nonionic

HbA 1 c
Glycated Hemoglobin
Latex turbidimetry
Quantitative determination of glycated hemoglobin (HbAB1Bc)
IVD
Store 2 - 8ºC.
PRINCIPLE OF THE METHOD
The HbAB 1B c is a quantitative turbidimetric test for the measurement of glycated
hemoglobin in human whole blood. Total haemoglobin (HbT) and HbAB 1B c concentrations
are measured and the HbAB1Bc result is calculated as a percentage of the HbT
concentration.
After lysis of red blood cells, the haemoglobin molecule is hydrolyzed by a protease and
haemoglobin derivates are converted to alkaline hematin, which is measured by
absorption at 600 nm. HbAB 1B c is then measured using a latex agglutination inhibition rate
assay. Latex particles coated with specific monoclonal anti- human HbAB1Bc compete for
agglutination with HbAB 1B c of the sample when mixed with a second reagent constituted
by polymer particles coated with HbAB 1B c. The presence of HbAB 1B c in the sample inhibits
the agglutination of latex particles. The agglutination grade is indirectly proportional of
the HbAB 1B c concentration in the sample, and can be quantified by comparison from a
calibrator of known HbAB 1B c concentration.
CLINICAL SIGNIFICANCE P 1-3
Diabetes Mellitus is a chronic disease characterized by a hyperglycemia. The
consequences are metabolism disorders of carbohydrates, lipids and proteins. The risk
of complications associated with diabetes, including nephropathy, retinopathy and
cardiovascular diseases, increases in patients with poor metabolic control. In the
diabetic patients, where blood glucose levels are elevated, HbAB 1B c is formed as a
consequence of the non-enzymatic glycation of the N-terminus of the -chain of
haemoglobin molecule. The level of HbA1c is proportional to the level of glucose in the
blood and has been widely accepted as an indicator of the mean daily blood glucose
concentration over the preceding 6-8 weeks. It is therefore, a long-term indicator of
diabetic control, whereas, the measurement of blood glucose is only a short-term
indicator P Note 1 P .
REAGENTS
Haemolyzing Reagent
(R3)
Porcine pepsin in buffer solution. Preservatives. pH, 2.4
Total Hb Reagent (R4) Sodium hydroxide 0.4%, Triton 2.5%. pH, 13
HbAB 1B cB B– Latex (R1)
Agglutinator Reagent
(R2)
Optional
Anti-HbA1c monoclonal antibody (mouse) coated to latex
particles, BSA, non-ionic surfactant 0.6% and Proclin 150
0.1%, in a buffer pH, 8.1.
HbA1c hapten covalently attached to a polymer, BSA, nonionic
surfactant 0.2% and Proclin 150 0.1%. pH, 2.0.
Ref: 43095 HbAB 1B c CAL. HbAB 1B c (6) Calibrators.
Ref: 43096 HbAB 1B c CONTROL. HbAB 1B c (2) Controls.
PRECAUTIONS
Total Hb Reagent contains sodium hydroxide, which is caustic, causes severe burns.
Use gloves. In the event of accident, flush the effected area with plenty of water and
seek immediate medical attention.
CALIBRATIONP 7-9
The sensitivity of the assay and the target value of the calibrator have been
standardized against an Internal Reference Material HbAB 1B c traceable to the HPLC
method for HbAB 1B c and Drabkin’s method for Total Hb. It is not recommended the use of
other commercially available HbAB 1B c calibrators.
Total Hb test: Spinreact recommends using HbAB 1B c Calibrator (Ref: 43095).
HbAB 1B C test: Spinreact recommends using HbAB 1B c Calibrator (Ref: 43095).
Calibrators do not require pretreatment.
PREPARATION
Reagents: Ready to use.
STORAGE AND STABILITY
All the components of the kit are stable until the expiration date on the label when
stored tightly closed at 2-8ºC and contaminations are prevented during their use. Do
not use reagents over the expiration date.
Reagent deterioration: Presence of particles and turbidity. Protect reagents from
extreme heat, light or freezing.
ADDITIONAL EQUIPMENT
- Spintech 240 autoanalizer
- Laboratory equipment.
SAMPLES
Venipuncture or capillary blood samples may be used.
Potassium-EDTA or Ammonium Heparin are recommended as anticoagulants. Stable 7
days at 2-8ºC or 3 months at –20ºC or 3 days at 15-15ºC.
Frozen samples should be thawed at room temperature, mixed thoroughly prior to use
and should not be refrozen.
SAMPLE PRETREATMANT
1. Prepare in a tube a 1/41 dilution of the sample:
10 µL whole blood sample + 400 µL Haemolyzing Reagent (R3)
2. Seal the tube and mix avoiding foaming.
3. Incubate for a minimum of 5 minutes at room temperature.
Stability: Treated sample is stable up 2 hours at room temperature or 8 h at 2-8ºC.
SPINTECH 240 APPLICATION
Total Hb
Item Name
TKTLIS37-I 23/08/11 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: spinreact@spinreact.com
HbA1C:
HbT
DATA INFORMATION
CALIBRATION
Units g/dL TYPE Linear
Decimals 2
ANALYSIS
STANDARD
Type END #1 Cal.Val.1 #4
#2 #5
W.Length 1 600 #3 #6
W.Length 2
NORMAL RANGE
Method Turbilatex LOW HIGH
SERUM MALE
CORR
FEMALE
SLOPE INTER URINE
1.000 x + 0
Item Name
HbT
ASPIRATION DATA PROCESS ABSORBANCE LIMIT
KIND Single Double READ LOW -3.000
START END HIGH 3.000
VOLUME** MAIN 31 32
SAMPLE 15 L SUB
REAGENT 1 200 L
ENDPOINT LIMIT 3
LINEAR CHECK (%)
FACTOR
Third Mix OFF ON Blank Correction 1.000
R1 Blank Water R1-B
MONITOR
PROZONE CHECK
0 LEVEL POINT 1 START END LIMIT (%)
SPAN 3.000 FIRST
SECOND
Low High
THIRD
Low High
Item Name
HbA1C
DATA INFORMATION
CALIBRATION*
Units g/dL TYPE Spline
Decimals 2
ANALYSIS
STANDARD
Type END #1 Cal.Val.2 #4 Cal.Val.5
#2 Cal.Val.3 #5 Cal.Val.6
W.Length 1 600 #3 Cal.Val.4 #6
W.Length 2
NORMAL RANGE
Method Turbilatex LOW HIGH
SERUM MALE
CORR
FEMALE
SLOPE INTER URINE
1.000 x + 0
Item Name
HbA1C
ASPIRATION DATA PROCESS ABSORBANCE LIMIT
KIND Single Double READ LOW -3.000
START END HIGH 3.000
VOLUME** MAIN 32 40
SAMPLE 5 L SUB
REAGENT 1 125 L
REAGENT 2 125 L ENDPOINT LIMIT 3
LINEAR CHECK (%)
FACTOR
Third Mix OFF ON Blank Correction 1.000
R1 Blank Water R1-B
MONITOR
PROZONE CHECK
0 LEVEL POINT 1 START END LIMIT (%)
SPAN 3.000 FIRST
SECOND
Low High
THIRD
Low High
THIRD
Low High
** Modify reagents and sample volumes according to the range accepted but
keeping always the mentioned ratio.
*Use the first calibrator (CAL1) as blank or 0 value in the calibration curve (use
the Positions B1 or B2 in the calibration disc)
CALCULATIONS
% HbAUBU 1UBU c:
The calculation of the HbAB 1B c concentration is generated using the following
equation:

HbA 1 c
Glycated Hemoglobin
Latex turbidimetry
HbA c (g/dL)
% HbA c 1
1
x100
T.Hb(g/dL)
QUALITY CONTROL
HbAB 1B c Control (ref: 43096) is recommended to monitor the performance of
manual and automated assay procedures. Controls require pretreatment after
being reconstituted.
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
REFERENCE VALUES
Non-diabetics: Between 4-6%.
Controlled diabetics: Between 6-8%.
Uncontrolled diabetics: 20%.
Each laboratory should establish its own reference range to reflect the age, sex,
diet and geographical location of the population.
INTERFERENCESP 10
Bilirrubin (30 mg/dL), tryglicerides (1.6 g/dL) and rheumatoid factors (2000
IU/mL), acetylsalicylic ac. (60 mg/dL), sodium cyanate (50 mg/dL) and urea (500
mg/dL) do not interfere. The labile fraction of glycated hemoglobine does not
interfere, as the antibody is specific for the stable ketamine. Other substances
may interfere.
NOTES
1. Clinical diagnosis should not be made on findings of a single test result, but
should integrate both clinical and laboratory data.
2. Use ClNa 9g/L as a Calibrator 0.
BIBLIOGRAPHY
1. Wolf HU et al. Clin Chem Acta 1984; 136: 83-104.
2. Nathan DM et al. Mne J Med 1094; 310: 341-346.
3. Goldstain DE et al. Clin Chem 1986; 32: B64-B70.
4. Ellis G et al. Clin Chem 1984: 30; 1746-1752.
5. Kenneth H G et al. JCE and M 1977; 44 (5): 859 – 864.
6. Sharp P at al. Ann Clin Biochem 2002; 39: 516 – 517.
7. Middle J . Anna Clin Biochem 2002; 39: 534 – 537.
8. Marshall SM et al. Ann Clin Biochem 2000; 37: 45-46.
9. Young RJ. Ann Clin Biochem 2000; 37: 47-48.
10.Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed. AACC Press, 1995.
PACKAGING
Cont.
HbAB 1B c-Latex (R1)
Agglutinator Reagent (R2)
Haemolyzing Reagent (R3)
Total Hb Reagent (R4)
Ref: TK43090
: 2 x 12.5 mL
: 2 x 12.5 mL
: 2 x 40 mL
: 2 x 25 mL
TKTLIS37-I 23/08/11 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: spinreact@spinreact.com

HbA1c
Hemoglobina Glicosilada
Turbidimetría Látex
Determinación cuantitativa de la hemoglobina glicosilada (HbA 1c)
IVD
Conservar a 2 - 8ºC.
PRINCIPIO DEL MÉTODO
La HbA 1c es un ensayo turbidimétrico para la cuantificación de hemoglobina glicosilada en
sangre total humana. La concentración de HbA 1c se expresa como el porcentaje de
concentración de hemoglobina HbA 1c sobre la hemoglobina total (THb) de la muestra.
La molécula de hemoglobina liberada como consecuencia de lisis de los hematies, es
hidrolizada por acción de una proteasa, y los derivados de hemoglobina resultantes se
convierten en hematina alcalina, que presenta una absorción a 600 nm.
La HbA 1c se mide utilizando un método de inhibición de la aglutinación de partículas de
látex. Las partículas de látex recubiertas con anticuerpo monoclonal anti-HbA 1c compiten
con la HbA 1c de la muestra cuando se mezclan con un reactivo constituido por partículas
de polímero sensibilizadas con haptenos de HbA 1c. La presencia de HbA 1c en la muestra
inhibe la aglutinación de las partículas de látex. El grado de aglutinación de las partículas
es indirectamente proporcional a la concentración de HbA 1c de la muestra y puede
cuantificarse por comparación con un calibrador de concentración de conocida.
SIGNIFICADO CLÍNICO 1-3
La Diabetes Mellitus es una enfermedad crónica caracterizada por la presencia de
hiperglicemia en la sangre del paciente. Las consecuencias más inmediatas son los
trastornos metabólicos de carbohidratos, lípidos y proteínas. El riesgo asociado a las
complicaciones de esta enfermedad, entre las cuales se incluyen la nefropatía, retinopatía y
enfermedades cardiovasculares, aumenta en pacientes con escaso control metabólico. En
los pacientes diabéticos, donde los niveles de glucosa en sangre son elevados, la HbA 1c se
forma como consecuencia de una glicosilación no enzimática del grupo N-terminal de la
cadena de la molécula de hemoglobina. El nivel de HbA 1c es proporcional al nivel de
glucosa en sangre y es ampliamente aceptado como un indicador de la media de
concentración diaria de glucosa durante un periodo de tiempo de 6-8 semanas. Además,
se le considera un indicador de control diabético a largo plazo, mientras que la
concentración de glucosa es solo un indicador de corto plazo (Nota 1) .
REACTIVOS
Reactivo Hemolizante
(R3)
Reactivo Hb Total
(R4)
HbA1c – Látex (R1)
Reactivo Aglutinante
(R2)
Opcional
Pepsina porcina en solución tampón. Conservantes. pH, 2,4.
Sodio hidróxido 0.4%, Triton 2,5%. pH, 13.
Partículas de látex sensibilizadas con anticuerpo monoclonal
anti-HbA 1c (ratón), BSA, detergente 0,6% y Proclin 150
0,1%, en tampón. pH, 8,1.
Haptenos de HbA1c covalentementa unidos a un polímero,
BSA, detergente 0,2% y Proclin 150 0,1%. pH, 2,0.
Ref: 43095 HbA 1c CAL. Calibradores (6) de HbA 1c.
Ref: 43096 HbA 1c CONTROL. Controles (2) de HbA 1c.
PRECAUCIONES
El Reactivo de Hb Total, contiene sodio hidróxido, que es cáustico, y causa quemaduras.
Utilizar guantes. En caso de accidente, lavar el área afectada con abundante agua y
solicitar la ayuda de un médico.
CALIBRACION 7-9
La sensibilidad del ensayo así como los valores de los calibradores han sido
estandarizados con un Material de Referencia Interno, trazable a un método de HPLC para
la HbA 1c y al método de Drabkin’s para la Hb Total.
No es recomendable el uso de otros calibradores de HbA 1c comerciales.
Ensayo de Hb Total: Spinreact recomienda usar el Calibrador de HbA 1c (Ref: 43095) para
la calibración.
Ensayo de HbA 1C: Spinreact recomienda usar el Calibrador de HbA 1c (Ref: 43095) para la
calibración.
Los Calibradores no necesitan pretratamiento.
PREPARACIÓN
Reactivos: Listos para el uso.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el
envase cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, y se evita la contaminación
durante su uso. No utilizar reactivos que hayan sobrepasado la fecha de caducidad.
Indicadores de deterioro de los reactivos: Presencia de partículas y turbidez. Proteger
los reactivos de temperaturas extremas, luz y congelación.
MATERIAL ADICIONAL
- Autoanalizador Spintech 240
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
Se puede usar sangre venosa o capilar.
Se recomienda utilizar EDTA potásico o Heparina amónica como anticoagulantes. Estable
7 días a 2-8ºC ó 3 meses a –20ºC.
Las muestras congeladas deberán descongelarse a temperatura ambiente, y
homogenizarse ligeramente antes de usar.
TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
1. Preparar en un tubo una dilución 1/41 de la muestra en Reactivo Hemolizante:
10 µL sangre total + 400 µL Reactivo Hemolizante (R3)
2. Tapar el tubo y agitar suavemente evitando la formación de espuma.
3. Incubar un mínimo de 5 minutos a temperatura ambiente.
Estabilidad: La muestra tratada es estable 2 horas a temperatura ambiente o 8 horas a
2-8ºC.
APLICACIÓN AL SPINTECH 240
Hb Total:
Item Name
HbT
DATA INFORMATION
CALIBRATION
Units g/dL TYPE Linear
Decimals 2
ANALYSIS
STANDARD
Type END #1 Cal.Val 1 #4
#2 #5
W.Length 1 600 #3 #6
W.Length 2
NORMAL RANGE
Method Turbilatex LOW HIGH
SERUM MALE
CORR
FEMALE
SLOPE INTER URINE
1.000 x + 0
Item Name
HbT
ASPIRATION DATA PROCESS ABSORBANCE LIMIT
KIND Single Double READ LOW -3.000
START END HIGH 3.000
VOLUME** MAIN 31 32
SAMPLE 15 L SUB
REAGENT 1 200 L
ENDPOINT LIMIT 3
LINEAR CHECK (%)
FACTOR
Third Mix OFF ON Blank Correction 1.000
R1 Blank Water R1-B
MONITOR
PROZONE CHECK
0 LEVEL POINT 1 START END LIMIT (%)
SPAN 3.000 FIRST
SECOND
Low High
THIRD
Low High
Item Name
HbA1C
DATA INFORMATION
CALIBRATION*
Units g/dL TYPE Spline
Decimals 2
ANALYSIS
STANDARD
Type END #1 Cal.Val.2 #4 Cal.Val.5
#2 Cal.Val.3 #5 Cal.Val.6
W.Length 1 600 #3 Cal.Val.4 #6
W.Length 2
NORMAL RANGE
Method Turbilatex LOW HIGH
SERUM MALE
CORR
FEMALE
SLOPE INTER URINE
1.000 x + 0
Item Name
HbA1C
ASPIRATION DATA PROCESS ABSORBANCE LIMIT
KIND Single Double READ LOW -3.000
START END HIGH 3.000
VOLUME** MAIN 32 40
SAMPLE 5 L SUB
REAGENT 1 125 L
REAGENT 2 125 L ENDPOINT LIMIT 3
LINEAR CHECK (%)
FACTOR
Third Mix OFF ON Blank Correction 1.000
R1 Blank Water R1-B
MONITOR
PROZONE CHECK
0 LEVEL POINT 1 START END LIMIT (%)
SPAN 3.000 FIRST
SECOND
Low High
THIRD
Low High
THIRD
Low High
HbA1C:
** Modificar los volúmenes de reactivos y muestra en función de los rangos
aceptados pero manteniendo siempre el ratio descrito anteriormente.
* Usar el Calibrador 1 como blanco o valor 0 en la curva de calibración (utilizar la
posición B1 o B2 en el disco de calibración)
CALCULOS
% HbA 1c:
El cálculo del porcentaje de HbA 1c se efectúa mediante la siguiente fórmula:
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HbA1c
Hemoglobina Glicosilada
Turbidimetría Látex
%HbA1
c
HbA1c(g/dL)
x100
T.Hb(g/dL)
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda utilizar sueros control para controlar los ensayos tanto en
procedimiento manual como en automático. Spinreact dispone de sueros control
HbA 1c (Ref: 43096). Los Sueros Control precisan tratamiento previo de la
muestra después de su reconstitución.
Cada laboratorio debería establecer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias
exigidas.
VALORES DE REFERENCIA
No-diabéticos: Entre 4-6%.
Diabéticos controlados: Entre 6-8%.
Diabéticos no controlados: 20%.
Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
INTERFERENCIAS 10
Bilirrubina (30 mg/dL), trigliceridos (1,6 g/dL), factores reumatoides (2000 UI/mL), ac.
acetilsalicílico (60 mg/dL), cianato sódico (50 mg/dL) y urea (500 mg/dL) no
interfieren. La fracción lábil de la hemoglobina glicosilada no interfiere ya que el
anticuerpo es específico de la ketamina estable. Otras sustancias pueden interferir 10 .
NOTAS
1. El diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con los resultados de un
único ensayo, sino que debe considerarse al mismo tiempo los datos clínicos del
paciente.
2. Utilizar ClNa 9 g/L como Calibrador 0.
BIBLIOGRAFÍA
1. Wolf HU et al. Clin Chem Acta 1984; 136: 83-104.
2. Nathan DM et al. Mne J Med 1094; 310: 341-346.
3. Goldstain DE et al. Clin Chem 1986; 32: B64-B70.
4. Ellis G et al. Clin Chem 1984: 30; 1746-1752.
5. Kenneth H G et al. JCE and M 1977; 44 (5): 859 – 864.
6. Sharp P at al. Ann Clin Biochem 2002; 39: 516 – 517.
7. Middle J . Anna Clin Biochem 2002; 39: 534 – 537.
8. Marshall SM et al. Ann Clin Biochem 2000; 37: 45-46.
9. Young RJ. Ann Clin Biochem 2000; 37: 47-48.
10.Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed. AACC Press, 1995.
PRESENTACIÓN
Cont.
HbA 1c-Látex (R1)
Reactivo Aglutinante (R2)
Reactivo Hemolizante (R3)
Reactivo Hb Total (R4)
Ref: TK43090
: 2 x 12.5 mL
: 2 x 12.5 mL
: 2 x 40 mL
: 2 x 25 mL
TKTLIS37-E 23/08/11 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: spinreact@spinreact.com