Revista de la Sociedad de Endodoncia de Chile Nº 23 Abril 2011

Análisis estadístico
Los análisis estadísticos de RT-PCR (qRT-PCR)
fueron realizados usando el Software Stat view 5.0 (Abacus
Concepts, Berkeley,CA). Comparaciones entre 2 grupos fueron
realizadas con el test Student`s T y los valores p menores a
0.05 fueron considerados estadísticamente significativos.
RESULTADOS
Establecimiento de un Modelo Experimental Animal de
Lesiones Periapicales
El protocolo experimental se lo muestra en la Fig. 1.
Para confirmar la presencia de la reacción inflamatoria
en el área periapical se realizó un examen radiográfico
(Fig. 2) e histológico (Fig. 3). Se observó que existió una
reacción inflamatoria dramática, infiltración de leucocitos y
engrosamiento del ligamento periodontal 4 semanas después
de la exposición pulpar en el área periapical. La reacción
inflamatoria disminuyó a las 4 semanas después de la
obturación radicular. De estos resultados se categorizaron
los estadios inflamatorios alrededor de la región periapical
en 3 grupos (sano, inflamatorio, y de reparación). No hubo
diferencias significativas en el peso de las ratas entre los
grupos durante el transcurso de los experimentos.
Figura 3 (Modificada de Arias Martinez Z. et al ; Gene Profiles during Root Canal
Treatment in Experimental Rat Periapical Lesions. JOE, 33 No 8 August 2007)
Análisis de Microarray
Modelos de la expresión global de genes fueron
generados de los microarrays Genechip de Affymetrix usando
ARN total aislado de los tejidos periapicales de cada grupo
(Fig. 4). Nosotros comparamos la expresión genética entre
cada grupo (Sano vs inflamatorio; Sano vs Reparación;
Inflamatorio vs Reparación) y tomamos en cuenta como
“expresión alta” a aquellos genes que multiplicaban 5 veces
su nivel de expresión y como “expresión baja” a aquellos que
se expresaban en un porcentaje menor al 20% del nivel base.
Dentro de los 30.000 genes que se encontraron en el array
comparando el grupo inflamatorio con el grupo control, 203
de ellos mostraron una expresión alta (ej: IL-1 beta, MMP-12,
PDGF-alfa, etc.) y 864 genes mostraron una baja expresión
(Catepsina E, Caspasa 8, Calmodulina 3, etc). En el grupo de
reparación en comparación con el grupo control (410 genes
tuvieron una expresión alta (IL-1 beta, MMP 12, PDGF-alfa,
etc)y 826 genes mostraron una baja expresión (MMP-8,
Precursor de Defensina de rata NP-3, Ciclina E, etc). En el
grupo de reparación en comparación con el grupo inflamatorio,
133 genes mostraron una expresión alta (IL-alfa, MMP-3,
Integrina Beta 6, etc) y 50 genes presentaron una expresión
baja (Proteasa 9 de mastocitos, Precursor de Defensina de
rata NP-3, Defensina-alfa 5, etc). Para validar los hallazgos
genéticos obtenidos en el microarray, PCR cuantitativo
en tiempo real fue realizado utilizando ARN obtenido del
mismo tejido del que se hizo el análisis de microarray. Como
se muestra en la Fig. 2 analizamos diferentes genes, IL-1
beta, caspasa 8, catepsina L, IL-1 alfa, y defensina-alfa 5
utilizando RCP cuantitativo en tiempo real. En general los
niveles de expresión se correlacionaron con los resultados
del microarray.
Figura 4 Análisis de Microarray (Modificada de Arias Martinez Z. et al; Gene
Profiles during Root Canal Treatment in Experimental Rat Periapical Lesions. JOE,
33 No 8 August 2007)
El análisis Ingenuity mostró las posibles interacciones
entre los productos de los genes que estaban con intensidad
alta o baja en el análisis de microarray. Este análisis reveló que
las interacciones son complejas. Algo interesante encontrado
fue que el incremento del gen IL-alfa es un factor importante
en la fase de reparación después de la fase inflamatoria.
También encontramos que el factor de necrosis tumoral (FNT)
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