изтегли приложението

Приложение на
флоуцитометрията при
плазмоклетъчни неоплазии
29 април – 1 май 2011
Трявна

World Health Organization Classification of
Plasma Cell Neoplasms
Monoclonal gammopathy of undetermined significance (MGUS)
Plasma cell myeloma
Nonsecretory myeloma
Plasma cell leukemia
Asymptomatic (smoldering) myeloma
Plasmacytoma
Solitary plasmacytoma of bone
Extraosseous (extramedullary) plasmacytoma
Immunoglobulin deposition diseases
Primary amyloidosis
Systemic light- and heavy-chain deposition diseases
Osteosclerotic myeloma (POEMS syndrome)
From McKenna RW, Kyle RA, Kuehl WM, et al. Plasma cell neoplasms. In: Swerdlow SH, Campo E, Harris NL,
et al, eds. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Lyon, France:
IARC; 2008:200-213.

Плазмоклетъчните неоплазии се
характеризират с:
1. Пролиферация на базирана в костния
мозък клонална плазмоцитна популация
2. Наличие на моноклонален
имуноглобулин (парапротеин) в серум
и/или урина. 3. Наличие/отсъствие
на свързани с
основното заболяване
тъканни и органни
увреди (костна болест,
имунопареза, анемия,
бъбречна
недостатъчност и т.н).

Идентификация на плазмоцитната
популация в костномозъчен
аспират
• След морфологична преценка за
целесъобразността на изследването и
съпоставка с клиничните индикации
• 1х10 6 клетки се маркират и обработват в
съответствие със стандартна lyse-wash
методика
• Във всяка епруветка задължително присъства
антитяло към поне един от “специфичните”
плазмоцитни антигени CD138 и CD38.

Гейтираща стратегия
CD38 vs. SSC
CD138 vs. SSC
CD138 vs.CD38
НСБАЛХЗ, 2011

Гейтираща стратегия
CD45 vs. SSC
X
НСБАЛХЗ, 2011

Плазмоцитен дял :
Морфология vs. МФЦ
>
цитология
%
13.9 ±
15.8%
41,5 ±
28,9%
флоуцитометрия %
• разреждане с
периферна кръв
• специфични
адхезионни
свойства

Лековерижната рестрикция
като маркер за клоналност
Нормално
Абнормно
κ : λ = 0,5 :1 до 4 : 1
• Клоналните клетки
носят едни и същи
имуноглобулинови
пренареждания =>
експресират в
цитоплазмата една
и съща лека верига

Пример за поликлонална и
клонална плазмоцитна
популация
κ : λ = 1.7 :1
Нормално
κ : λ = 0,12 :1
Абнормно
κ : λ = 415:1
Класика
НСБАЛХЗ, 2011

Нормален плазмоцитен
фенотип
117-
117-
45+56-
19+20- 28-
27+
НСБАЛХЗ
2011

Аберантен плазмоцитен
фенотип
45-56+ 19-20+ 28+
27-
117-
117+
НСБАЛХЗ
2011

Нашият опит (n=89)
– 67 новодиагностицирани
- 22 лекувани с конвенционални
протоколи НСБАЛХЗ, 2011

Аберантният фенотипен
профил не е включен в
диагностичните критерии.
Защо да го изследваме?

1. В подкрепа на диагнозата
• При атипична морфология, но насочваща
клинична картина (анапластни, плазмобластни,
с лимфоцитна морфология миеломи)
• Особени клинични варианти – несекретиращ
миелом, плазмоклетъчна левкемия.
• За разграничаване от реактивна плазмоцитоза
(поликлонални с нормален фенотип)
• За разграничаване от НХЛ с присъствие на
значителна плазмоцитна компонента
(клонални лимфоцити и плазмоцити, като
плазмоцитите са с нормален фенотип)

2. Предиктивна и прогностична
стойност на аберантния фенотип
• Прогностична стойност на имунофенотипните
констелации - търси се още от 90-те години
Българският опит (Марков и сътр., 1998г.)
• Липсва възпроизводимост на резултатите между
различните екипи – налага събиране на още данни
• Асоциация на определени имунофенотипи с
цитогенетични аберации (CD20+ и t(11;14); CD117
и хипердиплоидност) - ниска специфичност
• Процентът фенотипно нормални плазмоцити към
диагнозата има прогностична стойност (Paiva et
al. 2009)

3. Нови терапевтични възможности:
Имунотерапия с моноклонални антитела:
• Anti CD38
• Anti CD138
• Anti CD56
• Anti CD20
• Други: CD40, HM 1.24, IGF-
1R, CS1, CD74, IL-6R,
TRAIL-R1, IL-6, RANKL, DKK1,
VEGF, BAFF

Имунофенотипен профил
(fingerprint) и мониториране
на терапевтичния отговор
• Високодозовата терапия, последвана от
автоложна трансплантация на ХСК е стандарт
в терапията при пациенти с ММ < 65г.
• МФЦ позволява проследяване на пациенти
след автоложна трансплантация за оценка
дълбочината на отговора и нуждата от
поддържаща терапия.
•

Нашият опит (n=29)
MRD=0.375%

Нашият опит (n=29)
MRD=0.009%

Перспективи за имунофенотипното
проследяване:
• След въвеждането на протеазомните
инхибитори (bortezomib) и IMiDs (аналози
на талидомида), имунофенотипен отговор
( 65 год) дори без автоложнаТХСК
(Paiva et al. J Clin Oncol. 2011 Apr 20;29(12):1627-33)

Нашият опит:
• N = 6

Изследване на плазмоцитния товар
в трансплантата:
• При колекция на стволови клетки от
периферна кръв се очаква продуктът да
съдържа определено количество малигнени
плазмоцити.
• Изследвахме аферезния продукт при 30
пациенти след автоложна ТХСК и потърсихме
корелация с клиничния ход.
НСБАЛХЗ, 2011

Изследване на плазмоцити в
аферезния продукт
CD38-FITC
CD56-PE
CD45-PerCP
CD117-PE-Cy7
CD138-APC
CD19-APC-H7
0 – 0.27%
(средно 0.029%)
НСБАЛХЗ, 2011

Пациенти с по-ниски нива на плазмоцитна
контаминация в автоложния трансплантат
имат по-голяма вероятност за пълен отговор
към терапията и вероятно по-добра прогноза
Plasma cell levels in the harvest
0,05
0,045
0,04
0,035
0,03
0,025
0,02
0,015
0,01
0,005
0
Day 100
Last Follow-up
CR
VGPR or PR
Ganeva P, Stoyanov N et al. Myeloma cell contamination of peripheral blood
stem cell harvests estimated by multiparametric flow cytometry: potential
correlation with disease outcome.EBMT 2011

Заключение
• МФЦ - обективен метод за качествено и
количествено охарактеризиране на
плазмоцитната популация
• Доказване на клоналност
• Разграничаване на фенотипно абнормни и
нормални плазмоцити
-диагноза
-прогностична и предиктивна стойност
• Мониториране на терапевтичния отговор

Лаборатория по
хематопатология и
имунология
Николай Стоянов
Тихомир Диков
Веселка Николова
Цветелина Янчева
Маргарита Генова
Клиника по
хематология
Пенка Ганева
Иван Тонев
Георги Михайлов
Лаборатория по
цитогенетика и
молекулярна
биология
Георги Балаценко