Beteiligung an der Pathogenese von spontan hypertensiven Ratten?

MATERIAL UND METHODEN
2.2.6 Experimentelle Protokolle
2.2.6.1 Lokalisation des B 2 -Rezeptors mittels Immunhistochemie im Gehirn,
Hypophyse und Nebenniere
Der Nachweis für die Lokalisation von B 2 -Rezeptoren im Gehirn, der Hypophyse und der
Nebenniere bei Ratten wurde mittels immunhistochemischer Färbung durchgeführt. Dabei
wurden männliche, normotensive, 12-13 Wochen alte WKY-Ratten verwendet. Sie wurden
in folgende Gruppen eingeteilt (je Gruppe n = 5)
1. Gruppe: Immunhistochemischer Nachweis unter Verwendung von 1. AK, die gegen
B 2 -Rezeptoren gerichtet sind
2. Gruppe: Immunhistochemischer Nachweis unter Verwendung von präabsorbierten 1
1. AK (WME, im Kaninchen erzeugt)
3. Gruppe: Immunhistochemischer Nachweis mit Serum von nicht immunisierten
Kaninchen
4. Gruppe: Immunhistochemischer Nachweis ohne Verwendung des 1. AK
5. Gruppe: Immunhistochemischer Nachweis ohne Verwendung des Sekundärantikörper
Die Gruppen zwei bis fünf weisen die Spezifität des 1. AK gegen B 2 -Rezeptoren nach.
2.2.6.2 Reverse Transkription-Polymerasen-Ketten-Reaktion und Western-
Blotting für die Bestimmung der B 2 -Rezeptor-mRNA und Proteinmengen in
SH-Ratten entsprechend der drei Hypertonieentwicklungsphasen
A: Semiquantitative Bestimmung der B 2 -Rezeptorgenmenge auf mRNA–Ebene mittels
RT-PCR
Folgende Gruppen wurden untersucht:
1. Gruppe: 3-4 Wochen alte (prähypertensive) SH- und normotensive WKY- Ratten
(je Alter und Stamm n = 10)
1 Präadsorption: Der 1. AK wird in einer Lösung durch spezifische Antigene abgefangen und kann daher
später nicht mehr an die spezifischen Antigene der Schnitte binden. Dafür wird der 1. AK in eine Lösung
gegeben, in der sich die 100-fache Konzentration des spezifischen Antigens befindet. Diese Lösung wird
über Nacht bei 4°C auf dem Schüttler inkubiert. Danach wird sie bei 4°C, 10000 rpm für zehn Minuten
zentrifugiert. Der Überstand wird für die immunhistochemische Färbung verwendet.
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