Ensayo de toxicidad crónica con el alga Selenastrum capricornutum ...

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Ensayos para agua dulce
similar al presentado en el procedimiento complementario de este documento.
Para la aireación, se puede emplear una bomba de aire para acuarios o utilizar
directamente el aire de la línea del laboratorio. En este último caso, se deben
eliminar las impurezas intercalando filtros entre la fuente y el recipiente de
cultivo. Los filtros permiten mantener condiciones axénicas, y eliminan las
partículas sólidas o líquidas (polvo del aire, emulsiones de aceite, etc). Existen
filtros especiales disponibles en el mercado de artículos para laboratorio. En
el caso de no contar con ellos puede fabricarse en el laboratorio, empacando
carbón activado y lana de vidrio.
La manguera se conecta a un tubo hueco de vidrio o a una pipeta despuntada
previamente esterilizada. El tubo se introduce en el medio inoculado
cuidando de que el extremo llegue cerca del fondo del recipiente para que
el burbujeo evite la formación de depósitos de algas. El extremo opuesto, se
conecta a la manguera y deberá sobresalir del recipiente; para ello, se fija a la
boca de la botella de cultivo con un tapón estéril.
Una vez que el cultivo alcanza la fase estacionaria (cinco a siete días), se
retira de la cámara de incubación y se deja reposar a 4 ºC. Esto puede hacerse en
el refrigerador o en el interior de un cuarto frío, bajo condiciones de oscuridad
de 48 a 72 horas. El cultivo sedimentado es separado del sobrenadante por
decantación, lo cual permite obtener el concentrado de algas que se utilizará
en las pruebas de toxicidad o en la alimentación de otros organismos como
es el caso de Daphnia magna. Este medio de proliferación también puede ser
empleado para otras especies de algas tales como Ankistrodesmus sp., Scenedesmus
sp., entre otras.
Control del cultivo
Generalmente las algas se mantienen en tubos de medio sólido estéril inclinados.
El medio sólido se prepara adicionando a la solución de macro y
micronutrientes (descritas anteriormente), agar-agar en una concentración del
1.5 a 2%. En otros casos, las células se mantienen inmovilizadas a una matriz
esférica de alginato. Estas esferas con las células de algas se mantienen en
medio AAP de concentración simple (Blaise et al., 2000) a 4 °C en la oscuridad
hasta por un período de seis meses.
Cualquiera que sea el método de preservación, los cultivos deben renovarse
haciendo nuevos traspasos cada 3 o 6 meses. Bajo condiciones de preservación,
el riesgo de contaminación es menor. Cada vez que se vaya a iniciar un nuevo
cultivo, se desinmovilizan las células o se hace un nuevo traspaso, a partir de