HPLC column
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<strong>HPLC</strong> <strong>column</strong> 선택의 8가지 기준<br />
<strong>HPLC</strong> system의 핵심은 <strong>HPLC</strong> <strong>column</strong>에 있습니다.<br />
컬럼을 이해하기 위한 8가지 기본적인 사항은 다음과 같습니다.<br />
1. Column Dimensions<br />
컬럼은 4.6x250mm가 보통 표준입니다.<br />
길이 및 내경을 바꿀 경우의 특징은 다음과 같습니다.<br />
• Short (30-50mm) – short run times, low backpressure<br />
• Long (250-300mm) – higher resolution, long run times<br />
• Narrow (≤ 2.1mm) – higher detector sensitivity<br />
• Wide (10-22mm) – high sample loading<br />
2. Particle Shape<br />
구형의 입자가 back pressure가 적게 걸리고 컬럼수명이 깁니다.<br />
3. Particle Size<br />
보통 3-20µm의 입자로 구성되며, 분석용 컬럼의 대부분은 5um입니다.<br />
입자가 작아질수록 유속에 따른 이론단의 높이변화가 적어 컬럼효율이 좋아집니다.<br />
4. Surface Area<br />
입자의 바깥과 pore의 표면을 모두 합친 면적으로, 표면적이 클수록 분리능이 좋아지고<br />
retention이 커지는 반면, gradient 분석시 평형시간이 길어질 수 있습니다.<br />
M 2 /g의 단위로 나타냅니다.
5. Pore Size<br />
보통 60-10,000Å까지 있으면, 분석용 컬럼의 대부분은 150Å이하입니다.<br />
분자량이 큰 물질을 분석할 경우 pore size는 커야 됩니다. 단백질과 같은 고분자를 분석할 경<br />
우 300Å의 컬럼을 많이 사용합니다.<br />
6. Carbon Load<br />
Reverse phase 컬럼의 경우 함유된 carbon의 함량을 %로 나타냅니다. Carbon load가 커질수록<br />
분리능이 좋아집니다. PerkinElmer에서는 27%의 높은 carbon load를 가진 C18 컬럼을 제공하고<br />
있습니다.<br />
7. Endcapping<br />
C18컬럼의 경우 반응하지 않은 silanol group이 표면에 남아있게 되는 데 이는 secondary<br />
interaction의 원인이 됩니다. 이를 방지하기 위해 화학적으로 처리가 되었을 경우 endcapped되<br />
었다고 합니다.<br />
8. pH range<br />
<strong>HPLC</strong> <strong>column</strong>은 모두 사용 가능한 pH range가 정해져 있습니다. 분석하시고자 하는 방법의 이동상<br />
의 pH를 컬럼이 견딜 수 있는 지 반드시 확인해 보아야 합니다.<br />
컬럼을 교체하시거나 새로 구입하시고자 할 때 위와 같은 내용을 확인해 보시면 선택의 기준에 도움이<br />
되실 것입니다.