Thioglycolat-Bouillon Clear - Heipha Dr.Müller GmbH

Prinzip der Methode und Verfahrensbeschränkungen
Thioglycolat und L-Cystin senken das Redoxpotential des Mediums, wodurch anaerobe Bedingungen
hergestellt werden. Auch Quecksilber und andere Schwermetalle werden durch diese Substanzen inaktiviert.
Der Zusatz von Agar und Geliermittel verhindert eine schnelle Diffusion von Sauerstoff im Medium
und sorgt damit ebenfalls für die Aufrechterhaltung von anaeroben Bedingungen, bei gleichzeitig klarem
Aussehen.
Das Medium enthält weiterhin Resazurin als Redoxindikator, wodurch die Farbe des Mediums unter aeroben
Bedingungen nach rosa wechselt.
Strikte Anaerobier, wie z.B. Clostridium sporogenes wachsen im unteren, gelblich gefärbten Teil der
Bouillon. Fakultative Anaerobier, wie z. B. Staphylococcus aureus wachsen überall in der Bouillon. Aerobe
Keime, wie z.B. Pseudomonas aeruginosa wachsen nur an der Oberfläche im oxidierten, leicht rosa
gefärbten Teil der Bouillon. Da die Inkubation unter aeroben Bedingungen stattfindet, muss insbesondere
für das direkte Inokulationsverfahren in Flaschen für eine Belüftung während der Inkubation gesorgt werden,
um den Aerobiern genügend Sauerstoff zu Verfügung zu stellen. Am Ende der Inkubationszeit sollte
jedoch nicht mehr als die obere Hälfte des Medium einen Farbumschlag von gelb nach rosa aufweisen.
Untersuchungsmaterial und Testvorbereitung / Beschreibung der Durchführung;
Leistungsdaten
Thioglycolat-Bouillon Clear in Flaschen mit Septum oder Schraub-Septum-Verschluss wird unter Vakuum
verschlossen, so dass in der Flasche ein Unterdruck vorliegt. Dies könnte beim Öffnen des Deckels, z. B.
im Rahmen einer Direktbeschickung, zum Eintritt unsteriler Luft und somit zur Kontamination des Kulturmediums
führen. Daher wird empfohlen, vor dem Öffnen des Verschlusses bzw. Durchstechen des Septums
mit einer Kanüle mittels einer sterilen Belüftungseinheit kontrolliert sterile Luft in die Flasche einzuleiten.
Hierzu wird die Verschlusskappe entfernt und das Septum desinfiziert. Danach wird das Septum mit einer
sterilen Belüftungseinheit durchstochen und sterile Luft in die Flasche geleitet. Wenn keine sterile Belüftungseinheit
zur Verfügung steht, sollte sicher gestellt sein, dass die Untersuchungsumgebung keimfrei
ist (Reinraum der Klasse A oder Isolator).
Die Thioglycolat-Bouillon Clear kann nach Validierung entsprechend der Europäischen und US Pharmakopöen
zur Steriltestung von Arzneimitteln eingesetzt werden. Dabei ist dieses Medium zum Nachweis
von Anaerobiern und fakultativ anaeroben Mikroorganismen geeignet. Entsprechend der Vorgaben der
Pharmakopöen wird der Steriltest vorzugsweise als Membranfiltrationsverfahren durchgeführt.
Bei der alternativ möglichen Direktbeimpfung sollte die Menge des zu untersuchenden Probenmaterials
10% des Volumens der Thioglycolat-Bouillon nicht überschreiten.
Kulturbedingungen
Die beimpfte Bouillon wird für 14 Tage bei 30-35°C inkubiert und anschließend auf Trübung durch das
Wachstum von Mikroorganismen geprüft.
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