Ensayos de metabolismo microbiano en suelo: actividad ...

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Ensayos para suelos
Procedimiento de la prueba
Preparación de las muestras
Las muestras de suelos húmedos (25 g en base seca) se pesan (por triplicado) en
frascos de vidrio de 100 mL y se colocan dentro de botellas de vidrio de 1 L, de
boca ancha de color ámbar. Tres muestras de suelo húmedo se congelan inmediatamente
(control) a -20 ˚C. En el fondo de la botella de 1 L se colocan 10 mL
de agua destilada para evitar la deshidratación y un vial con 20 mL de NaOH 1N
para atrapar el CO 2 desprendido durante la incubación. Se tapan las botellas de 1
L con tapas de rosca, perfectamente selladas y se incuban de 7 a 30 días a 25˚C.
Extracción de las muestras
A las muestras pesadas (25 g) por triplicado, en los recipientes de plástico
limpios y secos se les adiciona el K 2 SO 4 0.5 M en una proporción 4:1 (4 mL de
sulfato de potasio por 1 g de muestra seca) y se agita a 200 rpm a temperatura
ambiente por 30 minutos. Terminada la agitación, se filtran inmediatamente
a través de papel Whatman # 42 a un recipiente de plástico limpio y seco. Los
extractos se guardan en congelación (< 5˚C) hasta su análisis.
Determinación de amonio
El nitrógeno orgánico (ejemplo, proteínas y ácidos nucleicos) es convertido
por la descomposición microbiana a amonio. La primera etapa de la hidrólisis
de las proteínas, por ejemplo, es la liberación de aminoácidos, los cuales son
hidrolizados bajo condiciones aeróbicas o anaeróbicas (Jenkinson y Ladd
1981). La velocidad de amonificación depende en la relación C/N de los
compuestos orgánicos, altas tasas de amonificación generalmente ocurren a
una relación baja de C/N (Alef y Kleiner, 1986a; Alef y Kleiner, 1986b; Nannipieri
et al., 1990). Excepto para la hidrólisis de urea por ureasa extracelular,
la amonificación es enlazada al metabolismo de las células activas.
El amonio y el nitrato de la solución del suelo se pueden destilar directamente
sin ninguna preparación de la muestra. La transformación de amonio
a amoniaco, el cual es colectado en el destilado, se logra con la adición de
MgO (Keeney y Nelson, 1982).
Para la determinación de amonio se toma una alícuota de 10 mL de la muestra
extraída con la solución de K 2 SO 4 0.5M en un tubo de destilación de 500