Thioglycolat-Bouillon Clear - Heipha Dr.Müller GmbH

Thioglycolat-Bouillon Clear
1464560010 (heipha 490100d), 1463330010 (heipha 490100sd)
Zweckbestimmung und Anwendungsbereich
Thioglycolat-Bouillon Clear ist ein Komplexmedium zur Anzüchtung von anaeroben, aber auch einigen
aeroben Mikroorganismen.
Das Medium entspricht in seiner Zusammensetzung weitgehend den Empfehlungen der aktuellen European
Pharmacopeia (EP) und der United States Pharmacopoeia (USP). Ein Teil der empfohlenen Agarmenge
ist in dieser Formulierung durch ein klares, gelierendes Agens ersetzt.
Die Thioglycolat-Bouillon Clear eignet sich für den Sterilitätstest von pharmazeutischen Produkten.
Es sind folgende Abfüllungen erhältlich:
� Thioglycolat-Bouillon Clear - Art.-Nr. 1464560010 (heipha 490100d) (125 ml-Flasche mit Septum,Füllvolumen
100 ml)
� Thioglycolat-Bouillon Clear - Art.-Nr. 1463330010 (heipha 490100sd) (125 ml-
Schraubverschlussflasche mit Septum, Füllvolumen 100 ml)
Typische Zusammensetzung pro l
Caseinpepton (Pankreashydrolysat) 15 g Glucosemonohydrat 5,5 g
Hefeextrakt 5 g NaCl 2,5 g
Natriumthioglycolat 0,5 g L-Cystin 0,5 g
Agar / Geliermittel 0,2 g Resazurin 1 mg
pH 7,1 � 0,2
Die Bouillon ist klar und gelblich gefärbt.
Lagerbedingungen und Verwendungsdauer
Das Produkt ist gemäß den Angaben auf dem Etikett in der Originalverpackung zu lagern sowie vor Licht
und direkter Sonneneinstrahlung zu schützen.
Die Bouillon muss vor dem Beimpfen auf Raumtemperatur gebracht werden. Die Haltbarkeit des Produktes
im ungeöffneten Zustand ist auf dem Etikett angegeben. Nach Ablauf des Verfalldatums sollte es
nicht mehr verwendet werden.
Warnhinweise und Vorsichtsmaßregeln
Die Berührung sowie das Anhusten oder -niesen eines unbeimpften Nährmediums ist generell zu vermeiden,
da dies zur Kontamination des Nährmediums führen kann. Nach einem solchen Vorfall ist das
Nährmedium zu verwerfen und darf nicht mehr eingesetzt werden.
Nährmedien, die Inhaltsstoffe tierischen oder menschlichen Ursprungs enthalten (wie z. B. Schaf- oder
Humanblut oder Fleischextrakt - siehe Zusammensetzung) sind als potentiell infektiös anzusehen. Ein
Kontakt des Anwenders mit solchen Medien ist zu vermeiden. Nach direktem Kontakt mit dem Medium
wird die Desinfektion des betroffenen Hautareals empfohlen.
Mikrobiologische Fertigmedien sind zum einmaligen Gebrauch bestimmt.
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Prinzip der Methode und Verfahrensbeschränkungen
Thioglycolat und L-Cystin senken das Redoxpotential des Mediums, wodurch anaerobe Bedingungen
hergestellt werden. Auch Quecksilber und andere Schwermetalle werden durch diese Substanzen inaktiviert.
Der Zusatz von Agar und Geliermittel verhindert eine schnelle Diffusion von Sauerstoff im Medium
und sorgt damit ebenfalls für die Aufrechterhaltung von anaeroben Bedingungen, bei gleichzeitig klarem
Aussehen.
Das Medium enthält weiterhin Resazurin als Redoxindikator, wodurch die Farbe des Mediums unter aeroben
Bedingungen nach rosa wechselt.
Strikte Anaerobier, wie z.B. Clostridium sporogenes wachsen im unteren, gelblich gefärbten Teil der
Bouillon. Fakultative Anaerobier, wie z. B. Staphylococcus aureus wachsen überall in der Bouillon. Aerobe
Keime, wie z.B. Pseudomonas aeruginosa wachsen nur an der Oberfläche im oxidierten, leicht rosa
gefärbten Teil der Bouillon. Da die Inkubation unter aeroben Bedingungen stattfindet, muss insbesondere
für das direkte Inokulationsverfahren in Flaschen für eine Belüftung während der Inkubation gesorgt werden,
um den Aerobiern genügend Sauerstoff zu Verfügung zu stellen. Am Ende der Inkubationszeit sollte
jedoch nicht mehr als die obere Hälfte des Medium einen Farbumschlag von gelb nach rosa aufweisen.
Untersuchungsmaterial und Testvorbereitung / Beschreibung der Durchführung;
Leistungsdaten
Thioglycolat-Bouillon Clear in Flaschen mit Septum oder Schraub-Septum-Verschluss wird unter Vakuum
verschlossen, so dass in der Flasche ein Unterdruck vorliegt. Dies könnte beim Öffnen des Deckels, z. B.
im Rahmen einer Direktbeschickung, zum Eintritt unsteriler Luft und somit zur Kontamination des Kulturmediums
führen. Daher wird empfohlen, vor dem Öffnen des Verschlusses bzw. Durchstechen des Septums
mit einer Kanüle mittels einer sterilen Belüftungseinheit kontrolliert sterile Luft in die Flasche einzuleiten.
Hierzu wird die Verschlusskappe entfernt und das Septum desinfiziert. Danach wird das Septum mit einer
sterilen Belüftungseinheit durchstochen und sterile Luft in die Flasche geleitet. Wenn keine sterile Belüftungseinheit
zur Verfügung steht, sollte sicher gestellt sein, dass die Untersuchungsumgebung keimfrei
ist (Reinraum der Klasse A oder Isolator).
Die Thioglycolat-Bouillon Clear kann nach Validierung entsprechend der Europäischen und US Pharmakopöen
zur Steriltestung von Arzneimitteln eingesetzt werden. Dabei ist dieses Medium zum Nachweis
von Anaerobiern und fakultativ anaeroben Mikroorganismen geeignet. Entsprechend der Vorgaben der
Pharmakopöen wird der Steriltest vorzugsweise als Membranfiltrationsverfahren durchgeführt.
Bei der alternativ möglichen Direktbeimpfung sollte die Menge des zu untersuchenden Probenmaterials
10% des Volumens der Thioglycolat-Bouillon nicht überschreiten.
Kulturbedingungen
Die beimpfte Bouillon wird für 14 Tage bei 30-35°C inkubiert und anschließend auf Trübung durch das
Wachstum von Mikroorganismen geprüft.
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Qualitätskontrolle
Teststamm Inokulum /
Inkubationsbedingungen
Clostridium sporogenes
ATCC 11437
Clostridium sporogenes
ATCC 19404
Staphylococcus aureus
ATCC 6538
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 9027
Weiterführende Identifizierung
10-100 KBE/
1 d bei 34 ± 1°C
10-100 KBE/
1 d bei 34 ± 1°C
10-100 KBE/
1 d bei 34 ± 1°C
10-100 KBE/
1 d bei 36 ± 1°C
Wachstumseigenschaften
gutes Wachstum, sichtbare Trübung
des Mediums
gutes Wachstum, sichtbare Trübung
des Mediums
gutes Wachstum, sichtbare Trübung
des Mediums
gutes Wachstum, sichtbare Trübung
des Mediums
Der Steriltest gilt als bestanden, wenn am Ende der Inkubationszeit kein Wachstum von Mikroorganismen
im Medium feststellbar ist.
Im Falle einer Trübung des Medium empfiehlt es sich, eine Identifizierung der gewachsenen Mikroorganismen
durchzuführen, um die Ursache der Kontamination zu klären und Korrektivmaßnahmen einleiten
zu können.
Entsorgung
Bitte beachten Sie bei der Entsorgung von bewachsenen Nährmedien die jeweils gültigen gesetzlichen
Vorschriften (z. B. 20 Minuten bei 121°C autoklavieren, desinfizieren, verbrennen usw.).
Literatur
European Pharmacopoeia 7.1 (2010); 2.6.1. Sterility.
United States Pharmacopoeia 32 NF 27 1 st supplement (2009): Sterility tests.
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