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Se incubaron las placas 10 minutos, la reacción se detuvo con 100 ul de ácidofluorhidrico 0.1 N, pH 3.2 y se leyó a 410 nm en un equipo Dynatech MR 4100.La técnica de ELISA con ES/L 2 purificado se realizó como se describió anteriormente aúncuando se varió la concentración del antígeno para sensibilizar las policubetas a 5 ug/ml.♣ A diluciones menores de 1/8 no se pudo diferenciar entre resultados positivos ynegativos empleando los sueros controles.*La concentración óptima de trabajo de cada conjugado se determinó previamenterealizando diluciones de los mismos desde 1/200 hasta 1/10000 y empleando sueroscontroles positivos y negativos. Las diluciones de los conjugados seleccionadas fueron lasque permitieron diferenciar a los sueros negativos de los positivos.♦ABTS:2,2' azinodi (3ethylbencilthiazoline sulfonic acid)32
RESULTADOSDetección de glicoproteinas inmunogénicas para el diagnóstico de T.canisLa Figura 8 muestra que las bandas reconocidas por el suero hiperinmune anti ES/L 2 totalobtenido en conejo, son similares a las bandas que reconocen los sueros de pacientescon sospecha clínica de Toxocariosis.Se detectaron cuatro componentes antigénicos: un triplete de aproximadamente 120 kDay bandas de 70,55 y 32 kDa. ♦El suero control negativo no reveló bandas.Los sueros de los animales control infectados experimentalmente con huevos de T.canisreconocieron bandas de 70 y 55 kDa.PM ES ES PM + c+ - PM C 1 298 -66.2 -45 -35 -21.5 -14.4 -98 -66.2 -45 -35 -21.5 -14.4 -98 -66.2 -45 -35 -21.5 -14.4 -1 2 1 2 3 1 2 3A B CFig.8:A:Western blot con suero hiperinmune anti antígeno ES total obtenido en conejo. Fila 1y 2 antígeno ES/L 2 total. B Western blot con suero de pacientes Fila 1 con sintomatologiacompatible con Toxocariosis, Fila 2 Suero control positivo, Fila 3 suero control Negativo. CWestern blot con suero de animal de control . Fila 1 Control negativo, Fila 2 y 3 sueros deanimales infectados con huevos de T.canis33
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