Dra. Santillan Graciela TESIS - Administración Nacional de ...

MATERIALES Y MÉTODOSObtención de larvas L 2Se realizo de acuerdo al procedimiento descripto por De Savigny (14). Los parásitos adultos fueron obtenidos del intestino de perros naturalmente infectados. Se extrajeron los úteros de 50 hembras. Se colocaron en solución de cloruro de sodio0.15 M. Luego se digirió la pared uterina con hidróxido de sodio 0.15 M. Finalmente los huevos se colocaron en frascos de cultivo con 1 % de formol a 25 ºChasta que los embriones desarrollaron a larvas L 2 .Obtención de antígeno total excretor secretor (ES/L 2 ) Los huevos larvados se lavaron 3 veces con agua destilada para remover el formol. Al sedimento se le se agregaron 20 ml del líquido de digestión (20ml de aguadestilada, 0.15 mg de pepsina 1:2500, 0.2 ml de ácido clorhídrico), granallas de metal,una barra magnética y 2 mg de bicarbonato de sodio, se agitó a 37 °C durante 7minutos. Luego se efectuaron dos lavados con cloruro de sodio 0.15 M, para eliminar el liquidode digestión. Por otro lado se preparo un recipiente conteniendo agua / ácido clorhídrico y 2 mg debicarbonato de sodio, el recipiente se colocó dentro de un desecador junto con elsedimento que contiene los huevos lavados y se agitó a 37 °C durante 15 minutos. Las larvas se transfirieron al medio de cultivo RPMI 1640 suplementado con 100unidades de penicilina / ml y 250 µg / mlde estreptomicina.27