Produktdaten zum Cotinin-Test - Praxisdienst

Artikel: COT-10
Rev: 09-12-04, JM
COTININE KASSETTENTEST
VERWENDUNGSZWECK
Der Cotinin Test ist ein einstufiger Immunoassay zum qualitativen Nachweis
von Cotinin – dem wichtigsten Metabolit des Nikotins in menschlichem Urin.
Der Cut-Off beträgt 150 ng/ml.
Dieser Assay ermöglicht nur ein vorläufiges analytisches Testergebnis. Eine
spezifischere alternative chemische Methode wie z.B. Hochdruck-Liquid-
Chromatographie (HPLC) oder Gas-Chromatographie/Massen-spektrometrie
(GC/MS) sollte angewandt werden, um ein bestätigtes analytisches Ergebnis
zu erhalten.
ZUSAMMENFASSUNG
Der weit verbreitete Gebrauch von Tabakprodukten hat in der Gesellschaft
immense Kosten verursacht. Es gibt ca. 20 Metaboliten des Nikotins, die im
Urin identifiziert werden können. Cotinin ist ein wichtiges Metabolit des
Nikotins, und es sammelt sich im Körper bei regelmäßigem Rauchen an.
Nikotin und Cotinin werden durch dasselbe Leberenzym metabolisiert. Es
wird berichtet, daß Cotinin in Körperflüssigkeiten stabil ist und eine relativ
lange Halbwertzeit von voraussichtlich 17 Stunden hat, daher ist es weniger
abhängig vom Zeitpunkt der Probennahme als Nikotin oder andere
Metaboliten. Analysemethoden des Cotinins in biologischen Flüssigkeiten
schließen Gas-Chromatographie mit ein, Gas-Chromatographie-
MassenSpektrometrie, HPLC, HPLC-Massen-Spektrometrie und RIA. Diese
Methoden erfordern gewöhnlich eine spezielle Ausrüstung und komplizierte
Durchführungsprozeduren.
TESTPRINZIP
Der Cotinin Test arbeitet nach dem Prinzip der kompetitiven Ag-Ak-
Anbindung. Der Test enthält einen Membranstreifen, der mit Cotinin-Antigen
auf der Testlinienregion vorbeschichtet ist. Der Cotinin-Antikörper-
Goldkonjugat-Pad ist am Ende der Membran plaziert. In Cotinin-freiem Urin
bewegt sich die Lösung des farbigen Antikörper-Goldkonjugats und Urins
chromatographisch durch Kapillaraktion entlang der Membran. Diese Lösung
wandert dann zu der immobilisierten Testlinie, die Cotinin-Antigen enthält,
und formt eine sichtbare Linie, wenn der Antikörper sich mit dem Antigen
verbindet. Wenn der Test negativ ist, bildet sich also eine sichtbare Linie in
der Testzone. Wenn Cotinin im Urin präsent ist, konkurriert es mit dem
vorbeschichteten und mit Gold-Konjugat markierten Cotinin um die limitierten
Antikörper-Bindungsstellen auf dem Teststreifen. Wenn eine ausreichende
Konzentration von Cotinin im Urin präsent ist, füllt es die limitierten
Antikörper-bindenden Stellen. Dies verhindert die Anbindung der farbigen
Antikörper-kolloidalen Goldkonjugate auf der Testlinien-Region. Daher zeigt
die Abwesenheit einer farbigen Linie auf der Testregion ein positives
Ergebnis an (Raucher).
MITGELIEFERTE TESTBESTANDTEILE
• Einzeln verpackte Tests
• Eine Pipette /Testkassette (in Pouch enthalten)
• Eine Gebrauchsanweisung
ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE UTENSILIEN
• Stoppuhr
• Probensammelbehälter
EINSATZBEREICH
Der Test ist nur für die Untersuchung von menschlichem Urin entwickelt
worden.
Es besteht die Möglichkeit, dass das Testergebnis durch technische Fehler,
Fehler in der Versuchsdurchführung oder auch Substanzen oder Faktoren, die
den Test beeinflussen und nicht im Abschnitt "Spezifität" erwähnt wurden,
verfälscht wird.
Besteht der Verdacht, eine Probe könnte falsch gekennzeichnet oder
verdorben sein, sollte eine neue Probe genommen werden.
PROBENAHME
Frischer Urin benötigt keine spezielle Handhabung oder Vorbehandlung. Der
Test sollte bald nach der Probengewinnung durchgeführt werden,
vorzugsweise am selben Tag. Die Probe kann für 3 Tage bei 2 – 8°C gekühlt
werden, oder bei –20°C für einen längeren Zeitraum eingefroren werden.
Gekühlte Proben müssen vor dem Testen auf Raumtemperatur gebracht
werden. Eingefrorene Proben müssen aufgetaut, auf Raumtemperatur
gebracht und vor dem Testen gründlich gemischt werden.
DURCHFÜHRUNG DES TESTS
Beachten Sie die Anweisungen zur Probennahme. Testkassetten (im
verschlossenen Beutel), Patientenprobe und Kontrolle sollten vor
Durchführung des Tests auf Raumtemperatur gebracht werden. Öffnen Sie
den Beutel, der die Testkassette enthält, erst unmittelbar bevor Sie den Test
durchführen.
1) Nehmen Sie die Testkassette aus der Schutzhülle und legen Sie sie auf
eine ebene Unterlage. Beschriften Sie die Kassette mit der Probanden-
ID.
2) Geben Sie 3 Tropfen bzw. 120 µl Urin in die Probenöffnung.
Eine Kontrollinie, die eine unterschiedliche Antigen/Antikörper-Reaktion hat,
ist dem immunochromatographischen Membranstrip an der Kontrollregion (
C ) beigefügt, um anzuzeigen, daß der Test korrekt durchgeführt wurde.
Diese Kontrolllinie sollte immer erscheinen, unabhängig vom Cotinin-Status
im Urin. Dies bedeutet, daß negativer Urin zwei farbige Linien hat und
positiver Urin nur eine Linie. Die Anwesenheit dieser farbigen Linie in der
Kontrollregion dient als Indikator dafür, daß 1. eine ausreichende Menge
der Probe zugefügt wurde und 2. der richtige Fluß erreicht wurde.
LAGERUNG UND HALTBARKEIT
Der Test kann im verschlossenen Beutel gekühlt oder bei Raumtemperatur bei
2°C bis 30°C bis zum angegebenen Verfallsdatum aufbewahrt werden.
BITTE BEACHTEN
• Nur für den IN VITRO Gebrauch
• Nur für den professionellen Einsatz
• Zur Vermeidung von Kreuzkontaminationen sollte für jede Probe ein
eigenes Sammelgefäß verwendet werden.
Achtung: Falls der Urin das offene Testfeld direkt benetzt, wird der Test
unbrauchbar!

3) Lesen Sie das Ergebnis nach 8 Minuten, spätestens nach 10 Minuten
ab.
QUALITÄTSKONTROLLE
Das für eine ordentliche Laboruntersuchung erforderliche Kontrollmaterial,
dessen Einsatz empfohlen wird, um das Funktionieren des Tests zu
kontrollieren, ist kommerziell erhältlich. Der Test wird damit auf die gleiche
Weise durchgeführt wie mit einer Patientenprobe.
AUSWERTUNG
Negatives Ergebnis:
Es zeigen sich zwei farbige Banden, eine Testlinie für Cotinin und eine
Kontrollinie, die den korrekten Ablauf des Tests anzeigt. Die Farbintensität
der Testlinie kann schwächer oder stärker sein als die der Kontrollinie.
Positives Testergebnis:
Nur in der Kontrollregion erscheint eine rote Bande. Das Fehlen einer roten
Linie in der Testregion bedeutet ein positives Ergebnis.
Ungültig:
Zeigt sich keine rote Linie in der Kontrollregion, ist der Test ungültig und
sollte wiederholt werden.
negatives und Kontrollen mit einer COT-Konzentration von 400 ng/mL sollten
ein positives Ergebnis liefern.
Konzentration Anzahl der Korrektes In %
in ng/mL
Proben Ergebnis
100 50 50 100
400 50 50 100
D. Spezifität
Die Spezifität des DIAGNOSTIK NORD COT Tests wurde mit den unten
aufgeführten Substanzen, die im Urin enthalten sein können, getestet. Sie
wurden normalem Urin zugesetzt.
Folgende Verbindungen mit einer ähnlichen chemischen Struktur riefen ab
der angegebenen Konzentration ein positives Ergebnis hervor:
Verbindung
Konzentration
(ng/ml)
Cotinin 200
(-)-Nikotin 350.000
Folgende Verbindungen zeigten bis zu einer Konzentration von 100 µg/mL
keine Kreuzreaktion:
Aceton, Albumin, Amitriptylin, Ampicillin, Aspartam, Aspirin, Atropin,
Benzocain, Bilirubin, Chinidin, Chloroquin, (+)-Chlorpheniramin, (+/-)-
Chlorpheniramin, Dexbrompheniramin, Dextromethorphan, 4-
Dimethylaminoantipyrin, Erytromycin, Ethanol, Furosemid, Glucose,
Guajacol-Glyceryl-Äther, Hämoglobin, Imipramin, (+/-)Isoproterenol, Koffein,
Kreatin, Lidocain, (+)-Naproxen, Oxalsäure, Paracetamol, Penicillin-G,
Pheniramin, Phenothiazine, Phenyläthylamin, Procain, Ranitidin, Riboflavin,
Natriumchlorid, Sulindac, Thioridazin, Trifluorperazin, Trimethobenzamid,
Tyramin, Vitamin C
LITERATUR
Anmerkung: Eine sehr schwache Linie in der Testregion zeigt an, dass die
Analyten-Konzentration nahe an der Nachweisgrenze liegt. In diesem Fall
sollte der Test wiederholt oder die Probe sollte zusätzlich mit einer
spezifischeren Methode untersucht werden.
ANALYTISCHE EIGENSCHAFTEN
A. Richtigkeit
Die Richtigkeit des DIAGNOSTIK NORD COT Tests wurde durch den
Vergleich mit einem kommerziell erhältlichen Test für den Grenzwert von
200 ng/mL überprüft. 100 Urinproben von freiwilligen Testpersonen, die
mutmaßlich nicht rauchen, wurden mit beiden Tests untersucht. Die
Ergebnisse zeigten 100%ige Übereinstimmung.
1. Baselt, R.C. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, Biomedical
Publications, 1982
2. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse
(NIDA), Research Monograph 73, 1986
3. Fed. Register, Department of Health and Human Services, Mandatory
Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs, 53, 69, 11970,
1988
4. McBay, A.J. Clin. Chem. 33, 33B-40B, 1987
5. Gilman, A.G., & Goodman, L.S. The Pharmacological Basis of
Therapeutics, eds. MacMillan Publishing, New York, NY, 1980.
SYMBOLERLÄUTERUNGEN
B. Reproduzierbarkeit
Die Reproduzierbarkeit des DIAGNOSTIK NORD COT Tests wurde durch
Blindversuche, die an vier verschiedenen Orten durchgeführt wurden,
überprüft. Alle 50 eingesetzten Proben mit einer COT-Konzentration von 100
ng/mL ergaben ein negatives Ergebnis. Alle 50 Proben mit einer COT-
Konzentration von 400 ng/mL ergaben ein positives Ergebnis.
C. Präzision
Die Präzision des Tests wurde durch Blindversuche mit Kontrollösungen
bestimmt. Kontrollen mit einer COT-Konzentration von 100 ng/mL sollten ein