Revista de la Sociedad de Endodoncia de Chile Nº 23 Abril 2011

este campo la expresión genética de la zona periapical antes y
después del tratamiento endodóntico, es decir analizar el “éxito
del tratamiento” a nivel biomolecular. De todas maneras los
mecanismos moleculares que regulan el proceso inflamatorio,
especialmente el proceso de reparación después del TC en
lesiones periapicales, todavía son muy poco comprendidos.
El análisis de expresión genética utilizando microarray
cADN es una herramienta poderosa para investigar la
etiología y la patofisiología de las enfermedades, incluyendo
las lesiones periapicales (3,4) .
Los ensayos de hibridación en microarray se basan en la
disposición del material genético sobre un substrato, pudiendo
ser este plástico, cristal o membrana en posiciones conocidas,
el material genético que se coloca en el “array” está referido a
un gen de situación y características conocidas. Cada uno de
los puntos del microarray representa un gen y la información
que nos genera se refiere al status de ese gen en la muestra
analizada. El nivel de expresión de un gen se refleja en el
número de copias de mARN presentes en la muestra y, por
tanto, es proporcional al nivel de señal detectado (5) .
En el presente trabajo la muestra se obtuvo de la región
periapical de los 1eros molares de ratas SD. Dicha muestra
fue tratada y marcada (fluorescencia); se colocó en contacto
con el “array” y se realizó la hibridación en aquellas posiciones
que se complementaban con los genes específicos presentes
en el substrato. Los niveles de expresión de los genes se
clasificaron en aquellos que presentaban una ALTA expresión
y los que poseían una BAJA expresión.
Usando la técnica de microarray cADN se dio a conocer
por primera vez un análisis global de la expresión genética en
lesiones periapicales antes y después de un TC. Analizamos
el perfil de expresión genética en lesiones periapicales
para aclarar los mecanismos moleculares de la patología y
también se investigaron los cambios de expresión genética
relacionados con los efectos terapéuticos. También se
determinaron las posibles claves para el diagnóstico de los
procesos de reparación en las lesiones periapicales usando
un análisis inmunohistoquímico.
MATERIALES Y MÉTODOS
Animales: Ratas de la especie Sprague Dawley (SD) de
diez semanas de vida fueron compradas de CLEA (Japón).
Las ratas fueron alimentadas con alimento balanceado en
polvo y agua ad libitum y almacenadas bajo un ciclo de 12
horas diarias y nocturnas. Los animales tuvieron un periodo
de aclimatación de 5 días antes de realizar cualquier tipo
de experimento. El protocolo fue aprobado por el Comité de
cuidado animal de la escuela de Post-Grado de la Facultad
de Medicina, Odontología y Ciencias farmacéuticas de la
Universidad de Okayama, Japón.
Modelo experimental animal de lesiones periapicales
durante el TC:
Los animales fueron anestesiados con pentobarbital
sódico (50mg/Kg; nembutal sódico: Dainippon-Sumitomo
Pharma, Osaka, Japón). Lesiones periapicales fueron
inducidas experimentalmente ocasionando una exposición
pulpar en los primeros molares inferiores de las ratas. Después
de 3 semanas los conductos radiculares fueron preparados
y desinfectados con limas K e irrigados con solución salina
fisiológica. Luego los conductos fueron obturados usando
conos de gutapercha y cemento sellador (Canals N,
Showa Yakuhin Kako, Tokyo, Japón) utilizando la técnica de
condensación lateral. Finalmente la cavidad oclusal fue sellada
con ionómero de vidrio (Cemento de ionómero de vidrio Fuji
tipo II. Tokio, Japón). De acuerdo con el protocolo experimental
(Fig. 1) 4 ratas fueron asignadas a cada grupo, existiendo 3
grupos: el grupo control; el grupo inflamatorio (no recibió TC)
y el grupo post TC (grupo de reparación). De las 4 ratas de
cada grupo, 3 sirvieron para extraer las muestras de ARN y 1
para el examen histopatológico. Las reacciones periapicales
inflamatorias fueron evaluadas radiográficamente utilizando
un aparato portátil (MAX-DC 70: Morita, Osaka Japón). Al
mismo tiempo los tejidos periapicales fueron evaluados
histológicamente en cada grupo de ratas.
Figura 1 Modelo experimental animal (Modificada de Arias Martinez Z. et al;
Gene Profiles during Root Canal Treatment in Experimental Rat Periapical Lesions.
JOE, 33 No 8 August 2007)
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