PRODUKTBEILAGE - Immucor, Inc.

Immucor Transplant Diagnostics, Inc.
550 West Avenue, Stamford, CT 06902
Tel: (203) 328-9500 or (888) 329-0255, Fax: (203) 328-9599
WWW.IMMUCOR.COM
Produktdokumentation und Übersetzungen erhältlich bei: http://www.Immucor.com
PRODUKTBEILAGE
LIFECODES LifeScreen Deluxe (LMX) ist ein Luminex ® Screening Assay zum Nachweis von IgG-Antikörpern zu HLA-Klasse I und HLA-Klasse II-
Molekülen aus Humanmaterial.
Für in-vitro-Diagnose.
Definition der Symbole……………….….…...
Zweckbestimmung…………………………….
Zusammenfassung und Erläuterung………..
Verfahrensprinzipien……………………….….
Reagenzien……………………………………..
A. Identifizierung……………………….……
B. Sicherheits- und Warnhinweise…….....
C. Anweisungen für die Aufbewahrung.
D. Reinigung bzw. Vorbereitung vor den
Gebrauch…......................................
E. Instabilitätshinweise……………………..
Erforderliche Geräte…….…………………….
Gewinnung und Aufbereitung der Proben..
DEFINITION DER SYMBOLE
(Produktetiketten und zusätzliche Dokumente)
INHALTSVERZEICHNIS
1
2
2
2
2
2
2
3
Charge Bestellnummer Verfallsdatum
3
3
3
3
Verfahren……………………………………….…
A. Mitgelieferte Materialien …………………
B. Erforderliche, aber nicht mitgelieferte
Materialen...……………………………........
Gebrauchsanweisung………..………………….
Qualitätskontrolle……………...………………….
Ergebnisse……………………….………………….
Grenzen des Verfahrens…..……………………..
Fehlersuche…...……………………………………
Besondere Leistungsmerkmale………………...
Literatur…..………………………………………….
3
3
3
3
4
5
5
6
6
6
Vor Gebrauch
verdünnen
Name des
Patienten
Bead
Mittlere
Fluoreszenz-
Intensität
Positivkontroll-
Bead
(Immunoglobulin G)
Spendedatum
DIL
NAME
BEAD
MFI
Lichtempfindlich
(Vor Licht schützen)
Ethnische
Zugehörigkeit
Auswertung
(siehe
Ergebnisteil)
Ausreichend
für N Ansätze
Lagertemperatur
Gebrauchsanweisung
beachten
ID# Datum DATE Techniker TECH
ETHN Spender DONOR
SCORE Interpretation INTRP
Identifizierungsnummer
Hintergrund-
Anpassungsfaktor
Negativkontroll-
Bead
IgG Klasse I CLI Klasse II CLII Probe SAMPLE
BDT
Anzahl der
Beads, die
Antigen
enthalten
Hersteller
Vertreter
Europa:
BAF
CON
EC REP
Beobachtete
Bandbreiten
Observed
Ranges
Kontrollmaterialien
Controls
Biologische
Risiken
Achtung!
Siehe Begleitdokumente
Siehe Begleitdokumente
Bead Mix
Lot #
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ZWECKBESTIMMUNG
LIFECODES LifeScreen Deluxe ist ein qualitatives Bead-basiertes Immunoassay zum Nachweis von IgG-Antikörpern gegen HLA-Klasse-Iund
-Klasse-II-Moleküle.
ZUSAMMENFASSUNG UND ERLÄUTERUNG
Humane Leukozytenantigene (HLA) stellen ein System von Glykoproteinen dar, denen eine funktionelle Rolle bei der Präsentierung von
Peptiden an das Immunsystem zukommt. 1,2 Als hochgradig polymorphes System können die HLA-Moleküle jedoch zum Ziel von
Antikörperreaktionen beim Menschen während der Schwangerschaft, der Transfusion von Blutprodukten oder der Organabstoßung nach
Transplantationen werden. Im Allgemeinen führt die Alloimmunisierung bei etwa 33 % der betroffenen Personen zur Produktion von HLA-
Antikörpern. 3 Das Vorhandensein bzw. das Fehlen dieser HLA-spezifischen Antikörper spielt eine Rolle bei der Bestimmung der
Überlebensrate von Allotransplantaten. 4
LIFECODES LifeScreen Deluxe Beads sind für den Nachweis von IgG-Antikörpern gegen Antigene der HLA-Klasse I und Klasse II
vorgesehen. LifeScreen besteht aus besonderen Luminex-Beads, zu denen affinitätsgereinigte Klasse-I-HLA- und Klasse-II-HLA-
Glykoproteine konjugiert werden.
VERFAHRENSPRINZIPIEN
Eine Teilprobe der Beads mit einer kleinen Menge Testserumprobe inkubieren lassen. Die sensibilisierten Beads werden anschließend
gewaschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen. Danach wird ein Phycoerythrin-konjugierter antihumaner IgG-Antikörper beigefügt.
Nach einer weiteren Inkubation wird die Testprobe verdünnt und auf dem Luminex-Gerät analysiert. Die Signalintensität der einzelnen Beads
wird mit der Signalintensität eines mit verwendeten Negativkontroll-Beads verglichen, um festzustellen, ob das Bead für gebundene
Alloantikörper positiv oder negativ ist.
REAGENZIEN
A. Identifizierung
628215: LMX LIFECODES LifeScreen Deluxe besteht aus fünf (5) Komponenten.
Folgendes wird in ausreichender Menge für 96 Tests bereitgestellt.
1. LMXB LifeScreen Deluxe Beads (480 µl): Eine Mischung von Beads, von denen jedes mit Klasse-I-HLA-Glykoproteinen oder Klasse-II
HLA-Glykoproteinen konjugiert ist plus vier (4) Kontrollbeads. Als Lagerungspuffer dient ein phosphatbasierter Puffer mit den Bestandteilen
NaCl, Tween-20, ProClin 300 und Rinderserumalbumin. LICHTEMPFINDLICH. Regelmäßige Lichteinwirkung auf drei Stunden oder weniger
beschränken. Gebrauchsfertig. Bei 2 °C bis 8 °C im Dunkeln aufbewahren.
2. LMCJS Konjugatkonzentrat (550 µl): 10x Phycoerythrin-konjugiertes antihumanes Ziegen-IgG in einem phosphatbasierten
Lagerungspuffer mit den Bestandteilen NaCl, Tween-20, Natriumazid und Rinderserumalbumin. DIL MUSS vor Gebrauch 1 zu 10 in
Waschpuffer VERDÜNNT werden. LICHTEMPFINDLICH. Lichteinwirkung auf drei Stunden oder weniger beschränken. Bei 2 °C bis 8 °C im
Dunkeln aufbewahren.
3. LMWB Waschpuffer (150 ml): Ein phosphatbasierter Puffer mit den Bestandteilen NaCl, Tween-20, Natriumazid und Rinderserumalbumin.
Gebrauchsfertig. Bei 2 °C bis 8 °C aufbewahren und vor Gebrauch auf Zimmertemperatur (20 °C bis 24 °C) äquilibrieren.
Folgendes wird in ausreichender Menge für sechs (6) Durchläufe bereitgestellt.
4. LMPC Positivkontrollserum (80 µl): Dieses Serum- oder Seren-Gemisch ist von Einzelpersonen entnommen, die nachweislich gegen
HLA-Antigene alloimmunisiert sind. Enthält Natriumazid. Gebrauchsfertig. Bei 2 °C bis 8 °C aufbewahren.
5. LMNC Negativkontrollserum (80 µl): Dieses Serum- oder Seren-Gemisch ist von Einzelpersonen entnommen, die nachweislich über
keine Antikörper gegen HLA-Antigene verfügen. Enthält Natriumazid. Gebrauchsfertig. Bei 2 °C bis 8 °C aufbewahren.
B. Sicherheits- und Warnhinweise
1. Für in-vitro-Diagnose.
2. Bei der Herstellung dieses Kits verwendetes Humanmaterial wurde getestet und mittels von der FDA (Überwachungsbehörde
für Lebens- und Arzneimittel in den USA) anerkannten Methoden für negativ in Bezug auf Antikörper gegen HIV, HCV und
HBsAg befunden. Keine Testmethode kann jedoch völlige Sicherheit dafür bieten, dass keinerlei infektiöse Keime präsent sind.
Wenden Sie daher bei der Handhabung dieser Materialien allgemeine Vorsichtsmaßnahmen an.
3. Der Ersatz der in diesem System mitgelieferten Komponenten durch andere kann zu fehlerhaften Ergebnissen führen.
4. Einige Reagenzien enthalten 0,1 % Natriumazid als Konservierungsmittel, welches mit in Abflussinstallationen verwendetem
Blei oder Kupfer reagieren und explosive Metallazid-Verbindungen bilden kann. Beim Entsorgen der Stoffe über ein
Spülbecken daher mit reichlich Wasser nachspülen.
5. Bakterielle Kontamination der Proben oder die Existenz von Immunkomplexen oder sonstigen Immunoglobulinaggregaten kann
zu erhöhter unspezifischer Bindung und zu fehlerhaften Ergebnissen führen.
6. Mit diesem Produkt werden IgG-Antikörper nachgewiesen, die lymphozytotoxisch sein können oder auch nicht.
7. Dieses Produkt ist nicht zum Nachweis von Antikörpern der IgA- bzw. der IgM-Klasse der Immunoglobuline bestimmt.
8. Diese Produkte sind für den Gebrauch mit dem Luminex-Gerät gemäß den Empfehlungen des Herstellers vorgesehen.
9. Sämtliche Materialien sind nach Gebrauch gemäß den lokal geltenden Vorschriften zu entsorgen.
10. Siehe Sicherheitsdatenblätter für weitere Informationen.
C. Anweisungen für die Aufbewahrung
1. Die auf den Produktetiketten angegebenen Aufbewahrungshinweise beachten.
2. LifeScreen Deluxe Beads und Konjugatkonzentrat sind LICHTEMPFINDLICH. Regelmäßige Lichteinwirkung auf drei Stunden
oder weniger beschränken.
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D. Reinigung bzw. Vorbereitung für den Gebrauch
1. LMCJS Konjugatkonzentrat: DIL MUSS VOR GEBRAUCH 1:10 oder 1+9 in Waschpuffer verdünnt werden. Pro Probe verdünntes
Konjugat (5 μl Konjugatkonzentrat zu 45 μl Waschpuffer) vorbereiten. Bis zur Verwendung mit Folie abdecken und/oder im Dunkeln bei
Zimmertemperatur (20 °C bis 24 o C) aufbewahren. Den nicht verwendeten Anteil Konjugatkonzentrat für den zukünftigen Gebrauch bei 2 °C
bis 8 °C im Dunkeln wieder einlagern.
2. LMWB Waschpuffer: Vor Gebrauch auf Raumtemperatur (20 °C bis 24 °C) äquilibrieren.
E. Instabilitätshinweise
1. Komponenten bzw. Kontrollmaterialien, die eine Trübung aufweisen bzw. deren Verfallsdatum abgelaufen ist, dürfen nicht mehr
verwendet werden.
2. Ungebrauchte verdünnte Positiv- und Negativkontrollen und gebrauchte Konjugate sind nach Gebrauch zu entsorgen.
ERFORDERLICHE GERÄTE
Luminex-Gerät (Lifecodes Produktnummer 888300)
GEWINNUNG UND AUFBEREITUNG DER PROBEN
Blut sollte ohne Zusatz von Antikoagulanzien unter Verwendung der aseptischen Methode gewonnen und nur in frischem Zustand getestet
werden, um die Gefahr von falsch-positiven bzw. falsch-negativen Reaktionen durch unsachgemäße Aufbewahrung oder Kontamination der
Proben zu minimieren. Serum bei 2-8°C für maximal 48 Stunden lagern. Soll es länger gelagert werden, muss es bei oder unter -20 °C oder -
80 °C für bis zu 2 Jahre tiefgefroren werden. Bei einer über 2 Jahre hinausgehenden Lagerung sollten die jeweiligen Labore Methoden für
die Lagerung entwickeln und validieren. Serum sollte während der Aufbewahrung oder beim Transport von roten Blutkörperchen getrennt
gehalten werden. Wiederholtes Einfrieren und Wiederauftauen von Serumproben sollte vermieden werden.
Mikrobiell kontaminierte, hämolysierte, lipämische oder hitzeinaktivierte Seren können zu inkonsistenten Ergebnissen führen und sollten
daher nicht verwendet werden.
Vor dem Assay sollten alle Proben kurz gevortext und zentrifugiert werden (4-5 Minuten 8.000 – 12.000 xg), um eventuell vorhandene
Partikel zu pelletieren.
VERFAHREN
A. Mitgelieferte Materialien (zur genaueren Information siehe REAGENZIEN auf Seite 2)
• HLA-Beads • Negativkontrollserum
• Konjugatkonzentrat • Aufzeichnungsblatt
• Waschpuffer • Plattenformatblatt
• Positivkontrollserum
B. Erforderliche, aber nicht mitgelieferte Materialien, Reagenzien und Ausrüstung (wie aufgelistet oder Äquivalent)
• 5 µl – 50 µl verstellbare Pipetten mit geeigneten Pipettenspitzen • Rotator oder Vortexschüttler mit Plattenadapter
• 250 µl Mehrkanalpipette mit passenden Tipottenspitzen und
Puffertrog
• Millipore Multiscreen-Filterplatten (Kat. Nr. MSBVN1210, Lifecodes
Kat.-Nr. 888633)
• 1,5 – 2,0 ml Mikrozentrifugenröhrchen • Adhäsive Plastikabdeckung (Lifecodes Kat.-Nr. 888631)
• Reagenzgläser für Patienten- und Kontrollproben
• Multiscreen Vakuumpumpe (Millipore Kat.-Nr. MAVM 0960R oder
Qiagen Kat.-Nr. 19504, Lifecodes Kat.-Nr. 888315)
• Kurzzeitwecker
• Luminex-Hüllstromflüssigkeit (1x oder 20x Lifecodes Kat.-Nr. 628005
oder 628025)
• Markierstift
• Luminex Kalibrierungsbeads (CAL 1, CAL 2, CON 1, CON 2;
Lifecodes Kat.-Nr. 628006, 628007, 628008, 628009)
• Destilliertes Wasser • Mikrozentrifuge
GEBRAUCHSANWEISUNG
VORSICHTSMASSNAHMEN:
• Es MUSS sorgfältig darauf geachtet werden, dass eine Kontamination des Waschpuffers sowie des Konjugatkonzentrats
(antihumanes IgG) vermieden wird. Versehentliche Kontamination dieser Reagenzien mit humanem Serum führt zur Neutralisation
des antihumanen IgG und zum Misslingen des Tests.
• Sorgfältige Regulierung der Vakuumstärke beachten! Übermäßiger Vakuumdruck kann dazu führen, dass Beads an der Membran
kleben und Bead-Zählfehler verursachen.
• Während des Pipettierens in die Filterplatte sorgfältig vorgehen. Es muss darauf geachtet werden, dass die Membran dabei nicht
mit der Spitze berührt wird. Bei Berührung der Membran mit der Pipettenspitze besteht die Gefahr, dass die Membran durchstoßen
wird und der Assay somit misslingt.
• Während der Inkubationen muss sorgfältig darauf geachtet werden, dass die Beads nicht spritzen und an den Wänden der
Vertiefungen kleben bleiben. Beim ersten Durchführen des Assays einige Positiv- und/oder Negativ-Kontrolldurchläufe durchführen,
um die optimale Geschwindigkeit für die Rotationsplattform bzw. den Vortexmixer zu bestimmen. Eine Geschwindigkeit von etwa
200 Umdrehungen pro Minute hat sich bei einigen Geräten als wirkungsvoll erwiesen.
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• Das Vorliegen signifikanter Mengen ungebundener Antikörper am Ende des Waschvorgangs, entweder durch ein Übermaß an
Serum oder durch unzureichendes Waschen, kann die Tauglichkeit des Assays, an sensibilisierte Beads gebundenes IgG
nachzuweisen, beeinträchtigen und zu fehlerhaften Ergebnissen führen.
• Eine Probe positiver und negativer Kontrollseren sollte Bestandteil aller Tests sein, um festzustellen, ob technische Fehler oder
Versagen der Reagenzien vorliegen.
• Keine Komponenten aus verschiedenen Chargen mischen.
Testverfahren:
1. Während die übrigen Komponenten weiterhin bei 2 °C bis 8 °C im Dunkeln gelagert werden, den Waschpuffer vor Gebrauch auf
Raumtemperatur (20 °C bis 24 °C) anwärmen. In der Zwischenzeit das Plattenformat-Blatt verwenden, um jedem zu analysierenden
Serum bzw. Kontrollserum eine Position auf der Platte zuzuweisen. Die im Kit mitgelieferten Kontrollseren werden verwendet, um ein
breit reaktives positives Alloserum und ein negatives Serum zu illustrieren.
2. Die ohne Zuweisung verbliebenen Vertiefungen der Filterplatte mit der adhäsiven Plastikabdeckung abdecken. Anschließend die
benötigten Vertiefungen mit 100-300 µl destillierten Wassers anfeuchten. Nach 2-5 Minuten das Wasser durch vorsichtiges Aspirieren
der Platte mittels einer Vakuumpumpe entfernen. (Siehe Empfehlungen des Herstellers für den korrekten Gebrauch.)
3. Die HLA-Beads kurz (30 Sekunden lang) durch Zentrifugieren des Röhrchens bei 600 – 800 x g aufbereiten, um Beads oder Flüssigkeit
vom Deckel oder von den Wänden der Flasche zu entfernen. Gründlich vortexen (~1 Minute), um die Beads gleichmäßig zu
resuspendieren.
4. 40 µl Waschpuffer in jede Testvertiefung der Filterplatte geben, anschließend 12,5 µl Patientenserum oder Kontrollserum und beides
vermischen.
5. 5 µl HLA-Beads in jede der zugewiesenen Vertiefungen geben. Die HLA-Beads alle 2 Minuten erneut vortexen, um die Beads in
Suspension zu halten, während sie verteilt werden.
VORSICHT: Es ist wichtig, die Beads resuspendiert zu halten, um sicherzustellen, dass ausreichend Beads in die Vertiefungen verteilt
werden und um geringe Zählzeiten zu gewährleisten. Unzureichendes regelmäßiges Vortexen führt zum Absetzen der
Beads am Boden des Röhrchens. Dadurch wird eine abweichende Menge von Beads in die Vertiefungen verteilt, was
Durchlaufzeiten und Analysenergebnisse negativ beeinflussen kann.
6. Die Platte mit adhäsiver Plastikabdeckung verschließen und anschließend in Folie bzw. in eine Kiste packen, um sie vor Licht zu
schützen. 30 Minuten lang bei Raumtemperatur (20—24 °C) im Dunkeln auf einer rotierenden Plattform (200 Umdrehungen pro Minute)
inkubieren. Nicht verwendete Anteile Kontrollseren und Beads für den zukünftigen Gebrauch bei 2 °C bis 8 °C im Dunkeln wieder
einlagern.
7. Das Konjugat mit Waschpuffer verdünnen und im Dunkeln aufbewahren (5 µl Konjugat zu 45 µl Waschpuffer pro Probe). Zum Ausgleich
von Pipettierverlusten ist es hilfreich, eine (1) zusätzliche Gabe von verdünntem Konjugat anzufertigen. Bis zur Verwendung mit Folie
abdecken und/oder im Dunkeln bei Raumtemperatur aufbewahren. Den nicht verwendeten Anteil Konjugatkonzentrat für den
zukünftigen Gebrauch bei 2 °C bis 8 °C im Dunkeln wieder einlagern.
8. Nach der 30-minütigen Inkubation die adhäsive Plastikabdeckung entfernen und 100 µl Waschpuffer in jede Vertiefung geben. Durch
leichtes Klopfen an die Seite der Platte mischen und die Platte vorsichtig aspirieren.
VORSICHT: Übermäßiger Vakuumdruck kann dazu führen, dass Beads an der Membran kleben und Probenfehler verursachen. Den
geringstmöglichen zum Aspirieren der Proben erforderlichen Vakuumdruck anwenden.
9. 250 µl Waschpuffer in jede Vertiefung geben, aspirieren und noch zweimal wiederholen, um drei Waschdurchgänge zu erreichen.
VORSICHT: Unzureichendes Waschen kann die Tauglichkeit des Konjugats, an sensibilisierte Beads gebundenes IgG nachzuweisen,
beeinträchtigen und zu falsch-negativen Ergebnissen führen.
10. 50 µl verdünnten Konjugats in jede Vertiefung geben. Die Platte mit Folie abdecken oder in eine Kiste packen, um sie vor Licht zu
schützen. Auf eine rotierende Plattform stellen (bei 200 Umdrehungen pro Minute) oder alle 5-10 Minuten vorsichtig vortexen.
30 Minuten lang bei Zimmertemperatur (20 °C bis 24 °C) inkubieren.
11. Unter Verwendung einer sauberen Pipettenspitze 150 µl Waschpuffer in jede Vertiefung geben und vermischen, um die Beads zu
resuspendieren.
12. Mit dem Luminex-Gerät gemäß den Empfehlungen des Herstellers die Daten sammeln. Verzögerungen von mehr als 3 Stunden können
die Gefahr erhöhen, falsch-positive bzw. falsch-negative Reaktionen zu erhalten. Den nicht verwendeten Anteil Waschpuffer für den
zukünftigen Gebrauch bei 2 °C bis 8 °C wieder einlagern.
QUALITÄTSKONTROLLE
Die Qualitätskontrolle des LMX-Assays ist durch die Einbeziehung von vier Kontroll-Beads (ein positives Kontroll-Bead und drei negative
Kontroll-Beads) in das Testsystem integriert. Die negativen Kontroll-Beads (CON) messen den Hintergrund des Assays und werden
eingesetzt, um das Signal der HLA-Beads zu normalisieren. Diese Beads sollten niedrige MFI-Werte zeigen. Die beobachteten Bereiche der
negativen Kontroll-Beads finden sich im losspezifischen Datenblatt. Außerhalb des Bereichs liegende Daten sollten sorgfältig untersucht
werden.
Das positive Kontroll-Bead (Probe 77) ist mit menschlichem IgG beschichtet und muss mit dem positiven und mit dem negativen
Kontrollserum MFI-Werte > 10.000 ergeben. Wenn die Kontrollen Werte von < 10.000 MFI ergeben, ist möglicherweise das Assay nicht
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ausreichend gewaschen oder das Konjugat beeinträchtigt. Patientenstichproben können mit dem positiven Kontroll-Bead (Probe 77) einen
breiten Aktivitätsbereich aufweisen, müssen jedoch ein Signal von > 3500 MFI ergeben. Ist kein Serum vorhanden, zeigt Probe 77 ein
starkes Signal, während die restlichen Beads einen Durchschnitt von etwa 50 MFI oder weniger aufweisen. Wenn eine Teststichprobe ein
ähnliches Wertmuster zeigt, wurde die Stichprobe möglicherweise versehentlich ausgelassen. Diese Stichproben sollten wiederholt werden.
Alle Kits enthalten positives und negatives Kontrollserum, beide dienen als externe Assay-Kontrollen und müssen bei jedem Testdurchlauf
berücksichtigt werden. Das positive Kontrollserum muss für Probe I-01 und Probe II-01 ein positives Ergebnis aufweisen. Das negative
Kontrollserum muss für alle Beads ein negatives Ergebnis aufweisen.
Der Assay muss entsprechend den Empfehlungen in der Packungsbeilage und unter Einhaltung aller vorgeschriebenen
Qualitätskontrollverfahren gemäß den Vorschriften der jeweiligen Zulassungsbehörden durchgeführt werden.
ERGEBNISSE
Zur Feststellung, ob eine Testprobe positiv für Klasse I- oder Klasse II-HLA-spezifische Antikörper ist, wird zunächst jedes einzelne HLA-
Bead daraufhin untersucht, ob es positiv oder negativ für IgG-Antikörper ist.
Zur Feststellung, ob ein bestimmtes HLA-Bead positiv ist, zuerst die MFI des einzelnen Beads durch die MFI für jedes Negativkontroll-Bead
(CON1, CON2, CON3) teilen. Von diesen Quotienten den Hintergrund-Anpassungsfaktor (BAF) für die entsprechende Bead/CON-
Kombination subtrahieren. Der BAF ist ein vordefiniertes MFI-Verhältnis für jede Bead/CON-Kombination zur Kompensation von auf Bead-
Variation zurückzuführenden Hintergrund. Siehe dazu das mit dem Kit gelieferte chargenspezifische Aufzeichnungsblatt.
Beispiel: individueller Bead-MFI – (BAF) = angepasstes Verhältnis 1
Negativkontroll-Bead 1 (CON1) MFI
individueller Bead-MFI – (BAF) = angepasstes Verhältnis 2
Negativkontroll-Bead 2 (CON2) MFI
individueller Bead-MFI – (BAF) = angepasstes Verhältnis 3
Negativkontroll-Bead 3 (CON3) MFI
Für PROBE I-01 und PROBE II-01 weist ein positiver Wert bei irgendeiner der Berechnungen auf eine positive Bead-Reaktion hin.
Bei allen anderen Beads weist ein positiver Wert bei mindestens zwei der Berechnungen auf eine positive Bead-Reaktion hin.
Ein negativer Wert bei allen drei Berechnungen weist auf eine negative Bead-Reaktion hin.
Bewertung von Testproben-
Eine Probe gilt als positiv für Klasse I-HLA-spezifische Antikörper, wenn mindestens eines der sieben (7) Klasse I-HLA-Beads
positiv ist.
Eine Probe gilt als positiv für Klasse II-HLA-spezifische Antikörper, wenn mindestens eines der fünf (5) Klasse II-HLA-Beads positiv
ist.
Eine Probe gilt als negativ für HLA-spezifische IgG-Antikörper, wenn alle HLA-Beads sich als negativ erweisen.
GRENZEN DES VERFAHRENS
Diese Testergebnisse dürfen nicht die einzige Grundlage für eine klinische Entscheidung sein.
Fehlerhafte Ergebnisse können durch bakterielle Kontamination der Testmaterialien, unzureichende Inkubationszeiten, unzureichendes
Waschen der Beads, Einwirkung von Streulicht auf das Konjugat oder Weglassen von Testreagenzien oder -schritten auftreten.
Das Vorliegen von Immunkomplexen bzw. sonstigen Immunoglobulinaggregaten in der Patientenprobe kann eine erhöhte unspezifische
Bindung zur Folge haben und fehlerhafte Ergebnisse in diesem Assay verursachen.
Mit diesem Produkt werden IgG-Antikörper nachgewiesen, die lymphozytotoxisch sein können oder auch nicht. Die nachgewiesenen
Antikörper sind diejenigen, welche innerhalb der Population verfügbarer, auf dem Aufzeichnungsblatt gelisteter Antigene reaktiv sind.
LifeScreen Deluxe besteht aus besonderen Luminex-Beads, zu denen Klasse-I-HLA- und Klasse-II-HLA-Glykoproteine konjugiert werden.
Für PROBE I-01 werden affinitätsgereinigte HLA-Klasse-I-Glykoproteine von den Thrombozyten von 100 Nordamerikanern europäischer
Herkunft, 100 Nordamerikanern afrikanischer Herkunft und 100 Nordamerikanern hispanischer Herkunft gewonnen. Die aus EBVtransformierten
B-Lymphozyten affinitätsgereinigten und an die PROBE I-02 bis I-07 angefügten HLA-Klasse-I-Glykoproteine sind auf dem
chargenspezifischen Aufzeichnungsblatt erfasst. Für PROBE II-01 werden affinitätsgereinigte HLA-Klasse-II-Glykoproteine, die bei der
Herstellung dieses Produkts verwendet werden, von den EBV-transformierten B-Lymphozyten gewonnen, die folgende HLA-Klasse-II-
Antigene repräsentieren: DR1, DR4, DR7, DR8, DR9, DR10, DR11, DR12, DR13, DR14, DR15, DR16, DR17, DR18, DR103, DR51, DR52
und DR53. Die aus EBV-transformierten B-Lymphozyten affinitätsgereinigten und an die PROBE II-02 bis II-05 angefügten HLA-Klasse-II-
Glykoproteine sind auf dem chargenspezifischen Aufzeichnungsblatt erfasst.
Einige IgA, IgM und Antikörper niedriger Avidität oder mit niedrigem Titer sowie Antikörper gegen seltene Allele werden mit LIFECODES
LifeScreen Deluxe-Assays nicht nachgewiesen.
Wegen der Komplexität des HLA-Testvorgangs sollte nur geschultes Personal mit der Überprüfung der Dateninterpretation betraut werden.
Die Bestimmung der Antikörper-Spezifität mithilfe von LIFECODES LifeScreen Deluxe-Kits muss die Ergebnisse aller Beads
berücksichtigen, einschließlich derjenigen, die an oder nahe der Nachweisgrenze liegen. Kenntnisse der Patientengeschichte und der
kreuzreaktiven Gruppen können bei der Zuordnung der Spezifität zu einem bestimmten Serum nützlich sein.
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FEHLERSUCHE
PROBLEM MÖGLICHE URSACHE ABHILFE
Pulsweise vortexen zum vollständigen
Beadmischung nicht ausreichend suspendiert
Resuspendieren
Niedrige Beadzahl
Geräteversagen – fehlerhafte Kalibrierung
Siehe Gerätehandbuch
Geräteversagen – Probenfluss blockiert
Siehe Gerätehandbuch
Lichtgeschädigte Beads
Neues Kit verwenden
Vakuumdruck zu hoch/Beads haften an Membran Vakuumstärke verringern
Waschvorgang wiederholen und
Unzureichender Waschvorgang
kontrollieren
Kontrollschwellenwert überschritten
Unzureichende Qualität der Probe
Probe neu ziehen
Lichtgeschädigtes Konjugat
Neues Kit verwenden
Positiver Kontrollschwellenwert
Waschvorgang wiederholen und
Unzureichender Waschvorgang
fehlerhaft
kontrollieren
BESONDERE LEISTUNGSMERKMALE
Bei Verwendung von LIFECODES LifeScreen Deluxe-Kits gemäß dem beschriebenen Verfahren weisen die Ergebnisse das Vorliegen bzw.
Fehlen von HLA-IgG-Antikörpern nach. Beim Nachweis von Klasse-I-HLA-spezifischen Antikörpern wiesen die LifeScreen Deluxe-Kits bei
417 bewerteten Serenproben 100 % Co-Positivität (97,6-100 %), 91 % Co-Negativität (87,3-94,1 %) und 95 % Übereinstimmung auf, im
Vergleich zu den Ergebnissen, die mit Hilfe der LifeScreen-Methode erzielt wurden (95 % Zuverlässigkeitsgrenze). Beim Nachweis von
Klasse II-HLA-spezifischen Antikörpern wiesen die LifeScreen Deluxe-Kits 100 % Co-Positivität (97,8-100 %), 93 % Co-Negativität (89,5-95,8
%) und 96 % Übereinstimmung bei 424 bewerteten Serenproben auf, im Vergleich zu den Ergebnissen, die mit Hilfe der LifeScreen-Methode
erzielt wurden (95 % Zuverlässigkeitsgrenze).
In Labortests wurden die folgenden Reagenzien überprüft und zeigten keinen Einfluss auf LIFECODES LifeScreen Deluxe: Remicade
(Centocor), Rituxin (Genentech), Zenapax (Roche), Campath (Genzyme) und Gammaguard (Baxter). Dagegen führte Thymoglobulin
(Genzyme) nachweislich zu falsch-positiven Ergebnissen. Proben, die Thymoglobulin enthalten, führen möglicherweise zu fehlerhaften
Ergebnissen.
LITERATUR
1. Klein, J, Sato, A. The HLA System. N. Engl. J. Med. 2000; 343:702
and 343:782.
2. Parham, P. The Immune System. Garland Publishing, N.Y. and
London. 2000; 55.
3. Rodey, GE. HLA Beyond Tears (2 nd Edition). DeNovo, Inc. Durango,
CO. 2000; 163.
4. McKenna, RM; Takemoto, SK; Terasaki, PI. Anti-HLA Antibodies
after Solid Organ Transplantation. Transplantation 2000; 69:319.
HERSTELLER UND BEVOLLMÄCHTIGTER VERTRETER
Hersteller: Für Immucor Transplant Diagnostics, Inc., 550 West Avenue, Stamford, Connecticut 06902, USA. Tel.: +1 203-328-9500,
888-329-0255 (gebührenfrei in den USA und Kanada), Fax: +1 203-328-9599
Bevollmächtigter Vertreter: Emergo Europe, Molenstraat 15, 2513 BH, The Hague, The Netherlands..
Tel.: (31) (0) 70 345 8570,Fax: (31) (0) 70 346 7299
Technischer Kundendienst Europa: +32/3 385 47 91
Herausgegeben: Rev 11, 2013-12-23
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