CONFIGURACIÓN DE LOS SERES VIVOS GUIÓN DE PRÁCTICAS

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Prácticas - Configuración de los Seres Vivos 12 1. Comprobar la magnificación y la apertura numérica de los objetivos que están en el revolver del microscopio y la magnificación de las lentes oculares. Estos valores están impresos en cada uno de los objetivos (Figura 1.1.3) y de los oculares. En la tabla 1.1.1 anotar los valores de magnificación para cada objetivo y ocular y la AN para cada objetivo y el condensador. Calcular la magnificación total y el límite de resolución para cada objetivo y el límite de resolución máximo del microscopio usando aceite de inmersión (AN = 1,5). Asumir que la luz que atraviesa la muestra tiene una longitud de onda de 400 nm. Figura 1.1.3. Características de los objetivos. Tabla 1.1.1. Magnificación Apertura Numérica Aumento Total Límite de Resolución Magnificación de los oculares: Apertura numérica del condensador: Indica el objetivo de mayor AN: A.N. para una interfase de aire: 1,0 A.N para una interfase de aceite 1,5 Límite de resolución máximo del microscopio: (0,61xλ)/AN (µm)
Prácticas - Configuración de los Seres Vivos 13 2. Girar el revolver porta objetivos hasta que el objetivo de menor aumento esté en posición de observación. Coger una preparación microscópica, colocarla en la platina asegurándose que queda correctamente fijada, y con el cubreobjetos hacia arriba. Encender el microscopio ajustar la intensidad de luz con el potenciómetro a un nivel confortable para el observador. Nunca controlar la intensidad de luz con el condensador, asegurarse que el condensador esté abierto y en posición correcta. 3. Ajustar los oculares a la posición neutra de dioptrías (“0”). Ajustar los oculares a la distancia interpupilar y dioptrías del observador. La mayoría de microscopios están equipados con un tirador entre los oculares para su ajuste y sólo se requiere empujar o tirar directamente de los oculares juntos o individualmente. Mover los oculares (derecha e izquierda) hasta ver un campo de visión uniforme. 4. Enfocar el microscopio sobre cualquier objeto dentro del campo de visión: • Localizar un punto suficientemente contrastable en el centro del campo de visión y cerrar el ojo izquierdo. Usando los tornillos macro- y micrométrico enfocar hasta obtener una imagen nítida con el ojo derecho solamente. • Ahora cerrar el ojo derecho y ajustar el foco del ocular izquierdo girando el dioptrio situado en él. No reajustar el foco del ojo izquierdo con los enfoques macrométrico y micrométrico, usar el anillo de ajuste del ocular. 5. Seguidamente todos los usos del microscopio sólo requerirán los ajustes de enfoque macrométrico y micrométrico. Por supuesto, será necesario y se deberá comprobar y reajustar el microscopio al inicio de cada sesión. 6. Comenzar siempre enfocando la preparación por el objetivo de menor aumento (4x). Incluso si se va a usar el objetivo de mayor aumento (40x ó 100x). Es más eficaz comenzar con el objetivo de menor aumento e ir aumentando gradualmente la magnificación del objetivo, afinando el enfoque de la muestra con cada uno de ellos. Si los objetivos son parafocales, una preparación microscópica enfocada con un objetivo también estará, prácticamente, enfocada con el resto de objetivos y sólo se tendrá que corregir levemente el enfoque micrométrico. 7. Manipular el control macrométrico de enfoque hasta ver la preparación enfocada. Mover los tornillos de desplazamiento horizontal (XY) de la platina, hasta situar la preparación en la región de estudio deseada. Entonces, centrar la preparación y enfocar cuidadosamente, usando los tornillos de enfoque macrométrico y micrométrico, partiendo del objetivo de menor aumento hasta el de mayor aumento, realizando el estudio de la muestra con cada
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