PDF Número - Revista Nefrologia

XLII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Nefrología
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POLIMORFISMO GENÉTICO DE FACTORES DE INFLAMACIÓN Y
SCORE DE ARTERIOESCLEROSIS (ARTS) EN ENFERMEDAD RENAL
CRÓNICA. ESTUDIO A TEIXEIRA
A. OTERO GONZÁLEZ 1
, W.L. LÓPEZ ALARCÓN 1
, S. URIBE MOYA 1
, M. CID 2
, E. OSORIO 2
,
E. COTO 3
, B. TAVIRA 3
, I. CORAO 3
, P. MACIA 4
, M.T. ALVES 5
1
NEFROLOGÍA, COMPLEXO HOSPITALARIO UNIVERSITARIO DE OURENSE, 2
CAP A TEIXEIRA,
OURENSE, 3
GENÉTICA MOLECULAR, HOSPITAL UNIVERSITARIO CENTRAL DE ASTURIAS, OVIEDO.
REDINREN, 4
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA, COMPLEXO HOSPITALARIO UNIVERSITARIO DE
OURENSE, 5
UNIDAD DE INVESTIGACIÓN, COMPLEXO HOSPITALARIO UNIVERSITARIO DE OURENSE
Introducción: La enfermedad vascular (EV) asociada a la enfermedad renal crónica (ERC)
es consecuencia de inflamación, SRAA y factores desencadenantes, como déficit de vitamina
D, fetuina A y mayor expresión de BNPs(2-4) que inducen factores de transcripción
(Cbfa1). La calcificación vascular (CV) puede ocurrir en la íntima, adyacente a una placa o
en la media, pero no se sabe si estas formas de CV son idénticas o son consecuencia de diferentes
factores, aunque con patogenia común. Las asociaciones genéticas pueden representar
los efectos de los genes que subyacen a la Arts independiente de la calcificación.
Material y métodos: Población de A Teixeira (censo: 486 personas), edad media de 60,5.
Se determinó por métodos habituales eFG (CKD-EPI) y genotipos de NOs, ECA, AT1, mDNA,
AGT, CCR2 y CCR5. Se clasificó Arts en EA 0 = ITB > 0,9 y GIM 0 < 0,8; EA1 = ITB 0,7-1,4
y GIM > 0,8; EA2: placa y estenosis < 125 y EA3: ITB < 0,7 0 > 1,4 y/o placas con estenosis
> 125 c/s. La ecografía de TSA (sonda 12 MHz), en pared posterior y en área libre de
ateromas. Se midió índice tobillo/brazo (ITB) por doppler manual.
Métodologia estadística: Análisis descriptivo, test χ2 y prueba de comparación de medias.
Resultados: No se demostró relación significativa entre los grados de Arts y eGFR con los
alelos de NOs, ECA, AT1, mtDNA (C7028T, haplogrupo H), AGT, CCR2 y CCR5. Hay relación
entre mtDNA y función renal (tabla).
Conclusiones: La CV es una enfermedad compleja, en la que múltiples genes condicionan
el fenotipo, pero posiblemente cada gen tenga un «pequeño» efecto en su desarrollo y es
posible que el análisis basado en SNP sea más impreciso, pero GWA pueda identificar con
mayor precisión la patogenia. El mtDNA posiblemente vía estrés oxidativo y/o telomerasa
pueda modificar el «envejecimiento» renal.
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■ Tabla.
PACIENTES CON HIPERHOMOCISTEINEMIA MODERADA
SOMETIDOS A REVASCULARIZACIÓN CORONARIA. EVALUACIÓN
DE PROTEÍNAS S-HOMOCISTEINILADAS EN FRAGMENTOS DE
ARTERIA MAMARIA INTERNA
F. RODRÍGUEZ ESPARRAGÓN 1
, J. SERNA GÓMEZ 1
, Y. HERNÁNDEZ TRUJILLO 1
, N. BUSET RÍOS 1
,
M. GARCÍA BELLO 1
, E. HERNÁNDEZ VELÁZQUEZ 1
, G. ANTÓN PÉREZ 2
, J.C. RODRÍGUEZ PÉREZ 3
1
UNIDAD DE INVESTIGACIÓN, HOSPITAL UNIVERSITARIO DE GRAN CANARIA DR. NEGRÍN, LAS
PALMAS, 2
NEFROLOGÍA, HOSPITAL UNIVERSITARIO DE GRAN CANARIA DR. NEGRÍN, LAS PALMAS,
3
NEFROLOGÍA, HOSPITAL UNIVERSITARIO DE GRAN CANARIA DR. NEGRÍN, LAS PALMAS. UNIVERSI-
DAD DE LAS PALMAS
Introducción: La homocisteína (Hcy) es un factor de riesgo cardiovascular independiente.
La insuficiencia renal, ciertas deficiencias nutricionales y la variante 677T en homocigosis
el gen MTHFR se asocian, entre otros determinantes, con niveles altos entre moderados e
intermedios de Hcy. Algunos autores sugieren comportamientos diferentes de la Hcy plasmática
respecto a la unida a la pared mediante residuos de cisteína (S-homocisteinilación)
o lisina (N-homocisteinilación).
Objetivos: Evaluar en fragmentos de arteria mamaria izquierda (AMI) procedentes de pacientes
sometidos a cirugía de vascularización coronaria los niveles de proteínas homocisteiniladas.
Métodos: Los niveles de homocisteína plasmática total se midieron mediante HPLC. Los
niveles de proteínas homocisteiniladas, como ha sido descrito con anterioridad por Perna
et al. (Kidney International, 2006) con modificaciones.
Resultados: Evaluamos un total de 192 pacientes (86,7% hombres) con una edad media
de 64,1 ± 7,4 años. La concentración plasmática media de homocisteína (tHcy) fue de
12,96 ± 3,9 µM. Todos los pacientes evaluados mostraron valores normales de ácido fólico
y vitamina B12. Los niveles de ácido fólico correlacionaron de forma inversa con los niveles
de tHcy (r = –0,362; p = 0,04). Confirmamos la presencia de homocisteína-S-proteína
(Hcy-S-proteína) en 66 (34,3%) de los fragmentos AMI evaluados. Por el contrario, no
pudimos detectar proteínas unidas a homocisteína mediante enlace amida. El valor medio
de Hcy-S-proteínas fue de 16,44 ± 31,5 µM. El valor medio ajustado al contenido proteico
del homogeneizado fue de 38,6 ± 49 (µM/µg proteína). Los niveles de tHcy no correlacionaron
con los niveles de Hcy-S-proteína en fragmentos AMI. Es más, no encontramos
correlaciones significativas cuando evaluamos la concentración de tHcy o la de Hcy-S-proteína
con el grado de metilación en el promotor del gen Ddah2.
Conclusiones: Los valores de Hcy-S-proteína no correlacionaron con los valores de tHcy
en fragmentos de AMI. Nuestros datos confirman los de otros autores en el sentido de
que la Hcy que se une a residuos proteicos en la pared arterial se comporta de manera independiente
de la tHcy.
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resúmenes
EXPRESIÓN RENAL DE AQUAPORINAS 1 Y 3 EN UN MODELO DE
NEFROPATÍA HIPOPOTASÉMICA
M. VIDAL BLANDINO 1
, B. AMIL PÉREZ 1
, H. GIL PEÑA 2
, F. SANTOS RODRÍGUEZ 2
,
M. ECHEVARRÍA IRUSTA 1
1
INSTITUTO DE BIOMEDICINA DE SEVILLA (IBIS), HOSPITAL UNIVERSITARIO VIRGEN DEL ROCÍO.
CSIC. UNIVERSIDAD DE SEVILLA, 2
DEPARTAMENTO DE PEDIATRÍA, HOSPITAL UNIVERSITARIO
CENTRAL DE ASTURIAS, OVIEDO
Introducción: En el riñón se han identificado varias aquaporinas (AQP1, 2, 3, 4 y 7) que
cumplen la función de permitir el paso de agua de la luz tubular a la sangre, regulando el
volumen urinario. La nefropatía por déficit crónico de potasio es característicamente
poliúrica. Se ha demostrado la expresión disminuida de AQP-2 en la misma, pero se
desconoce si otras AQP renales están afectadas.
Objetivos: Conocer la expresión de AQP1 y 3 en ratas poliúricas con hipokalemia
mantenida inducida por dieta baja en potasio, frente a un grupo control con dieta
normal.
Material y métodos: Ratas Sprague-Dawley prepúberes (21 días) sometidas a dieta baja
(0,01%) en potasio (HIPOK, n = 5) frente a un grupo control con dieta convencional (C, n
= 5). Grupos desarrollados por Gil-Peña y cols. (Am J Physiol Renal Physiol, 2009) de los
que tomamos el volumen de ingesta de agua como estimador de la poliuria, los valores
de bioquímica sanguínea y el tejido renal al sacrificio, incluido en parafina. En cortes de 5
mm se realizó inmunohistoquímica para AQP1 y 3 utilizando anticuerpos (Ab)
policlonales. Se analizó la localización de la señal y, de manera cualitativa, la intensidad
de expresión asignando de 1 a 3 de menor a mayor intensidad. La observación de los
portas se realizó mediante selección aleatoria a simple ciego por dos observadores. Se
comprobó la especificidad de cada Ab mediante controles negativos sin Ab primario.
Resultados: El grupo HIPOK mostró (p < 0,05) concentraciones séricas de potasio
significativamente menores (1,78 vs. 3,81 mEq/l) y un aumento (p < 0,05) en el consumo
de agua como estimador de la poliuria (41,5 vs. 13,9 ml/día). AQP1 mostró una expresión
intensa de la señal (apical y basolateral del túbulo proximal, segmento descendente del
asa de Henle, capilares peritubulares) sin modificación entre grupos. AQP3 mostró una
expresión leve (intensidad de grado 1 en los 5 casos) en las muestras HIPOK y claramente
mayor (de grado 2 en 2 y de grado 3 en 3 casos) en el grupo C, con señal restringida a
los túbulos colectores.
Conclusiones: El presente estudio muestra por primera vez una menor expresión renal
de AQP3 como hallazgo característico de la nefropatía hipopotasémica, contribuyendo a
explicar la poliuria característica de esta entidad por afectación de la reabsorción de agua
en el túbulo colector. AQP1 no se modifica tal vez por ser una proteína estructural de la
membrana.
PACIENTES CON HIPERHOMOCISTEINEMIA MODERADA SOMETIDOS
A CIRUGÍA DE REVASCULARIZACIÓN CORONARIA. ANÁLISIS DE
REGIONES METILADAS EN EL PROMOTOR DEL GEN INOS EN
FRAGMENTOS AÓRTICOS Y DE ARTERIA MAMARIA INTERNA
F. RODRÍGUEZ ESPARRAGÓN 1
, J. SERNA GÓMEZ 1
, Y. HERNÁNDEZ TRUJILLO 1
, N. BUSET RÍOS 1
,
M. GARCÍA BELLO 1
, E. HERNÁNDEZ VELÁZQUEZ 1
, D. RAMÍREZ MEDINA 2
, J.C. RODRÍGUEZ PÉREZ 3
1
UNIDAD DE INVESTIGACIÓN, HOSPITAL UNIVERSITARIO DE GRAN CANARIA DR. NEGRÍN, LAS
PALMAS, 2
NEFROLOGÍA, HOSPITAL UNIVERSITARIO DE GRAN CANARIA DR. NEGRÍN, LAS PALMAS,
3
Genética y biología molecular
NEFROLOGÍA, HOSPITAL UNIVERSITARIO DE GRAN CANARIA DR. NEGRÍN, LAS PALMAS. UNIVERSIDAD
DE LAS PALMAS
Introducción: La aterosclerosis, la enfermedad renal y la hipertensión arterial se asocian con
incrementos en la expresión del gen iNOS. In vitro, en una gran variedad de tipos celulares
es difícil lograr esta inducción a la exposición a citoquinas. Aunque no se han caracterizado
islas CpG en el promotor del gen iNOS, se han aportado evidencias de que la metilación de
dinucleótidos CpG conjuntamente con la metilación del residuo de lisina 9 en la histona H3
están ligadas a la ausencia de inducción del mensajero del gen iNOS en células humanas.
Objetivos: Analizar el grado de metilación global y en regiones específicas en el promotor
del gen iNOS en fragmentos aórticos y de arteria mamaria interna (AMI) en pacientes con
hiperhomocisteinemia moderada, sometidos a cirugía de revascularización coronaria (CRC).
Métodos: Las concentraciones de homocisteína plasmática total (tHcy) se evaluaron por
HPLC. El grado de metilación global se determinó analizando la secuencia completa del
promotor del gen humano iNOS y diseñando primers específicos para metilación (MSP).
En una segunda aproximación, la secuencia del promotor del gen iNOS, para lo cual se
desarrolló un protocolo de Sensitive Melting after Real Time-Methylation Specific PCR
(SMART-MS-PCR).
Resultados: La media de valores de la expresión relativa del gen iNOS resultó superior en
fragmentos aórticos vs. fragmentos de AMI. Se observó una correlación entre los valores de
tHcy con los valores de expresión relativa del gen iNOS en fragmentos AMI (r = 0,653; p =
0,006; n = 14). Por el contrario, no se observaron correlaciones significativas entre los valores
de tHcy y los porcentajes de metilación en el promotor del gen iNOS, evaluados mediante
MSP. Cuando se evaluó el grado de metilación en la región proximal del promotor iNOS
mediante SMART-MS-PCR, los valores de tHcy correlacionaron con los porcentajes de metilación.
Los valores de tHcy y el porcentaje de metilación correlacionaron de forma directa en
AMI (r = 0,943; p = 0,002; n = 6) e inversa en fragmentos aórticos (r = –0,771; p = 0,036;
n = 6). Ninguna de las correlaciones contribuyen de modo significativo a las variaciones de
expresión del gen iNOS.
Conclusiones: Nuestros datos, tras la evaluación distal y proximal de las regiones promotoras
del gen iNOS, argumentan en favor de otros mecanismos a través de los cuales la Hcy
induce variaciones en la expresión del gen iNOS. La contribución del efecto directo de la Hcy
sobre la metilación de dímeros CpG en el promotor del gen iNOS parece ser menor.
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