Teórica 10 - Nematodes - Departamento de Biodiversidad y Biología ...

Universidad de Buenos Aires
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental
Fitopatología
Nematodos fitopatógenos
(decimoquinta edición)
MATERIAL DE DOCENCIA
SÓLO USO INTERNO
por Daniel E. Nahabedian D.C.B.,
denaha@bg.fcen.uba.ar 2012 =

Nematodos fitopatógenos Introducción 01
Hasta aproximadamente mediados del siglo pasado (siglo XX), el estudio de
los nematodos no constituyen una materia coherente, debido a que su
estudio estaba condicionado al hábitat. Así encontramos estudios sobre
especies edáficas, marinas, zooparásitas, fitoparásitas, por separado.
Estos animales eran
estudiados en forma
separada por cada grupo
de investigadores.
Alrededor
de 1950
Homogeneidad
morfológica
Varios autores reúnen los
conocimientos básicos y se
comienza el estudio racional
de estos animales.
En la segunda mitad del siglo XX se descubren la mayoría de las especies fitoparásitas.
Tres acontecimientos acrecentaron la necesidad de estudio sobre nematodos.
1) Especialización regional de cultivo de plantas (monocultivos)
=> esto hizo más evidente el ataque de nematodos.
2) Selección y mejoramiento de variedades de plantas más productivas
=> pero menos resistentes a nematodos.
3) La circulación de plantas y productos vegetales sin control
=> dispersión de distintas especies de nematodos.
Consecuencias:
Las especies de nematodos se volvieron cosmopolitas y muy bien adaptadas a
cultivos específicos. =

Morfología básica: Repaso: Animales bilaterales, triploblásticos, 02
Phylum: Nematoda (Gusanos cilíndricos)
Recto
Ano
Intestino
Son gusanos filiformes, no segmentados, de sección
cilíndrica, que miden entre 0,3 y 4 milímetros de
largo por 0,01 por 0,5 milímetros de ancho.
Hembra
Sistema excretor
glandular con canales de
drenaje laterales.
Vulva
Macho
Cloaca
Sistema
reproductor
Intestino
protostomiados, pseudocelomados.
Cavidad
bucal
Faringe
muscular
Glándulas
excretoras
Glándulas
faríngeas
=
Boca
Anillo nervioso
circumentérico

Morfología básica: Con cuatro cordones o pliegues epidérmicos 03
Anatomía
Corte transversal de Ascaris sp.
Cutícula gruesa con papilas sensitivas y
órganos quimiorreceptores.
Sistema nervioso: anillo nervioso
circumentérico y cordones nerviosos
dorsal y ventral, por dentro de pliegues
longitudinales epidérmicos.
H – E
60X
Epidermis
Peculiaridad anatómica:
las células musculares
(sólo longitudinales),
poseen proyecciones
citoplasmáticas hacia los
cordones nerviosos
longitudinales, ventral y
dorsal.
Pseudoceloma
Intestino
= P
Sistema excretor
glandular con
canales de
drenaje laterales,
por dentro de
pliegues
longitudinales
epidérmicos.

Sistema reproductor:
Testículo (1)
Espermatogonias
Sistema
reproductor
macho
Macho con dos
orificios: boca
y cloaca
Intestino Huevos (cigota
encapsulada)
Oviducto
Músculo retractor
Intestino
Vesícula seminal
Espermiducto glandular
Gonoporo femenino (vulva)
Recto
Ovarios (2) Oogonias
Útero
Cloaca
Espermiducto
muscular
Gobernáculo
04
Espículas
(2)
Estructuras
sensoriales
Sistema reproductor
hembra
Puede haber uno o
generalmente dos
ovarios.
Receptáculo seminal
Hembra con tres orificios:
boca, vulva y ano
=

Adaptaciones I ¿Qué hace a un nematodo fitoparásito? 05
Nematodos
parásitos de
vertebrados
8360
Nematodos
parásitos de
invertebrados
3500
Porcentajes
de especies
Nematodos
parásitos de
plantas
4110
Nematodos marinos
4070
Nematodos que pueden aparecer
en la tierra (fitoparásitos + los de
vida libre + los zooparásitos)
Adaptación
El grupo es de abolengo marino
Las adaptaciones se
pueden enmarcar en
dos características:
Nematodos de
vida libre
(tierra – agua)
Pueden llegar
6610
hasta un 40%
A)
Modificación
del sistema
de obtención
del alimento.
B)
Adaptaciones
en el ciclo de
vida
=

Adaptaciones II ¿Cómo comen?
06
A) Modificación del sistema de obtención del alimento.
A1) Estilete bucal (dos sistemas).
A1a) Tubo hueco
Clase Secernentea
Orden TYLENCHIDA
Dorylaimus
A1b) Aguja
Musculatura
protractora
Sólo tubo hueco Sólo tipo aguja
Los estiletes sólo se encuentran
en los nematodos fitoparásitos.
Trichodorus
Musculatura
protractora
Clase Adenophorea,
Orden DORYLAIMIDA
= P

Adaptaciones III 07
A) Modificación del sistema de obtención del alimento. A2) Faringe (esófago).
A2a) Musculatura Faríngea.
A2b) Glándulas faríngeas.
Estilete
Faringe
Procorpus
Metacorpus
(bulbo
medio)
Anillo nervioso
circumesofágico
Doble
bomba
Istmo
Postcorpus
La faringe como las
glándulas faríngeas
no son considerados
como elementos
diferenciadores
para la taxonomía.
Bulbo
faríngeo
medio
Glándulas faríngeas
(una dorsal y dos
ventrolaterales).
Intestino
Estilete
Ditylenchus, ataca a la cebolla,
y produce una licuefacción de
los tejidos.
Secreción “salivar”: posee auxinas,
enzimas digestivas (celulasa, quitinasa,
invertasa) y enzima proteolíticas
(protopectinasa).
Existe una muy estrecha vinculación
entre la composición “salivar” y la
relación planta - huésped.
No sólo los fitoparásitos
presentan glándulas faríngeas.
= P

Adaptaciones IV ¿Cómo viven?
08
B) Adaptaciones en el ciclo de vida
B1) Modificación del ciclo de vida:
B1a) Alargamiento:
Ciclo de vida normal general:
Huevo
Huevo
embrionado
Eclosión
1° juvenil
1° Muda 2° Muda
2° juvenil
3° Muda
3° juvenil
Reproducción
sexual
Adulto
4° Muda 4° juvenil
El ciclo evolutivo de especies de vida libre esta entre: uno corto de
aproximadamente 1 mes de duración, hasta largo de 3 o 4 meses de duración.
En las especies parásitas de plantas se encuentran ciclos de vida cercanos
al año de duración, coincidentes con el ciclo anual de los hospedadores.
B1b) Aumento de
la producción de
huevos.
Objetivo: Conservación y sobrevida
La fecundidad de los nematodos fitoparásitos es generalmente
superior a la fecundidad de las formas de vida libres, pero inferior
a la fecundidad de las especies zooparásitas.
=

Adaptaciones V ¿Cómo se defienden?
09
La conservación de la especie durante la ausencia de la planta - vector esta
favorecida por adaptaciones particulares.
B2) Enquistamiento larvario:
En 1743 Turberville Needham (1713 - 1781), descubre en granos de trigo,
unos gusanos que llamó “anguilas”. Primera cita de nematodos fitoparásitos.
En 1771, Baker, trabajando sobre los mismo granos de trigo, del herbario de
Needham, encuentra los mismos animales descriptos y los llama Anguina
tritici. 27 años después.
Se ha contado hasta 39 años en
Tylenchus polyhyonus. Sólo los
juveniles son los que sobreviven.
Anhidrobiosis
o Anabiosis.
Juvenil
enquistado
Muda anterior
Explicación: Los juveniles
quedan envueltos en la muda
del estado anterior.
=

Adaptaciones VII ¿Quién más se enquista?
10
B3: Enquistamiento de la hembra.
Meloidogyne Protección
de huevos
Hembra
madura
Pasa de una forma filiforme
a una forma globosa
Hembra
grávida
6 años, con una
apreciable sobrevida
Retención de huevos por la hembra.
Se produce por una oxidación
de los polifenoles de la cutícula.
Quiste
Heterodera
Hembra grávida
=

Adaptaciones VIII ¿De qué otra forma
11
protegen a los huevos?
B4: La protección de los huevos.
Los huevos pueden ser puestos, por la hembra, en un saco de protección,
llamado matriz, saco o masa gelatinosa.
Está formada por la secreción de un mucoide, que lo
secreta las glándulas rectales.
Se presenta en Heterodera spp., Meloidogyne spp. y en
los tilénquidos nacóbidos.
Aísla al
embrión del
medio en
forma eficaz,
lo protege
de la
desecación y
hasta del
sulfuro de
carbono.
Matriz, saco o
masa gelatinosa
Saco de
protección
=
Glándula rectal

Resumen: Adaptaciones 12
A) Modificación del sistema de obtención del alimento.
A1) Estilete bucal (dos sistemas).
A1a) Tubo hueco.
A1b) Aguja.
Absorción de
A2) Faringe (esófago).
fluidos
A2a) Musculatura faríngea (esofágica).
A2b) Glándulas faríngeas (esofágicas).
B) Adaptaciones en el ciclo de vida.
B1) Modificación del ciclo de vida
B1a) Alargamiento.
B2) Protección.
B2a) Enquistamiento larvario.
B2b) Enquistamiento de la hembra.
B2c) La protección de los huevos.
Perforación de la
pared celular
Conservación y
sobrevida.
B1b) Aumento de la producción de huevos.
=

Aspectos Ecológicos:
Tres formas alimentación:
1) Saprófagos:
Nutrición: 13
Nematodos que ingieren partículas de materia orgánica.
2) Depredadores: Especies que se alimentan de bacteria, hongos y algas
pequeñas (la mayoría de los nematodos del suelo) (Devoradores de
microbios) y las que se alimentan de organismos relativamente grande como
protozoos, nematodos, rotíferos, etc. (Depredadores, propiamente dichos).
3) Fitoparásitos: Especies que necesitan alimento líquido, contenido celular o
jugos vegetales obtenidos por perforación de las raíces o de las paredes
celulares.
Desde el punto de vista del tipo de materia orgánica consumida, se pueden
dividir en: Materia orgánica no estructurada. Saprófagos
Humedad:
Inundado
Materia orgánica estructurada.
(viva o muerta)
Capacidad
de campo
Vida normal
Depredadores
Fitoparásitos
Punto de marchitamiento
permanente Seco total
Anhidrobiosis
Enquistado
Hay una relación ajustada entre la cantidad de nematodos y la proporción de humedad.
La cantidad de agua que rodea las partículas del suelo, debe estar presente en
cantidades que permita el desplazamiento de los animales.
=

Distribución:
Es debida a la estructura y composición química
del suelo, temperatura, humedad y pH.
Los fitoparásitos puede alcanzar 50% del total de nematodos del suelo.
Se encuentran en los primeros 15 centímetros de profundidad del suelo.
Decayendo el número cerca de la superficie y con la profundidad.
Generalmente, los que se alimentan de bacterias se presentan en gran
número en los campos con estratos arbóreos, en los montones en
descomposición (compost) y los que se alimentan de plantas se presentan
generalmente en los prados y otros hábitat con vegetación densa.
Dependiendo de las condiciones ambientales, se puede encontrar entre 4 y 16
gramos de nematodo, por metro cuadrado de suelo; las cifras calculadas de
nematodos, puede trepar hasta los 12 millones de individuos. Los nematodos
no pueden cambiar las propiedades físicas de los suelos como hacen las
lombrices.
Acción:
Importancia Ecológica:
- Producción primaria
- Descomposición primaria
- Nivel de depredación
14
Destruyen una parte de materia orgánica
formada.
Consumen organismos muertos
(aceleran procesos de degradación).
Consumen bacterias y hongos degradadores
(detienen los procesos de degradación).
Bajan efectos de otras especies de metazoos.
=

Ciclos de Vida I 15
(hacia una clasificación general)
Elementos a tener en cuenta:
Condición
Ectoparásitos
Semiendoparásito
Endoparásito
Endoparásito
Secundariamente Semiendoparásito
Actitud en la dispersión
Juveniles Sedentarios
Juveniles Migradores
Hembras
Forma filiformes
Forma globosas
Puesta
Fuera del hospedador
Dentro del hospedador
Hembra enquistada
Lugar
Sistema radicular
Partes aéreas
=

Ciclos de Vida II
Ectoparásito Semiendoparásito Endoparásito
Semiendoparásito
Puesta externa
Ejemplos:
Endoparásito
Puesta externa
Puesta
externa
Formas
Endoparásito, secundariamente semiendoparásito
Endoparásito
Puesta interna
Hembra
“enquistada”
16
Estilos
parasitarios
Lugar de la
puesta
=

Ciclos de Vida III A clasificar
Estiletes muy largos 17
1: Ectoparásitos
1.1.: Sistema radicular
1.1.1.: Migradores
Doriláimidos
(todos):
(Xiphinema,
Longidorus y
Trichodorus)
legumbres de
huerta.
Tilénquidos:
(Dolichodorus y
Belonolaimus)
pinos, árboles
frutales y cultivos
diversos.
Nivel de
Orden
No quedan
estacionarios
Este Orden es
indicador de suelos
no modificados
Adultos
Juveniles
Atacan los
distintos
estados del
ciclo de vida
Son polífagos, no específicos
Ciclos de vida cortos (meses)
Daños
generalizados
=

Ciclos de Vida IV Más quietos
18
1: Ectoparásitos
1.1.: Sistema radicular
1.1.2.: Sedentarios
Tilénquidos:
Familia CRICONEMATIDAE
(Criconema,
Criconemoides,
Hemicycliophora,
Cacopaurus)
hortalizas, florales y
leñosas.
y PARATYLENCHIDAE
(Paratylenchus pulula)
plantas de ananá
Nivel de
Familia
Esta Familia es
indicadora de
suelos modificados
antrópicamente
Tendencia a perder el estilete, en
machos y juveniles
No son polífagos, son algo específicos
Ciclos de vida largos (meses)
Rodean a las radículas y
quedan estacionarios
=

Ciclos de Vida V Hacia arriba
19
1: Ectoparásitos
1.2.: Partes aéreas
1.2.1.: Migradores
Anguina tritici
(trigo)
Anguina agrostis,
A. pustulicola y
A. graminophila
Un sólo Género
Suben por
plántulas y
permanecen como
ectoparásitos.
Eventualmente
(madurez sexual)
penetran y hacen
“agalla” aéreas.
Muy
específico
Migradores juveniles obligados en
el segundo estadio larval.
Distribución pasiva de las larvas por
rotulación del hombre.
El adulto se puede
desplazar por la
planta (cereal)
“agalla”
Ciclo sincronizado con
el ciclo de vida de la
planta
=

Ciclos de Vida VI específicos y no tan específicos
20
1: Ectoparásitos
1.2.: Partes aéreas
1.2.2.: Sedentarios
Ditylenchu spp.
(alfalfa, arroz y plantas
con bulbos).
Aphelenchoide spp.
(crisantemo, narciso,
fresias, orquídeas y
arroz). Tylenchu spp.
(cítricos, muguete).
Rhadinaphelenchus
cocophilus (cocoteros).
Bursaphelenchus
xylophilus (nematodo
de la madera de pino).
Producen
pudriciones,
cortan la
circulación
Se ubican en
región subcortical
Migradores juveniles no obligados.
Varios
Género
El adulto no se
desplaza por la planta
Son polífagos, no
específicos.
Muchas generaciones
en un año.
El juvenil es
temporalmente
ectoparásito,
penetra en la planta
No
desarrollan
agallas.
=

Ciclos de Vida VII Empezamos otra vez
21
2: Semiendoparásitos
2.1.: Migradores
Subfamilia HOPLOLAIMINAE:
Hoplolaimus (cereal, caña de
azúcar, alfalfa);
Rotylenchus (plantas
tropicales);
Scutellonema y
Helicotylenchus (plantas
bajas).
Tylenchorhynchus
(tabaco, cereal, algodón).
Estos animales penetran parcialmente en los
tejidos del hospedador para nutrirse. Se
localizan especialmente en la zona epidérmica
(cortical) del sistema radicular.
Cuando son juveniles migran y viven
prácticamente como ectoparásitos.
Hay una tendencia al
endoparasitismo.
Cuando las condiciones son adecuadas se multiplican por
miles rápidamente.
Las hembras son filiformes y sólo penetran la corteza de las
raíces cuando están maduras. Cambian de lugar.
Son polífagos en general.
=

Ciclos de Vida VIII
2: Semiendoparásitos
¿Más polífagas?
22
2.2.: Sedentarios
TYLENCHULIDAE:
Tylenchulus semi-penetrans
(cítricos); Rotylenchulus
reniformis (leguminosas);
También Heterodera spp. y
Meloidogyne spp.
Luego de la cópula, la hembra
penetra en el tejido vegetal
para alimentarse por poco
tiempo, pierde la forma
filiforme y sale para colocar la
puesta.
F!
Con puesta de
huevos en el
exterior de la
corteza
La parte
posterior se
hipertrofia
Son polífagas
dentro de un
grupo de plantas
similares
Masa
gelatinosa
Cosmopolitas.
=

Ciclos de Vida IX ¿No son semiendoparásitos?
23
3: Endoparásitos
3.1.: Puestas externas
Nacobbus (maní)
Con modificaciones del cuerpo.
La hembra saca sólo el extremo
posterior del cuerpo en el momento
de poner los huevos.
Masa gelatinosa
=

Ciclos de Vida X ¿Otra vez filiformes?
24
3: Endoparásitos
3.2.: Puestas internas
Tilénquidos:
Pratylenchus,
Pratylenchoides y
Radopholus similis
(banana).
Hembras filiformes
sin modificación
del cuerpo.
Específicos
=

Ciclos de Vida XI ¿Cómo, salen otra vez?
25
4: Endoparásitos, secundariamente semiendoparásitos
4.1.: Puestas externas
Meloidogyne sp.
Masa gelatinosa
(sobre hortalizas, vid, cereales)
La hembra pasa mucho tiempo como endoparásito.
Las hembras pueden ser notadas en las agallas o
nódulos de la raíz antes de poner.
=

Ciclos de Vida XII Al fin
26
4: Endoparásitos, secundariamente semiendoparásitos
4.2.: Enquistamiento
Heterodera glycines
(soja)
Heterodera spp.
(papa)
Las hembras son
fecundadas y aumentan
de tamaño, quedando
como pequeños quistes,
en la zona cortical o
subcortical.
La larva infectiva es el
segundo estadio larvario
Los tejidos vegetales pueden desarrollar agallas
=

Resumen: Ciclos de Vida 27
1: Ectoparásitos
1.1.: Sistema radicular
1.1.1.: Migradores
1.1.2.: Sedentarios
1.2.: Partes aéreas
1.2.1.: Migradores
1.2.2.: Sedentarios
2: Semiendoparásitos
2.1.: Migradores
2.2.: Sedentarios
3: Endoparásitos
3.1.: Puestas externas
3.2.: Puestas internas
4: Endoparásitos,
secundariamente semiendoparásitos
.
.
.
4.1.: Puestas externas
4.2.: Enquistamiento =

Síntomas I (daño).
1) Alteraciones en las partes aéreas:
Aphelenchoides spp.
Anguina spp.
Hoja
normal
¿Qué hacen?
DIRECTO INDIRECTO
Necrosis locales por falta de
irrigación, formación de
agallas y ataque directa a
meristemas.
Hoja atacada en
las nervaduras
CLOROSIS
28
Asociado con
animales que
atacan desde el
suelo.
=

Síntomas II (daño). ¿Y en la raíces?
29
2) Alteraciones del sistema radicular (directo):
No confundir
a) Raíces con nódulos (Meloidogyne, Nacobbus)
b) Pudriciones o Necrosis superficial (Xiphinema, Tylenchus,
Helicotylenchus)
c) Pudriciones o Lesiones internas (Platylenchus, Rodophorus)
d) Malformaciones:
Raíces curvadas
(curly tip)
Agallas de nematodos
Raíces rugosas
(coarse root)
Soja
Raíces erizadas
(stubby root)
Nódulos de Rhizobium
=

Síntomas III (daño). ¿Y en los tejidos?
30
3) Reacciones histológicas de los vegetales:
a) Reacciones de defensa y aislamiento.
b) Hipertrofia del tejido parenquimal.
a
Delaminación
Tejido atacado
Tejido hipertrofiado
Raíz normal
b
Raíz atacada
=

Síntomas IV (daño). Más
31
3) Reacciones histológicas de los vegetales:
c) Necrosis.
d) Formación de agallas en
tejido diferenciado.
c
Masa de nematodos
Necrosis
Meristema
modificado
d
=

Síntomas V (daño). Y más
32
Hoja
normal
3) Reacciones
histológicas en
los vegetales:
Hoja
modificada
Hipertrofia
Nervadura
normal
Nervadura
modificada
=

Resumen: Síntomas 33
1) Alteraciones en las partes aéreas:
DIRECTO
INDIRECTO
2) Alteraciones del sistema radicular:
a) Raíces con nódulos
b) Pudriciones o Necrosis
superficial
c) Pudriciones o Lesiones
internas
d) Malformaciones:
Raíces curvadas
Raíces rugosas
Raíces erizadas
3) Reacciones histológicas de los vegetales:
a) Reacciones de defensa y aislamiento.
b) Hipertrofia del tejido parenquimal.
c) Necrosis.
d) Formación de agallas en tejido diferenciado.
=

Síntomas en cultivos: 33
1) Debilitamiento:
2) Raleo:
2) Manchas de secado:
=

Modificaciones en la fisiología del hospedador
El ataque directo al sistema radicular trae aparejado
problemas en el transporte de sustancias.
Falta de nutrientes
Falta de agua
1) Disminución de la posibilidad de absorber ciertos minerales.
2) Disminución de la vitalidad de reproducción.
Interacciones con otros agentes patógenos.
Daño mecánico
De virus, bacterias,
hongos y otros nematodo.
(complejos patogénicos)
Ejemplo:
Se ha demostrado la inoculación
del Virus del tabaco es debido a
Trichodorus spp. y a Xiphinema
spp. El Virus del anillo negro del
tomate, que también ataca a la
lechuga y a la remolacha es
transmitida por Longidorus spp.
Camino para la infección
SINERGISMO
Pared
celular
1. Virus
2. Bacterias
3. Micoplasmas
4. Protistas
5. Hifa de hongos
6. Nematodos
Núcleo
1
¿Cómo actúan?
2
3
34
Pérdidas: entre el
10% (países
desarrollados) y 15%
(no desarrollados)
6
CLOROSIS
Tamaños
4
5
=

Acción del hospedador sobre los nematodos. ¿Cómo 35
resisten?
Primero hay que definir tres palabras utilizadas indistintamente:
Resistencia: es la acción de la planta sobre la reproducción del nematodo. Una planta
resistente no permite la reproducción del nematodo.
Tolerancia: se limita a los perjuicios medidos como los síntomas y daños producidos.
Una planta tolerante no muestra señales, ni síntomas, ni daños, de la infección por
nematodos.
Incompatibilidad: son los mecanismo fisiológicos que impiden el normal desarrollo de
los nematodos. Una planta incompatible no admite el desarrollo de los nematodos en
su medio interno.
Resistencia:
Tolerancia:
La tolerancia se debe en forma directa
al daño producido, dependiendo en
1) Plantas absolutamente resistentes.
forma directa de la relación planta -
2) Plantas parcialmente resistente.
nematodo.
a) las larvas no se desarrollan.
b) las larvas se desarrollan pero se arrestan en un estadio.
c) las hembras son poco numerosas y poco prolíficas.
3) Plantas sensibles, las hembras son prolíficas.
Incompatibilidad:
El hospedador puede incidir sobre el desarrollo de los parásitos, mediante su fisiología,
regulación metabólica, la producción de sustancias tóxicas o por vía inmunitaria.
=

Métodos de control: ¿Cómo se “lucha”? 36
Control gubernamental: regulación de la introducción y la diseminación de granos y
plantas por medio de leyes internacionales.
Control Físico (tratamiento por calor): inyección de vapor a altas temperaturas.
Control químico: Se aplican en cultivos de alto valor. A. fumigantes del suelo (gas):
[1,3 dicloropropeno (Telone II), cloropicrina (gas lacrimógeno), y dazomet (Basamid)
bromuro de metilo]. B. no fumigantes (líquido o sólido): fenamifos (Nemacur) y
aldicarb (Temik); son insecticidas (venenos nerviosos), no son tan efectivos.
Control biológico: otros nematodos, protistas (microsporidios) y hongos (hipomicetes).
Métodos culturales: cuarentenas; barbecho; desecación; rotación de cultivo; utilización
de razas resistentes; aislamiento del borde; inundación; eliminación de otras plantas;
recuperación del suelo, etc.
Problemática actual:
Portainjertos resistentes, para
nematodos que atacan raíces.
Plantas nematicidas.
Sebos vegetales.
Biofumigación, aumento de la
materia orgánica.
Solarización, secado.
Siembra directa.
A. Límites de tolerancia: nemátodos por 100 g de suelo.
t
B. Umbral económico (UE): cantidad de nematodos donde se debe iniciar el control.
C. Nivel de Daño Económico (NDE): cantidad de nematodos, cuando el rinde es igual a
los gastos. Realizar el tratamiento es aumentar los gastos.
=
n°
NDE
UE
.
.
.

Muestreo I Se trata de encontrar los daño característicos, agallas o 37
¿Qué busco?
Muestreo en campo:
Sacabocado
¿Cómo se muestrea?
Se debe hacer una cuadrícula de muestreo, teniendo
presente que los lugares deben estar distribuidos en
forma pareja sobre el total del terreno y estar
dispuestos al azar. Se pueden agregar muestreos
pilotos, indicativos o siguiendo un interés particular.
La muestra se debe mantener “viva”, no fijarla y protegerla del exceso
de calor o frío. Se puede mantener a 4 °C (heladera).
Se puede considerar muestra a
restos vegetales, o raíces de plantas
supuestamente atacadas.
Levantar los datos necesarios
(fecha, lugar, especie,
ubicación, etc.).
nódulos típicos, los nematodos mismos o los quistes
(hembras enquistadas).
Estas se tomarán en forma delicada,
tratando que los terrones de tierra
queden adheridos a ellas.
Lo ideal es acondicionar la muestra en bolsitas
de plástico, herméticas; tratando de dejarles
una “trampa de aire”, para que no se consuma
el oxígeno y pueda protegerse de accidentes
mecánicos =

Muestreo II Orden !!!!!!!!!
38
Muestreo en campos cultivados:
Guarda recta y en zig-zag.
Patrón para el
muestreo doble en
cultivos frutales y
forestales.
Una muestra
cercana al tronco y
otra en el borde de
la cobertura de
hojas.
Detalle
= P

Separación Luego del muestreo
39
Lámpara
También, en el
embudo se
puede colocar
un vaso de
precipitado
invertido,
cubierto con
una red y
ajustado con
una banda de
goma.
De 24 o 48 horas
Muñeca
(Con tierra o
raíces)
Líquido
Embudo de
vidrio o
plástico
Manguera
de goma
Pinza
Caja de
Petri
Embudo de
Baermann
Estativo
=

Separación de nematodos vivos del suelo y
confección de preparados temporales.
Montado
y sellado
t
Aparato de
Baermann
Observación
in toto
Determinación
Procedimiento general
fijado
Ver el apartado
de Concentración
Aclarado en
lactofenol puro
Observación
in vivo
Lavado y
filtrado
40
=

Concentración I Filtrado diferencial
41
1) Preparación de la muestra
Filtro de 150
micrómetros
de diámetro
Morterear
levemente
con agua
Muestra de
tierra o raíces.
3) Filtrado fino
Descartar
Filtro de 4
milímetros de
diámetro
Conservación a
4°C
2) Filtrado grueso
4) Lavado del filtro
Se acondiciona
en un vaso de
precipitado
Descartar
=

Concentración II Centrifugado diferencial
42
1) 1° centrifugación
2) 2° centrifugación
Conservación a
4°C
Luego del 1° y 2° paso del filtrado diferencial, de la pantalla
anterior: muestra sin tierra gruesa.
Centrifugar a
3000 R.P.M. 4
minutos.
Centrifugar a
3000 R.P.M. 2
minutos.
Nematodos
limpios
Descartar el
sobrenadante
Descartar el
precipitado
Filtro de 150
micrómetros
de diámetro
Resuspender el
precipitado
con una
solución de
45,5 % de
azúcar
Filtrado
y lavado
del filtro
=

Mantenimiento y verificación de
la presencia de fitoparásitos.
Planta
de soja
t = no mayor a
una semana
Inóculo
t
4 °C
t
Para planta
supuestamente enferma
43
dilacerado filtrado
Determinación
dilacerado
Conservación a 4°C
lavado
lavado
filtrado
Filtro de 150 micrómetros
de diámetro =

Estudio de la penetración y ubicación de
los fitoparásitos en la planta huésped.
Semilla de
tomate
Lámina de
plástico gruesa
t
Caja de Petri
Lámina de
plástico fina
Inóculo
1 hora
Para tomate u
otra planta
Observación in vivo
44
=

Procedimientos Soluciones
45
Verificación de quistes (hembras grávidas).
Método del vaso: se disgrega el suelo en agua y se mezcla bien. Se deja reposar y se
coloca y se saca verticalmente y de forma rápida, un papel de diario junto a la pared
del vaso. Los quistes quedan adheridos a él.
Método de la botella: mediante un embudo se llena una botella con la muestra, se llena
de agua hasta un 75% y se agita durante 5 minutos. Se deja reposar. Se agrega agua
hasta el borde. Los quistes flotan en la superficie.
Lavado.
Los nematodos admiten ser lavados dentro del tamaño del tamiz correspondiente, por
soluciones de hipoclorito de sodio al 2,5 % en solución acuosa (agua lavandina diluida
11 veces), durante 5 minutos.
Anestesiado.
Dos gotas de éter etílico en 50 mililitros de agua declorada, en frasco cerrado.
Desanestesiar en agua declorada.
Fijación.
- FAA: 2 mililitros de alcohol etílico; 6 de formol solución comercial;
1 de ácido acético glacial; 40 de agua destilada.
- Ácido acético glacial al 0,5%, entre 60 y 80 °C. Pasar a solución de formaldehído al
5%, salado (36 por mil) y neutralizado pH 7.
Observación.
En cajas de Petri, para microscopio estereoscópico.
Coloración.
“En masa", con verde luz, azul de Nilo o azul de anilina.
Para preparados semidefinitivos: azul de algodón - lactofenol.
=

Clave I Determinación (nivel alto)
46
Estilete
Ausente Presente
Nematodos no parásitos
Presente
SECERNENTEA
TYLENCHIDA
Nematodos parásitos de plantas
Bulbo faríngeo medio
Ausente
ADENOPHOREA
DORYLAIMIDA
=

Clave II Determinación (nivel bajo)
47
ADENOPHOREA
DORYLAIMIDA
Pequeño (menos a 1 mm)
Estilete corto y curvo
Trichodorus
Tamaño
doriláimidos
Grande (mayor a 1 mm)
Estilete largo y recto
Engrosamiento basal del estilete
Presente Ausente
Xiphinema Longidorus
=

Clave III Determinación (nivel bajo)
48
Forma del cuerpo
Globoso Filiforme
Meloidogyne
Heterodera
Globodera
Cricconemella
“Anillación”
Presente Ausente
Forma de la cola
SECERNENTEA
TYLENCHIDA
Redondeada Aguzada
Raíz del estilete
Presente Ausente
Hoplolaimus
Belonolaimus
Scutellonema
Aphelenchus
Grande
(> a 1 mm)
Hemicycliophora
Ditylenchus
tilénquidos
Tamaño
.
.
.
Pequeño
(< a 1 mm)
Paratylenchus
Pratylenchus
Radopholus =

Louis Pasteur
(1822-1895)
Robert Koch
(1843-1910)
La Argentina tiene un déficit
acentuado de estudios sobre
nematodos.
Fitopatología
Nematodos
fitopatógenos
(decimoquinta edición)
Postulados de Koch:
1. El agente patológico debe estar presente en
cada caso de la enfermedad en las condiciones
apropiadas y ausente en los organismos sanos.
2. El agente no debe aparecer en otra
enfermedad de manera fortuita o saprófita.
3. El agente debe ser aislado del cuerpo en un
cultivo puro a partir de las lesiones de la
enfermedad.
4. El agente debe provocar la enfermedad en un
organismo susceptible al ser inoculado.
5. El agente debe ser aislado de nuevo de las
lesiones producidas en los organismos de
experimentación.
En sí, en la Argentina se desconoce sobre la microfauna del
suelo, su composición y su acción; cuál es la incidencia mutua
entre los organismos del suelo y los cultivos; etc.
Gracias
por Daniel E. Nahabedian D.C.B.
MATERIAL DE DOCENCIA
SÓLO USO INTERNO
=