CE de acuerdo con el anexo II, lista B/ Σήµανση 

CE σύµφωνα µε την οδηγία IVD 98/79 EΕ, σύµφωνα µε το παράρτηµα ΙΙ, κατάλογο Β/ Marcação CE 

de acordo com a Directiva 98/79/ CE relativo aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro, 

segundo a lista B do anexo II/ značení CE podle směrnice IVD 98/79/ ES podle příloh II, seznamu B/ 

CE-mærkning iht. IVD-retningslinje 98/79 /EF iflg. anneks II, liste B/ CE-märkning enligt riktlinjerna för 

IVD i direktiv 98/79/EC, bilaga II, lista B/ Oznakowanie CE zgodne z wytycznymi dot. diagnostyki in 

vitro 98/79 EC, zgodnie z aneksem II, lista B/ označenie CE podľa smernice IVD 98/79 ES v znení 

dodatku II, zoznam B/ oznaka CE, skladna s smernico IVD 98/79/ES in seznamom B v Dodatku II/ 

CE-merking i henhold til IVD-retningslinjer 98/79/EØF, tillegg II, liste B 

Verfallsdatum/ expiry date/ date d'expiration/ data di scadenza/ срок годности до /fecha de 

caducidad/ ηµεροµηνία λήξης/ data de validade/ datum exspirace/ udløbsdato/ förfallodatum/ data 

upływu ważności/ dátum exspirácie/ datum izteka roka uporabnosti/ utløpsdatp 

MTP Mikrotiterplatte (brechbare Streifen)/ microtiter plate (breakable strips)/ plaque de microtitration 

(bandelettes détachables)/ piastra per microtitolazione (strisce separabili)/ микротитровальная 

панель (отрывные стрипы) /placa de microtitulación (tiras rompibles)/ Πλάκα µικροτιτλοποίησης 

(αποσπωµενες ταινίες)/ placa de microtitulação (tiras quebráveis)/ mikrotitrační deska (rozlomitelné 

proužky)/ mikrotiterplade (afbrækkelige strimler)/ mikrotiterplatta (brytbara strips)/ Płytka 

mikrotitracyjna (paski do odrywania)/ mikrotitračná platnička (rozlomiteľné prúžky)/ vsebnik za 

mikrotitriranje (z razdelki, ki jih je mogoče odlomiti)/ Mikrotiterplate (avbrytbare strips) 

AG Antigen/ antigen/ Antigène/ antigene/ антиген /antígeno/ αντιγόνο/ antigénio/ antigen/ antigen/ 

antigen/ Antygen/ antigén/ antigen/ Antigen

AK Antikörper/ antibodies/ Anticorps/ anticorpi/ антитела / anticuerpos/ αντίσωµα/ anticorpos/ protilátky/ 

antistoffer/ antikroppar/ Przeciwciała/ protilátky/ protitelesa/ Antistoffer 

CAG Kontrollantigen/ control antigen/ antigène de contrôle/ antigene di controllo/ контрольный антиген 

/antígeno de control/ αντιγόνο ελέγχου/ antígeno de controre/ kontrolní antigen/ kontrolantigen/ 

kontrollantigen/ antygen kontrolny/ kontrolný antigén/ kontrolni antigen/ kontrollantigen 

STD Standardserum/ standard serum/ Sérum standard/ siero standard/ стандартная сыворотка /suero 

patrón/ πρότυπος ορός/ soro padrão/ standardní sérum/ standardserum/ standardserum/ Surowica 

standardowa/ štandardné sérum/ standardni serum/ Standardserum 

POS Positivkontrolle/ positive control/ Contrôle positif/ controllo positivo/ положительные контроли /control 

positivo/ θετικός έλεγχος/ controlo positivo/ pozitivní kontrola/ positiv kontrol/ positiv kontroll/ Kontrola 

pozytywna/ pozitívna kontrola/ pozitivna kontrola/ Positiv kontroll 

C/O Grenzwertiges Serum/ cut-off serum/ Sérum seuil/ siero cut-off/ сомнительные сыворотки 

(пограничные)/suero de corte/ οριακός ορός (cut-off)/ soro cut-off/ cut-off sérum/ cutoff-serum/ cutoffserum/ 

Surowica „cut-off"/ sérum na určenie hraničnej hodnoty/ mejni serum/ Stoppserum 

NEG Negativkontrolle/ negative control/ Contrôle négatif/ controllo negativo/ отрицательные контроли 

/control negativo/ αρνητικός έλεγχος/ controlo negativo/ negativní kontrola/ negativ kontrol/ negativ 

kontroll/ Kontrola negatywna/ negatívna kontrola/ negativna kontrola/ Negativ kontroll 

APC Alkalisches Phosphatase Konjugat antihuman/ alkaline phosphatase conjugate anti-human/ conjugué 

phosphatase alcaline anti-humain/ coniugato con fosfatasi alcalina anti-umano/ античеловеческий 

щелочной конъюгат фосфатазы / conjugado anti humano de fosfatasa alcalina/ Σύζευξη αλκαλικής 

φωσφατάσης/ conjugado anti-humano com fosfatase alcalina/ konjugát alkalické fosfatázy antihumánní/ 

alkalisk phosphatase konjugat antihumant/ antihumant alkaliskt fosfatas-konjugat/ Antyludzki 

koniugat fosfatazy alkalicznej/ konjugát antihumánnej alkalickej fosfatázy/ konjugat alkalne 

fosfataze, antihumani/ Alkalisk fosfatase-konjugat, anti-humant 

++++ niedrig-konzentriertes Konjugat/ conjugate with low concentration/ conjugué à faible concentration/ 

coniugato a concentrazione bassa/ конъюгат низкой концентрации /conjugado con concentración 

baja/ Σύζευξη χαµηλής συγκέντωσης/ conjugado de baixa concentração/ konjugát s nízkou 

koncentrací/ konjugat med lav koncentration/ konjugat med låg koncentration/ koniugat o niskim 

stężeniu/ konjugát so strednou koncentráciou/ konjugat z majhno koncentracijo/ Konjugat med lav 

konsentrasjon 

++- mittel-konzentriertes Konjugat/ conjugate with medium concentration/ conjugué à concentration 

moyenne/ coniugato a concentrazione media/ конъюгат средней концентрации /conjugado con 

concentración media/ Σύζευξη µέτριας συγκέντρωσης/ conjugado de concentração intermédia/ 

konjugát se střední koncentrací/ konjugat med medium koncentration/ konjugat med medelhög 

koncentration/ koniugat o średnim stężeniu/ konjugát so strednou koncentráciou/ konjugat s srednjo 

koncent/ Konjugat med middels konsentrasjon 

++++ hoch-konzentriertes Konjugat/ conjugate with high concentration/ conjugué à concentration élevée/ 

coniugato a concentrazione alta/ высококонцентрированный конъюгат/ conjugado con 

concentración alta/ σύζευξη υψηλής συγκέντρωσης/ conjugado de elevada concentração/ konjugát 

s vysokou koncentrací/ konjugat med høj koncentration/ konjugat med hög koncentration/ koniugat o 

wysokim stężeniu/ konjugát s vysokou koncentráciou/ konjugat z veliko koncentracijo/ Konjugat med 

høy konsentrasjon 

RF Rheumafaktor-Absorbens (Rf-Absorbens)/ rheumatoid factor absorbent (rf-absorbent)/ absorbant de 

facteur rhumatoïde (rf-absorbant)/ adsorbente del fattore reumatoide (adsorbente Rf)/ абсорбент 

ревматоидного фактора (Rf-абсорбент) /absorbente de factor reumatoide (material absorbente de 

Rf)/ Απορροφητής ρευµατοειδούς παράγοντα (απορροφητής Rf)/ absorvente de factor reumatóide 

(absorvente de Fr)/ absorbent revmatoidního faktoru (rf-absorbent)/ reumafaktor- absorptionsmiddel 

(rf-absorptionsmiddel)/ reumafaktor-absorptionsmedel (rf-absorptionsmedel)/ Absorbent czynnika 

reumatoidalnego (absorbent RF)/ absorbent reumatoidného faktora (absorbent rf)/ absorbent 

revmatoidnega faktorja (absorbent RF)/ Revmatoid faktor-absorbent (rf-absorbent) 

DILB 

DILBS1 

DILBS2 

DILBS3 

Verdünnungspuffer für Serum/ dilution buffer for sera/ sérum pour le tampon de dilution/ tampone di 

diluizione per sieri / разбавляющий буфер для сыворотки / solución amortiguadora para los sueros/ 

ρυθµιστικό διάλυµα αραίωσης για ορούς/ tampão de diluição para soro/ ředicí pufr pro séra/ 

fortyndingsbuffer til sera/ spädningsbuffert för serum/ bufor rozcieńczający do surowic / pufor na 

riedenie sér/ pufer za redčenje seruma/ Fortynningsbuffer til serum

WASH Waschlösungskonzentrat/ washing solution concentrate/ concentré de solution de lavage / soluzione 

di lavaggio concentrata / промывочный концентрат /concentrado de solución de lavado/ 

συµπύκνωµα έκπλυσης/ concentrado de solução de lavagem/ koncentrát promývacího roztoku/ 

vaskeopløsningskoncentrat/ tvättlösningskoncentrat/ Stężony roztwór do płukania/ koncentrát 

premývacieho roztoku/ koncentrat za raztopino za izpiranje/ Vaskeløsningskonsentrat 

pNPP pNPP Substrat/ pNPP substrate/ substrat Pnpp/ substrato pNPP/ pNPP субстрат / sustrato pNPP/ 

Υπόστρωµα pNPP/ substrato pNPP/ pNPP substrát/ pNPP-substrat/ pNPP-substrat/ Substrat pNPP/ 

substrát pNPP/ substrat pNPP/ pNPP-substrat 

STOP Stopplösung/ stopping solution/ solution d'arrêt/ soluzione di arresto/стоп-раствор/ solución de 

parada/ διάλυµα διακοπής/ solução de paragem/ zastavovací roztok/ stopopløsning/ stopplösning/ 

roztwór zatrzymujący reakcję/ ukončovací roztok/ raztopina za ustavitev reakcije/ stoppeløsning 

ätzend/ corrosive/ corrosif/ corrosivo/ едкий /corrosivo/ διαβρωτικό/ corrosivo/ žíravý/ ætsende/ 

frätande/ czynnik korozyjny/ korozívne/ jedko/ etsende 

ätzend/ corrosive/ corrosif/ corrosivo/ едкий /corrosivo/ διαβρωτικό/ corrosivo/ žíravý/ ætsende/ 

frätande/ czynnik korozyjny/ korozívne/ jedko/ etsende 

INFO Gebrauchsanweisung, Zertifikat (Standardkurve und Auswertetabelle), CD/ instructions, certificate 

(standard curve and evaluation table), CD/ instructions, certificat (courbe de référence et tableau 

d'évaluation), CD/ istruzioni per l’uso, certificato (curva standard e tabella interpretativa), CD/ 

Инструкция по применению, сертификат (стандартная кривая и таблица для оценки), 

компактный диск /instrucciones, certificado (curva patrón y tabla de evaluación), CD/ Οδηγίες χρήσης, 

Πιστοποιητικό (πρότυπη καµπύλη και πίνακας υπολογισµού), CD/ instruções, certificado (curva 

padrão e tabela de avaliação), CD/ (standardní křivka a vyhodnocovací tabulka), CD/ brugsanvisning, 

certifikat (standardkurve og evalueringstabel), CD/ instruktioner, certifikat (standardkurva och 

utvärderingstabell), CD/ Instrukcje, certyfikat (krzywa standardowa i tabela do określania wyników/ 

CD/ pokyny, certifikát (štandardná krivka a hodnotiaca tabuľka), disk CD/ navodila, certifikat 

(standardna krivulja in ocenjevalna tabela), CD/ Instruksjoner, sertifikat (standardkurve og 

evalueringstabell), CD 

RTU gebrauchsfertig/ ready-to-use/ prêt à l'emploi/ pronto per l'uso/ готовый к использованию /listo para 

usar/ έτοιµο προς χρήση/ pronto a utilizar/ připravený k použití/ klar til brug/ bruksfärdig/ gotowy do 

użycia/ pripravené na použitie/ pripravljen za uporabo/ klar til bruk 

CONC Konzentrat/ concentrate/ concentré/ concentrato/ концентрат / concentrado/ Συµπύκνωµα/ 

concentrado/ koncentrát/ koncentrat/ koncentrat/ Koncentrat/ koncentrát/ koncentrat/ Konsentrat 

DIL verdünnen oder lösen in/ dilute or disolve in/ diluez ou dissoudre dans/ diluire o sciogliere in/ 

разбавить или растворить в /diluir o disolver en/ αραίωση ή διάλυση σε/ diluir ou dissolver em/ 

nařeďte nebo rozpusťte v/ fortynd eller opløs i/ späd eller lös i/ Rozcieńczyć lub rozpuścić w/ rozriediť 

alebo rozpustiť v/ razredčite ali raztopite v/ Fortynnes eller løses opp i 

AQUA destilliertes Wasser/ aqua detillata/ eau distillée/ acqua distillata/ дистиллированная вода /agua 

destilada/ αποσταγµένο νερό/ água destilada/ destilovaná voda/ destilleret vand/ destillerat vatten/ 

woda destylowana/ destilovaná voda/ destilirana voda/ Destillert vann 

IVD In-vitro Diagnostik Anwendung/ in-vitro diagnostic use/ utilisation en diagnostic in-vitro/ uso 

diagnostico in vitro/ использование в диагностике ин-витро /uso diagnóstico in-vitro/ ∆ιάγνωση, 

χρήση in-vitro/ para diagnóstico in vitro/ diagnostické použití in-vitro/ til in-vitro diagnostik/ in vitrodiagnostisk 

användning/ do diagnostyki in vitro/ diagnostické použitie in-vitro/ uporaba pri diagnostiki 

in vitro/ In vitro-diagnostisk bruk


102 Masern Virus / Measles Virus / Rougeole 1262 Parainfluenza Virus 2 

103 Mumps Virus / Parotitis virus / Oreillons 1263 Parainfluenza Virus 3 

104 Varicella-Zoster Virus (VZV) 127 Mycoplasma pneumoniae 

105 Herpes simplex Virus 1/2 128 Adenovirus 

1051 Herpes simplex Virus 1 129 Röteln Virus / Rubella virus / virus de rubéole 

1052 Herpes simplex Virus 2 130 Diphtherie / Diphtheria 

106 Legionella pneumophila 1-7 1311 Coxiella burnetii (Q-Fieber) Phase 1 / Coxiella 

burnetii (Q-fever) phase 1 

107 Echinococcus 1312 Coxiella burnetii (Q-Fieber) Phase 2 / Coxiella 

burnetii (Q-fever) phase 2 

108 Tetanus 132 Aspergillus fumigatus 

109 Cytomegalovirus 133 Enterovirus 

110 Toxoplasma gondii 134 Coxsackievirus 

112 FSME Virus / TBE Virus 135 Echovirus 

113 Resp. Syncytial Virus (RSV) 1361 Epstein-Barr Virus VCA 

114 Dengue Virus 1362 Epstein-Barr Virus EBNA 1 

116 Brucella 1363 Epstein-Barr Virus Early Antigen 

117 Candida albicans 137 Chlamydia 

118 Helicobacter pylori 1371 Chlamydia pneumoniae 

120 Bordetella pertussis 1372 Chlamydia trachomatis 

1201 Bordetella pertussis Toxin 138 Yersinia 

121 Borrelia burgdorferi 139 Campylobacter jejuni 

122 Parvovirus B19 140 Bacillus anthracis 

1231 Influenza A Virus 142 Francisella tularensis 

1232 Influenza B Virus 143 Tyroperoxidase 

125 Leptospira 144 Thyroglobulin 

126 Parainfluenza Virus 1, 2, 3 145 Hantavirus Puumala 

1261 Parainfluenza Virus 1

Toxoplasma V18-deu NEU - virion\serion

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