CRP-ultrasensitive

CRP-ULTRA
PCR- Ultrasensible
Turbidimetría Látex
Determinación cuantitativa de niveles bajos de Proteína C-Reactiva
IVD
Conservar a 2-8ºC.
PRINCIPIO DEL MÉTODO
El test PCR-Ultrasensible es un ensayo inmunoturbidimétrico para la
cuantificación de niveles bajos de proteína C-reactiva (PCR) en suero o
plasma humano.
Las partículas de látex recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana son
aglutinadas por PCR presente en la muestra del paciente. El proceso de
aglutinación provoca un cambio de absorbancia proporcional a la
concentración de PCR de la muestra, y por comparación con un calibrador de
PCR de concentración conocida se puede determinar el contenido de PCR en
la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLÍNICO
En las últimas décadas se ha reconocido el papel primordial que juega la
inflamación en el mecanismo patogénico de la arteriosclerosis. El nivel de PCR
en suero aumenta durante la inflamación. Tests para PCR con una sensibilidad
hasta 0,3 mg/L tienen capacidad predictiva para eventos causados por
enfermedad cardiovascular 1 .
REACTIVOS
Diluyente (R1)
Látex (R2)
U-CRP CAL
Tampón tris 20 mmol/L, pH 8,2. Conservante.
Partículas de látex cubiertas de IgG de cabra
anti-PCR humana, pH, 7,3. Conservante.
Calibrador líquido. La concentración de PCR
viene indicada en la etiqueta del vial.
PRECAUCIONES
Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el
antígeno HBsAg, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo, deben tratarse
con precaución como potencialmente infecciosos.
Homogeneizar los reactivos con suavidad por inversión antes de utilizar,
evitando la formación de espuma.
CALIBRACIÓN
Usar el Calibrador PCR ultra incluido en el kit (Ref. 43035).
La sensibilidad del ensayo y el valor de concentración del calibrador están
estandarizados frente el Material de Referencia ERM-DA 472 de la IFCC.
La calibración en el Spinlab 180 es estable durante 1 mes.
Recalibrar cuando los resultados del control estén fuera de especificaciones,
cuando se use diferente lote de reactivo y cuando se ajuste el instrumento.
PREPARACIÓN
Reactivo: Reactivo líquido listo para usar. Utilizar por separado R1 y R2 sin
mezclar previamente a la reacción.
Calibrador de PCR-ultra: Listo para su uso.
Curva de calibración: Preparar las siguientes diluciones del calibrador de
PCR-ultra en NaCl 9 g/L. Para obtener las concentraciones de cada dilución de
PCR-ultra, multiplicar la concentración del calibrador de PCR-ultra por el factor
correspondiente indicado en la tabla:
Dilución Calibrador 1 2 3 4 5 6
Calibr. PCR-u (µl)
NaCl 9 g/L (µl)
--
100
5
95
10
90
25
75
50
50
100
--
Factor 0 0,05 0,1 0,25 0,5 1,0
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad
cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC y se evita la
contaminación durante su uso. No utilizar reactivos que hayan sobrepasado la
fecha de caducidad.
La congelación de los reactivos de Látex y Diluyente altera irreversiblemente la
funcionalidad de los mismos.
La presencia de agregados o partículas pueden ser indicativos de un deterioro
del reactivo.
MATERIAL ADICIONAL
Instrumento para medir con exactitud el tiempo y la absorbancia a 530-550nm.
Control: Ref: 43036 PCR Ultra Control
Pipetas volumétricas calibradas.
NaCl 9 g/L.
MUESTRAS
Suero fresco. Estable 7 días a 2-8ºC o 3 meses a -20ºC.
Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas para su
eliminación.
No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipémicas.
PROCEDIMIENTO
Procedimiento manual:
1. Atemperar los reactivos y el fotómetro a 37ºC.
2. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: 540 nm (530-550)
Temperatura: 37ºC
Paso de luz cubeta: 1 cm
3. Ajustar el instrumento a 0 con agua destilada.
4. Pipetear en una cubeta:
800 µl R1 (Diluyente)
10 µl Muestra
5. Mezclar e incubar 4 minutos a 37ºC.
6. Leer absorbancia (A1).
7. Incubar 45 segundos a 37ºC.
8. Añadir 180 µl de R2 (Latex) y mezclar.
9. Incubar 5 min a 37ºC
10. Leer absorbancia (A2).
11. Restar A1 de A2 para obtener el resultado.
Spinreact dispone de programaciones adaptadas a la mayoría de
analizadores automáticos del mercado. Solicite la información a su
distribuidor.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda utilizar sueros control. Cada laboratorio debería establecer
su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los
controles no cumplan con las tolerancias exigidas.
VALORES DE REFERENCIA
Riesgo de evento causado por enfermedad cardiovascular y nivel de PCR:
Bajo: 3.0 mg/L 1
Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia.
CARACTERISTICAS DEL MÉTODO
1. Límite de linealidad: hasta 10 mg/L. Muestras con concentraciones
superiores deben ser diluidas en NaCl 9 g/L y volverse a analizar.
2. Límite de cuantificación: Valores por debajo de 0,20 mg/L dan lugar a
resultados poco reproducibles.
3. Efecto prozona: No se observa hasta valores de 800 mg/L.
4. Precisión: El reactivo ha sido probado durante 20 días con tres
concentraciones diferentes de PCR en un estudio basado en las normas
EP5 (CLSI).
CV (%)
0.28 mg/L 3.09 mg/L 5.95 mg/L
Total 7.7% 2.7% 3.0%
Within Run 4.5% 1.7% 1.4%
5. Exactitud: El comportamiento de este método (y) fue comparado con otro
método (x) de características similares. 23 muestras de diferentes
concentraciones de PCR fueron analizadas con ambos métodos. El
coeficiente de regresión (r) fue de 0,81 y la ecuación de la recta de
regresión y = 0.517x + 0.916.
Las características del método fueron estudiadas con Spintech240 y Spinlab
180. Las características pueden ser distintas con otros instrumentos.
INTERFERENCIAS
Bilirrubina (20 mg/dL), triglicéridos (5 g/L) y hemoglobina (5 g/L) no
interfieren. Otras sustancias pueden interferir 2 .
NOTAS
El diagnóstico clínico no debe basarse en los resultados de un solo test,
debe ser valorado junto a la historia clínica del paciente.
BIBLIOGRAFÍA
1. Pearson T.A. et al., Markers of Inflammation and Cardiovascular Disease -
Application to Clinical and Public Health Practice, Circulation 2003; 107:499-511.
2. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed. AACC Press,
1995.
PRESENTACIÓN
Ref. 43134
Cont.
R1 Diluyente: 1 x 40 mL
R2 Látex: 1 x 10 mL
U-CRP CAL: 1 x 2 mL
TLIS46-E 19/03/13 SPINREACT,S.A/S.A.U.Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
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