DCS-Protokoll Färbeprotokoll in der Immunhistochemie am Formalin ...

DCS-Protokoll
DCS Innovative Diagnostik-Systeme
Dr. Christian Sartori GmbH & Co. KG
Poppenbütteler Chaussee 36
D - 22397 Hamburg
mit DCS – DetectionLine Alkalische Phosphatase
(AD000RP)
Telefon: 0 40.60 76 70-0
Fax: 0 40.60 76 70-60
E-Mail: info@dcs-diagnostics.de
www.dcs-diagnostics.de
Färbeprotokoll in der Immunhistochemie
am Formalin-fixierten Paraffinmaterial
Gebrauchsfertiges Nachweissystem mit Alkalischer Phosphatase für
immunhistochemische Färbungen
Bei diesem System handelt es sich um ein gebrauchsfertiges
Nachweissystem mit einem PolyLink-Sekundär-Antikörper
(Link), der Primär-Antikörper aus der
Maus, Kaninchen, Ratte und Meerschweinchen erkennt,
sowie einem Streptavidin-Enzym-Konjugat (Label)
mit Alkalischer Phosphatase.
Das Reagenziensystem ist mit verschiedenen Substrat/
Chromogen-Systemen für Alkalische Phosphatase aus
dem DCS-Produktangebot kombinierbar. Geeignete
Chromogene für die Alkalische Phosphatase sind Fast
Red, Fast Red Permanent, NeuFuchsin und NBT (mit
BCIP als Substrat).
Bei Verwendung von Reagenzien aus der DCS DetectionLine
sind die üblichen Inkubationszeiten in der Immunhistochemie
am Formalin-fixierten Paraffinschnitt:
30 Min. Primär-Antikörper
20 Min. PolyLink
20 Min. Label und
10 Min. Substrat
Ein vorgeschalteter Serumblock ist nicht erforderlich,
wenn der Primär-Antikörper in einem geeigneten
Medium verdünnt wird. Für diesen Zweck eignet sich
der DCS Antikörper-Verdünnungspuffer (AL120R100
oder AL120R500).
Bestandteile:
Polyvalenter Link (Sekundär-Antikörper), gebrauchsfertig 2 x 50 mL
Alkalische Phosphatase-Label (Konjugat), gebrauchsfertig 2 x 50 mL
Spezifikation:
PolyLink-Sekundär-Antikörper
Ziegen-Immunglobuline, biotinyliert
Antigen-Spezifität: Anti-Maus, -Kaninchen, -Ratte, -Meerschweinchen IgG
Präadsorbiert gegen: humanes Serumprotein
Alkalische Phosphatase-Label (AP)
Konjugat von Strepavidin mit Alkalischer Phosphatase
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Protokoll_IHC_AP_1108

DCS-Protokoll
Färbeprotokoll
Deparaffinierung und Rehydrierung der Gewebeschnitte
(z.B. mit EZ-DeWax HK584-5K, DCS oder Xylol und absteigender Alkoholreihe)
Hitze-induzierte Demaskierung
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Hinweis: Vorbehandlungsmethoden wie enzymatische Demaskierungen, oder Hitze-induzierte Desmaskierungen sind für jeden Primär-Antikörper
und jedes Labor unter Umständen individuell auszutesten. Angaben zur Demaskierung und Verdünnungsangaben in Antikörper-Datenblättern sind
als Vorschläge zu werten, da Einflussgrößen wie Gewebefixierung und Prozessierung von Labor zu Labor stark variieren können.
Beispiel Dampfgarer:
Küvette, gefüllt mit Citrat-Puffer (oder anderen Pufferlösungen je nach Angabe auf Datenblatt des Antikörpers) in den Dampfgarer stellen und 20
Min. vorheizen. Objektträger mit Objektträgerhalter in die vorgewärmte Pufferküvette stellen und für 30 Min. weiter kochen. Nach Ablauf der
30 Min. Kochzeit die Pufferküvette mit den Schnitten aus dem Dampfgarer nehmen und für 20 Min. bei RT abkühlen lassen. Optional: Kochpuffer
in der Küvette langsam mit fließendem Leitungswasser ersetzen und anschließend die Schnitte aus dem kalten Leitungswasser entnehmen.
Objektträger abtupfen, mit PAP Pen umranden (nicht zu eng), erst danach in 1x Waschpuffer spülen.
Optional: ProteinBlock 5 Min. mit ProteinBlock inkubieren
Waschen mit 1 x Waschpuffer 3 x 2 Min.
Inkubation mit Primär-Antikörper 30-60 Min. bei RT in einer feuchten Kammer
Waschen in 1x IHC-Waschpuffer 3 x 2 Min.
Inkubation mit Link 10-20 Min. bei RT in einer feuchten Kammer
Waschen in 1x IHC-Waschpuffer oder aqua dest. 3 x 2 Min.
Inkubation mit Label 10-20 Min. bei RT in einer feuchten Kammer
Waschen in 1x IHC-Waschpuffer oder aqua dest. 3 x 2 Min.
Färben mit gewünschtem Substrat / Chromogen (Zeit wie auf Datenblatt angegeben.)
Waschen in 1x IHC-Waschpuffer 3 x 2 Min.
Kernfärbung mit Hämatoxilin z.B. 3 Min. bei RT, je nach gewünschter In
tensität
Bläuen In eine Küvette gefüllt mit Leitungswasser
stellen; Spülen unter Leitungswasser
Eindecken
Vorbehandlung Primär-Antikörper Link Label Chromogen
Hitzevorbehandlung oder
enzym. Vorbehandlung
je nach Fragestellung
30 - 60 Min.
biot. Sekundär-Antikörper
20 Min..
Alk. Phosphatase
20 Min.
Fast Red
Neu Fuchsin
NBT/BCP