大鼠雌二醇（E2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

分 )。 仔 细 收 集 上 清 。 检 测 细 胞 内 的 成 份 时 , 用 PBS(PH7.2-7.4) 稀 释 细 胞 悬 液 , 细 胞
浓 度 达 到 100 万 /ml 左 右 。 通 过 反 复 冻 融 , 以 使 细 胞 破 坏 并 放 出 细 胞 内 成 份 。 离 心 20 分
钟 左 右 (2000-3000 转 / 分 )。 仔 细 收 集 上 清 。 保 存 过 程 中 如 有 沉 淀 形 成 , 应 再 次 离 心 。
5. 组 织 标 本 : 切 割 标 本 后 , 称 取 重 量 。 加 入 一 定 量 的 PBS,PH7.4。 用 液 氮 迅 速 冷 冻 保 存 备
用 。 标 本 融 化 后 仍 然 保 持 2-8℃ 的 温 度 。 加 入 一 定 量 的 PBS(PH7.4), 用 手 工 或 匀 浆 器
将 标 本 匀 浆 充 分 。 离 心 20 分 钟 左 右 (2000-3000 转 / 分 )。 仔 细 收 集 上 清 。 分 装 后 一 份 待
检 测 , 其 余 冷 冻 备 用 。
6. 标 本 采 集 后 尽 早 进 行 提 取 , 提 取 按 相 关 文 献 进 行 , 提 取 后 应 尽 快 进 行 实 验 。 若 不 能 马 上
进 行 试 验 , 可 将 标 本 放 于 -20℃ 保 存 , 但 应 避 免 反 复 冻 融 .
7. 不 能 检 测 含 NaN3 的 样 品 , 因 NaN3 抑 制 辣 根 过 氧 化 物 酶 的 (HRP) 活 性 。
操 作 步 骤 :
1. 标 准 品 的 稀 释 与 加 样 : 在 酶 标 包 被 板 上 设 标 准 品 孔 10 孔 , 在 第 一 、 第 二 孔 中 分 别 加 标
准 品 100μl, 然 后 在 第 一 、 第 二 孔 中 加 标 准 品 稀 释 液 50μl, 混 匀 ; 然 后 从 第 一 孔 、 第 二
孔 中 各 取 100μl 分 别 加 到 第 三 孔 和 第 四 孔 , 再 在 第 三 、 第 四 孔 分 别 加 标 准 品 稀 释 液 50μl,
混 匀 ; 然 后 在 第 三 孔 和 第 四 孔 中 先 各 取 50μl 弃 掉 , 再 各 取 50μl 分 别 加 到 第 五 、 第 六 孔
中 , 再 在 第 五 、 第 六 孔 中 分 别 加 标 准 品 稀 释 液 50ul, 混 匀 ; 混 匀 后 从 第 五 、 第 六 孔 中 各
取 50μl 分 别 加 到 第 七 、 第 八 孔 中 , 再 在 第 七 、 第 八 孔 中 分 别 加 标 准 品 稀 释 液 50μl, 混
匀 后 从 第 七 、 第 八 孔 中 分 别 取 50μl 加 到 第 九 、 第 十 孔 中 , 再 在 第 九 第 十 孔 分 别 加 标 准
品 稀 释 液 50μl, 混 匀 后 从 第 九 第 十 孔 中 各 取 50μl 弃 掉 。( 稀 释 后 各 孔 加 样 量 都 为 50μl,
浓 度 分 别 为 48ng/L,32ng/L ,16ng/L,8ng/L, 4ng/L)。
2. 加 样 : 分 别 设 空 白 孔 ( 空 白 对 照 孔 不 加 样 品 及 酶 标 试 剂 , 其 余 各 步 操 作 相 同 )、 待 测 样
品 孔 。 在 酶 标 包 被 板 上 待 测 样 品 孔 中 先 加 样 品 稀 释 液 40μl, 然 后 再 加 待 测 样 品 10μl( 样
品 最 终 稀 释 度 为 5 倍 )。 加 样 将 样 品 加 于 酶 标 板 孔 底 部 , 尽 量 不 触 及 孔 壁 , 轻 轻 晃 动 混
匀 。
3. 温 育 : 用 封 板 膜 封 板 后 置 37℃ 温 育 30 分 钟 。
4. 配 液 : 将 30(48T 的 20 倍 ) 倍 浓 缩 洗 涤 液 用 蒸 馏 水 30(48T 的 20 倍 ) 倍 稀 释 后 备 用 。
5. 洗 涤 : 小 心 揭 掉 封 板 膜 , 弃 去 液 体 , 甩 干 , 每 孔 加 满 洗 涤 液 , 静 置 30 秒 后 弃 去 , 如 此
重 复 5 次 , 拍 干 。
6. 加 酶 : 每 孔 加 入 酶 标 试 剂 50μl, 空 白 孔 除 外 。
7. 温 育 : 操 作 同 3。
8. 洗 涤 : 操 作 同 5。
9. 显 色 : 每 孔 先 加 入 显 色 剂 A50μl, 再 加 入 显 色 剂 B50μl, 轻 轻 震 荡 混 匀 ,37℃ 避 光 显 色
15 分 钟 .
10. 终 止 : 每 孔 加 终 止 液 50μl, 终 止 反 应 ( 此 时 蓝 色 立 转 黄 色 )。
11. 测 定 : 以 空 白 空 调 零 ,450nm 波 长 依 序 测 量 各 孔 的 吸 光 度 (OD 值 )。 测 定 应 在 加 终 止
液 后 15 分 钟 以 内 进 行 。
注 意 事 项 :
1. 试 剂 盒 从 冷 藏 环 境 中 取 出 应 在 室 温 平 衡 15-30 分 钟 后 方 可 使 用 , 酶 标 包 被 板 开 封 后 如 未
用 完 , 板 条 应 装 入 密 封 袋 中 保 存 。
2. 浓 洗 涤 液 可 能 会 有 结 晶 析 出 , 稀 释 时 可 在 水 浴 中 加 温 助 溶 , 洗 涤 时 不 影 响 结 果 。
3. 各 步 加 样 均 应 使 用 加 样 器 , 并 经 常 校 对 其 准 确 性 , 以 避 免 试 验 误 差 。 一 次 加 样 时 间 最 好
控 制 在 5 分 钟 内 , 如 标 本 数 量 多 , 推 荐 使 用 排 枪 加 样 。
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