Ensayos de metabolismo microbiano en suelo: actividad ...

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Ensayos para suelos
evaluar suelos degradados y suelos contaminados por metales pesados, plaguicidas
y lluvia ácida (Cochran et al., 1989; Reddy y Faza, 1989; García et al., 1997;
Klein et al., 1971; Chander y Brookes ,1991; Ohlinger, 1986; Schaffer, 1993).
El método está basado en la suposición de que en ausencia de O 2 el cloruro
de 2, 3, 5-trifeniltetrazolium (TTC) actúa cuantitativamente como el aceptor
terminal de H para el sistema dehidrogenasa con la formación del rojo de
trifeniltetrazoliumformazan (TPF).
TTC + 2H + + 2e - → TPF + HCl
Cuando esta prueba se aplica a suelos, las condiciones son hechas anaeróbicas,
tanto para la deshidrogenasa anaeróbica como para la deshidrogenasa
aeróbica y se se asume que usan el TTC como aceptor de H.
Material
Tubos de ensayo de 16 x 150 mm, Vórtex, estufa de incubación ajustable a 37 ˚C,
espectrofotómetro, papel filtro Whatman No. 42.
Reactivos
Acetona o metanol grado analítico, carbonato de calcio (CaCO 3 ), solución
TTC: 3% (peso/volumen) de 2, 3,5-cloruro de trifeniltetrazolium en agua
destilada, solución TPF estándar para la curva de calibración: se disuelven
100 mg de TPF en 80 mL de acetona (1,000 µg TPF/mL) y se aforan con
acetona a 100 mL.
Preparación de la curva de calibración de TPF
Para preparar la curva se pipetean 0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 y 4.0 mL de la solución
estándar de TPF en un matraz volumétrico (50 mL), se adicionan 8.3 mL de
buffer tris (pH 7.6) y se afora a 50 mL con acetona para obtener las siguientes
concentraciones: 0, 10, 20, 40, 60 y 80 µg TPF/mL.
Procedimiento de la prueba
Se pesan tres porciones de suelo húmedo (equivalentes a 6 g de suelo seco)
en tubos de ensayo de 16 x 150 mm a cada tubo se adicionan 67 mg CaCO 3 ,