CRP-ultrasensitive

CRP-ULTRA
CRP-ultrasensitive
Latex turbidimetry
Quantitative determination of low levels of C-Reactive Protein
IVD
Store at 2-8ºC.
PRINCIPLE OF THE METHOD
The CRP-ultrasensitive test is a quantitative immunoturbidimetric assay for the
determination of low levels of C- reactive protein (CRP) in human serum or
plasma.
Latex particles coated with anti-human CRP antibodies are agglutinated when
mixed with samples containing CRP. The agglutination causes an absorbance
change, dependent upon the CRP contents of the patient sample that can be
quantified by comparison against a calibrator of known CRP concentration.
CLINICAL SIGNIFICANCE
A role for inflammation as key pathogenic mechanism in atherosclerosis has
become well established in the past decades. Serum CRP level is increased
during inflammation. CRP assays with sensitivity down to or below 0,3 mg/L
have predictive abilities for cardiovascular disease events 1 .
REAGENTS
Diluent (R1)
Latex (R2)
U-CRP CAL
Tris buffer 20 mmol/L, pH 8.2. Preservative.
Latex particles coated with goat IgG anti- human CRP,
pH 7.3. Preservative.
Liquid Calibrator. C-Reactive protein concentration is
stated on the vial label.
PRECAUTIONS
Components from human origin have tested negative for HBsAg, HCV, and
antibody to HIV (1/2). However handle cautiously as potentially infectious.
Gently swirl the reagents before use, avoiding foam formation.
CALIBRATION
Use CRP Ultra Calibrator included with the kit (Ref. 43035).
The sensitivity of the assay and the target value of the calibrator have been
standardized against the Reference Material ERM-DA 472 of the IFCC.
The calibration in the Spinlab 180 is stable for 1 month.
Recalibrate when control results are out of specified tolerances, when using a
different lot of reagent and when the instrument is adjusted.
PREPARATION
Reagent: Liquid reagents ready for use. Do not mix R1 and R2 before
starting the reaction.
CRP Calibrator: Liquid, ready for use.
Calibration curve: Prepare the following CRP calibrator dilutions in NaCl 9 g/L.
Multiply the concentration of the CRP calibrator by the corresponding factor
stated in table bellow to obtain the CRP concentration of each dilution.
Calibrator Dilution 1 2 3 4 5 6
PCR-u Calibrator (µL)
NaCl 9 g/L (µL)
--
100
5
95
10
90
25
75
50
50
Factor 0 0.05 0.1 0.25 0.5 1.0
STORAGE AND STABILITY
All the components of the kit are stable until the expiration date stated on the
label when stored tightly closed at 2-8ºC and contaminations are prevented
during their use. Do not use reagents beyond the expiration date.
Do not freeze; frozen Latex or Diluent could change the functionality of the test.
Presence of aggregates or particles may indicate reagent deterioration.
ADDITIONAL EQUIPMENT
Instrument to accurately measure time and Absorbance (530-550nm).
Control: Ref: 43036 CRP Ultra Control
Calibrated pipettes.
NaCl 9 g/L.
100
--
4. Pipette into a cuvette:
800 µl R1 (Diluent)
10 µl Sample
5. Mix and incubate 4 minutes at 37ºC.
6. Read absorbance (A1).
7. Incubate 45 seconds at 37ºC.
8. Add 180 µl of R2 (Latex reagent) and mix.
9. Incubate 5 min at 37ºC
10. Read absorbance (A2).
11. Subtract A1 from A2 to obtain the result.
Instructions for many automatic analyzers are available upon request.
QUALITY CONTROL
Control Sera are recommended to monitor the performance of the assay.
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
REFERENCE VALUES
Relative Risk of an event caused by cardiovascular disease and Average
CRP Level:
Low : 3.0 mg/ L 1
Each laboratory should establish its own reference range.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
1. Linearity limit: Up to 10 mg/L. Samples with higher concentrations should
be diluted in NaCl 9 g/L and re-tested.
2. Quantification limit: Values less than 0.20 mg/L give non-reproducible
results.
3. Prozone effect: No prozone effect was detected below 800 mg/L.
4. Precision: The reagent has been tested for 20 days, using three different
CRP concentrations in a CLSI’s EP5-based study.
CV (%)
0.28 mg/L 3.09 mg/L 5.95 mg/L
Total 7.7% 2.7% 3.0%
Within Run 4.5% 1.7% 1.4%
5. Accuracy: Results obtained using this reagent (y) were compared to those
obtained using a commercial reagent (x) with similar characteristics. 23
samples of different concentrations of CRP were assayed. The correlation
coefficient (r) was 0.81 and the regression equation y=0.517x+0.916.
These performance characteristics were studied with Spintech240 and
Spinlab 180. Results may be different with other instruments.
INTERFERENCES
Bilirubin (20 mg/dL), triglycerides (5 g/L) and hemoglobin (5 g/L) do not
interfere. Other substances may interfere 2 .
NOTES
Clinical diagnosis should not be made on findings of a single test result, but
should integrate both clinical and laboratory data.
BIBLIOGRAPHY
1. Pearson T.A. et al., Markers of Inflammation and Cardiovascular Disease -
Application to Clinical and Public Health Practice, Circulation 2003; 107:499-511.
2. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed. AACC Press,
1995.
PACKAGING
Ref: 43134
Cont.
R1. Diluent: 1 x 40 mL
R2. Latex: 1 x 10 mL
U-CRP CAL: 1 x 2 mL
SAMPLES
Fresh serum. Stable 7 days at 2-8ºC or 3 months at –20ºC.
The samples with presence of fibrin should be centrifuged before testing.
Do not use highly hemolized or lipemic samples.
PROCEDURE
Manual procedure:
1. Bring the reagents and the photometer (cuvette holder) to 37ºC.
2. Assay conditions:
Wavelength: 540 nm (530-550)
Temperature: 37ºC
Cuvette light path: 1 cm
3. Adjust the instrument to zero with distilled water.
TLIS46-I 19/03/13 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: spinreact@spinreact.com

CRP-ULTRA
PCR- Ultrasensible
Turbidimetría Látex
Determinación cuantitativa de niveles bajos de Proteína C-Reactiva
IVD
Conservar a 2-8ºC.
PRINCIPIO DEL MÉTODO
El test PCR-Ultrasensible es un ensayo inmunoturbidimétrico para la
cuantificación de niveles bajos de proteína C-reactiva (PCR) en suero o
plasma humano.
Las partículas de látex recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana son
aglutinadas por PCR presente en la muestra del paciente. El proceso de
aglutinación provoca un cambio de absorbancia proporcional a la
concentración de PCR de la muestra, y por comparación con un calibrador de
PCR de concentración conocida se puede determinar el contenido de PCR en
la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLÍNICO
En las últimas décadas se ha reconocido el papel primordial que juega la
inflamación en el mecanismo patogénico de la arteriosclerosis. El nivel de PCR
en suero aumenta durante la inflamación. Tests para PCR con una sensibilidad
hasta 0,3 mg/L tienen capacidad predictiva para eventos causados por
enfermedad cardiovascular 1 .
REACTIVOS
Diluyente (R1)
Látex (R2)
U-CRP CAL
Tampón tris 20 mmol/L, pH 8,2. Conservante.
Partículas de látex cubiertas de IgG de cabra
anti-PCR humana, pH, 7,3. Conservante.
Calibrador líquido. La concentración de PCR
viene indicada en la etiqueta del vial.
PRECAUCIONES
Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el
antígeno HBsAg, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo, deben tratarse
con precaución como potencialmente infecciosos.
Homogeneizar los reactivos con suavidad por inversión antes de utilizar,
evitando la formación de espuma.
CALIBRACIÓN
Usar el Calibrador PCR ultra incluido en el kit (Ref. 43035).
La sensibilidad del ensayo y el valor de concentración del calibrador están
estandarizados frente el Material de Referencia ERM-DA 472 de la IFCC.
La calibración en el Spinlab 180 es estable durante 1 mes.
Recalibrar cuando los resultados del control estén fuera de especificaciones,
cuando se use diferente lote de reactivo y cuando se ajuste el instrumento.
PREPARACIÓN
Reactivo: Reactivo líquido listo para usar. Utilizar por separado R1 y R2 sin
mezclar previamente a la reacción.
Calibrador de PCR-ultra: Listo para su uso.
Curva de calibración: Preparar las siguientes diluciones del calibrador de
PCR-ultra en NaCl 9 g/L. Para obtener las concentraciones de cada dilución de
PCR-ultra, multiplicar la concentración del calibrador de PCR-ultra por el factor
correspondiente indicado en la tabla:
Dilución Calibrador 1 2 3 4 5 6
Calibr. PCR-u (µl)
NaCl 9 g/L (µl)
--
100
5
95
10
90
25
75
50
50
100
--
Factor 0 0,05 0,1 0,25 0,5 1,0
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad
cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC y se evita la
contaminación durante su uso. No utilizar reactivos que hayan sobrepasado la
fecha de caducidad.
La congelación de los reactivos de Látex y Diluyente altera irreversiblemente la
funcionalidad de los mismos.
La presencia de agregados o partículas pueden ser indicativos de un deterioro
del reactivo.
MATERIAL ADICIONAL
Instrumento para medir con exactitud el tiempo y la absorbancia a 530-550nm.
Control: Ref: 43036 PCR Ultra Control
Pipetas volumétricas calibradas.
NaCl 9 g/L.
MUESTRAS
Suero fresco. Estable 7 días a 2-8ºC o 3 meses a -20ºC.
Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas para su
eliminación.
No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipémicas.
PROCEDIMIENTO
Procedimiento manual:
1. Atemperar los reactivos y el fotómetro a 37ºC.
2. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: 540 nm (530-550)
Temperatura: 37ºC
Paso de luz cubeta: 1 cm
3. Ajustar el instrumento a 0 con agua destilada.
4. Pipetear en una cubeta:
800 µl R1 (Diluyente)
10 µl Muestra
5. Mezclar e incubar 4 minutos a 37ºC.
6. Leer absorbancia (A1).
7. Incubar 45 segundos a 37ºC.
8. Añadir 180 µl de R2 (Latex) y mezclar.
9. Incubar 5 min a 37ºC
10. Leer absorbancia (A2).
11. Restar A1 de A2 para obtener el resultado.
Spinreact dispone de programaciones adaptadas a la mayoría de
analizadores automáticos del mercado. Solicite la información a su
distribuidor.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda utilizar sueros control. Cada laboratorio debería establecer
su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los
controles no cumplan con las tolerancias exigidas.
VALORES DE REFERENCIA
Riesgo de evento causado por enfermedad cardiovascular y nivel de PCR:
Bajo: 3.0 mg/L 1
Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia.
CARACTERISTICAS DEL MÉTODO
1. Límite de linealidad: hasta 10 mg/L. Muestras con concentraciones
superiores deben ser diluidas en NaCl 9 g/L y volverse a analizar.
2. Límite de cuantificación: Valores por debajo de 0,20 mg/L dan lugar a
resultados poco reproducibles.
3. Efecto prozona: No se observa hasta valores de 800 mg/L.
4. Precisión: El reactivo ha sido probado durante 20 días con tres
concentraciones diferentes de PCR en un estudio basado en las normas
EP5 (CLSI).
CV (%)
0.28 mg/L 3.09 mg/L 5.95 mg/L
Total 7.7% 2.7% 3.0%
Within Run 4.5% 1.7% 1.4%
5. Exactitud: El comportamiento de este método (y) fue comparado con otro
método (x) de características similares. 23 muestras de diferentes
concentraciones de PCR fueron analizadas con ambos métodos. El
coeficiente de regresión (r) fue de 0,81 y la ecuación de la recta de
regresión y = 0.517x + 0.916.
Las características del método fueron estudiadas con Spintech240 y Spinlab
180. Las características pueden ser distintas con otros instrumentos.
INTERFERENCIAS
Bilirrubina (20 mg/dL), triglicéridos (5 g/L) y hemoglobina (5 g/L) no
interfieren. Otras sustancias pueden interferir 2 .
NOTAS
El diagnóstico clínico no debe basarse en los resultados de un solo test,
debe ser valorado junto a la historia clínica del paciente.
BIBLIOGRAFÍA
1. Pearson T.A. et al., Markers of Inflammation and Cardiovascular Disease -
Application to Clinical and Public Health Practice, Circulation 2003; 107:499-511.
2. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed. AACC Press,
1995.
PRESENTACIÓN
Ref. 43134
Cont.
R1 Diluyente: 1 x 40 mL
R2 Látex: 1 x 10 mL
U-CRP CAL: 1 x 2 mL
TLIS46-E 19/03/13 SPINREACT,S.A/S.A.U.Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: spinreact@spinreact.com