изÑегли пÑиложениеÑо
изÑегли пÑиложениеÑо
изÑегли пÑиложениеÑо
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Приложение на<br />
флоуцитометрията при<br />
плазмоклетъчни неоплазии<br />
29 април – 1 май 2011<br />
Трявна
World Health Organization Classification of<br />
Plasma Cell Neoplasms<br />
Monoclonal gammopathy of undetermined significance (MGUS)<br />
Plasma cell myeloma<br />
Nonsecretory myeloma<br />
Plasma cell leukemia<br />
Asymptomatic (smoldering) myeloma<br />
Plasmacytoma<br />
Solitary plasmacytoma of bone<br />
Extraosseous (extramedullary) plasmacytoma<br />
Immunoglobulin deposition diseases<br />
Primary amyloidosis<br />
Systemic light- and heavy-chain deposition diseases<br />
Osteosclerotic myeloma (POEMS syndrome)<br />
From McKenna RW, Kyle RA, Kuehl WM, et al. Plasma cell neoplasms. In: Swerdlow SH, Campo E, Harris NL,<br />
et al, eds. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Lyon, France:<br />
IARC; 2008:200-213.
Плазмоклетъчните неоплазии се<br />
характеризират с:<br />
1. Пролиферация на базирана в костния<br />
мозък клонална плазмоцитна популация<br />
2. Наличие на моноклонален<br />
имуноглобулин (парапротеин) в серум<br />
и/или урина. 3. Наличие/отсъствие<br />
на свързани с<br />
основното заболяване<br />
тъканни и органни<br />
увреди (костна болест,<br />
имунопареза, анемия,<br />
бъбречна<br />
недостатъчност и т.н).
Идентификация на плазмоцитната<br />
популация в костномозъчен<br />
аспират<br />
• След морфологична преценка за<br />
целесъобразността на изследването и<br />
съпоставка с клиничните индикации<br />
• 1х10 6 клетки се маркират и обработват в<br />
съответствие със стандартна lyse-wash<br />
методика<br />
• Във всяка епруветка задължително присъства<br />
антитяло към поне един от “специфичните”<br />
плазмоцитни антигени CD138 и CD38.
Гейтираща стратегия<br />
CD38 vs. SSC<br />
CD138 vs. SSC <br />
CD138 vs.CD38 <br />
НСБАЛХЗ, 2011
Гейтираща стратегия<br />
CD45 vs. SSC<br />
X<br />
НСБАЛХЗ, 2011
Плазмоцитен дял :<br />
Морфология vs. МФЦ<br />
><br />
цитология<br />
%<br />
13.9 ±<br />
15.8%<br />
41,5 ±<br />
28,9%<br />
флоуцитометрия %<br />
• разреждане с<br />
периферна кръв<br />
• специфични<br />
адхезионни<br />
свойства
Лековерижната рестрикция<br />
като маркер за клоналност<br />
Нормално<br />
Абнормно<br />
κ : λ = 0,5 :1 до 4 : 1<br />
• Клоналните клетки<br />
носят едни и същи<br />
имуноглобулинови<br />
пренареждания =><br />
експресират в<br />
цитоплазмата една<br />
и съща лека верига
Пример за поликлонална и<br />
клонална плазмоцитна<br />
популация<br />
κ : λ = 1.7 :1<br />
Нормално<br />
κ : λ = 0,12 :1<br />
Абнормно<br />
κ : λ = 415:1<br />
Класика<br />
НСБАЛХЗ, 2011
Нормален плазмоцитен<br />
фенотип<br />
117-<br />
117-<br />
45+56-<br />
19+20- 28-<br />
27+<br />
НСБАЛХЗ<br />
2011
Аберантен плазмоцитен<br />
фенотип<br />
45-56+ 19-20+ 28+<br />
27-<br />
117-<br />
117+<br />
НСБАЛХЗ<br />
2011
Нашият опит (n=89)<br />
– 67 новодиагностицирани<br />
- 22 лекувани с конвенционални<br />
протоколи НСБАЛХЗ, 2011
Аберантният фенотипен<br />
профил не е включен в<br />
диагностичните критерии.<br />
Защо да го изследваме?
1. В подкрепа на диагнозата<br />
• При атипична морфология, но насочваща<br />
клинична картина (анапластни, плазмобластни,<br />
с лимфоцитна морфология миеломи)<br />
• Особени клинични варианти – несекретиращ<br />
миелом, плазмоклетъчна левкемия.<br />
• За разграничаване от реактивна плазмоцитоза<br />
(поликлонални с нормален фенотип)<br />
• За разграничаване от НХЛ с присъствие на<br />
значителна плазмоцитна компонента<br />
(клонални лимфоцити и плазмоцити, като<br />
плазмоцитите са с нормален фенотип)
2. Предиктивна и прогностична<br />
стойност на аберантния фенотип<br />
• Прогностична стойност на имунофенотипните<br />
констелации - търси се още от 90-те години<br />
Българският опит (Марков и сътр., 1998г.)<br />
• Липсва възпроизводимост на резултатите между<br />
различните екипи – налага събиране на още данни<br />
• Асоциация на определени имунофенотипи с<br />
цитогенетични аберации (CD20+ и t(11;14); CD117<br />
и хипердиплоидност) - ниска специфичност<br />
• Процентът фенотипно нормални плазмоцити към<br />
диагнозата има прогностична стойност (Paiva et<br />
al. 2009)
3. Нови терапевтични възможности:<br />
Имунотерапия с моноклонални антитела:<br />
• Anti CD38<br />
• Anti CD138<br />
• Anti CD56<br />
• Anti CD20<br />
• Други: CD40, HM 1.24, IGF-<br />
1R, CS1, CD74, IL-6R,<br />
TRAIL-R1, IL-6, RANKL, DKK1,<br />
VEGF, BAFF
Имунофенотипен профил<br />
(fingerprint) и мониториране<br />
на терапевтичния отговор<br />
• Високодозовата терапия, последвана от<br />
автоложна трансплантация на ХСК е стандарт<br />
в терапията при пациенти с ММ < 65г.<br />
• МФЦ позволява проследяване на пациенти<br />
след автоложна трансплантация за оценка<br />
дълбочината на отговора и нуждата от<br />
поддържаща терапия.<br />
•
Нашият опит (n=29)<br />
MRD=0.375%
Нашият опит (n=29)<br />
MRD=0.009%
Перспективи за имунофенотипното<br />
проследяване:<br />
• След въвеждането на протеазомните<br />
инхибитори (bortezomib) и IMiDs (аналози<br />
на талидомида), имунофенотипен отговор<br />
( 65 год) дори без автоложнаТХСК<br />
(Paiva et al. J Clin Oncol. 2011 Apr 20;29(12):1627-33)
Нашият опит:<br />
• N = 6
Изследване на плазмоцитния товар<br />
в трансплантата:<br />
• При колекция на стволови клетки от<br />
периферна кръв се очаква продуктът да<br />
съдържа определено количество малигнени<br />
плазмоцити.<br />
• Изследвахме аферезния продукт при 30<br />
пациенти след автоложна ТХСК и потърсихме<br />
корелация с клиничния ход.<br />
НСБАЛХЗ, 2011
Изследване на плазмоцити в<br />
аферезния продукт<br />
CD38-FITC<br />
CD56-PE<br />
CD45-PerCP<br />
CD117-PE-Cy7<br />
CD138-APC<br />
CD19-APC-H7<br />
0 – 0.27%<br />
(средно 0.029%)<br />
НСБАЛХЗ, 2011
Пациенти с по-ниски нива на плазмоцитна<br />
контаминация в автоложния трансплантат<br />
имат по-голяма вероятност за пълен отговор<br />
към терапията и вероятно по-добра прогноза<br />
Plasma cell levels in the harvest<br />
0,05<br />
0,045<br />
0,04<br />
0,035<br />
0,03<br />
0,025<br />
0,02<br />
0,015<br />
0,01<br />
0,005<br />
0<br />
Day 100<br />
Last Follow-up<br />
CR<br />
VGPR or PR<br />
Ganeva P, Stoyanov N et al. Myeloma cell contamination of peripheral blood<br />
stem cell harvests estimated by multiparametric flow cytometry: potential<br />
correlation with disease outcome.EBMT 2011
Заключение<br />
• МФЦ - обективен метод за качествено и<br />
количествено охарактеризиране на<br />
плазмоцитната популация<br />
• Доказване на клоналност<br />
• Разграничаване на фенотипно абнормни и<br />
нормални плазмоцити<br />
-диагноза<br />
-прогностична и предиктивна стойност<br />
• Мониториране на терапевтичния отговор
Лаборатория по<br />
хематопатология и<br />
имунология<br />
Николай Стоянов<br />
Тихомир Диков<br />
Веселка Николова<br />
Цветелина Янчева<br />
Маргарита Генова<br />
Клиника по<br />
хематология<br />
Пенка Ганева<br />
Иван Тонев<br />
Георги Михайлов<br />
Лаборатория по<br />
цитогенетика и<br />
молекулярна<br />
биология<br />
Георги Балаценко